Name: Ontwikkeling van een Direct-Pulp aftopping model voor de evaluatie van pulpal wondgenezing en Reparative Dentin Formation in Muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: Leer directe pulpkapping bij muizen voor tandheelkundig onderzoek naar pulpwondgenezing en reparatief dentinevorming. Deze methode biedt inzicht in biologische processen voor verbeterde behandelingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Deze studie werd ondersteund door R01DE023348 (RHK) van NIDCR / NIH en de Faculteit Research Grant (RHK) van de Raad voor onderzoek van de Academische Senaat van de afdeling Los Angeles van de Universiteit van Californië.

Muizen werden gekocht bij Jackson Laboratory en bewaard in een pathogeen-vrij vivarium in het UCLA afdeling Laboratory Animal Medicine (DLAM). De experimenten werden uitgevoerd volgens de goedgekeurde institutionele richtlijnen van het Comité van de kanselier&#39;s Animal Research (ARC # 2016-037). 1. Mouse verdoving <ol><li> Met acht weken oude vrouwelijke C57 / BL6 muizen (n = 3). </li><li> Verdoven de muizen middels ketamine (80-120 mg / kg muis gewicht) / xylazine (5 mg / kg muis gewicht) oplossingen en beheren intraperitoneaal (ip) bij een dosis van 10 mL / kg. </li><li> Bereid ketamine (80-120 mg / kg) / xylazine (5 mg / kg) en oplossingen dienen ze intraperitoneaal (ip) bij een dosis van 10 mL / kg. </li><li> Controleer of de muizen volledig verdoofd door het uitvoeren van een teen knijpen. </li></ol> 2.-Pulp aftopping Procedure <ol><li> Plaats de mond houder in de mond van de muis. </li><li> Zet de mond houder op de tafel, zodat de hijadvertentie is naar boven gericht. </li><li> Plaats de microscoop (10X) bovenop de mond zodat de eerste bovenkaak molaar volledig zichtbaar. </li><li> Met de ¼-ronde boor in een high-speed handstuk bij 200.000 rpm, verwijdert het glazuur gedeelte van de tand in het midden totdat de pulp zichtbaar door de transparante dentine. Laat de pulp met de boor niet bloot. </li><li> Met behulp van een # 15 endodontic K-bestand (met een diameter van 150 micrometer), perforeren door de dentine en bloot de pulp. LET OP: Speciale aandacht moet worden genomen, zodat de dentine afval niet wordt geduwd in de pulp. Dit kan vermeden worden door rotatie van de K-bestand kwartaal plaatsen en de K-bestand out. </li><li> MTA mengen met steriel H2O volgens de instructies van de fabrikant. Lever en plaats de MTA op de blootgestelde pulp met de punt van de onderzoeker. Gebruik de achterkant van het papier punt (fijn) aan de MTA te verpakken in de blootgestelde pulp door zachtjes te tikken. Hoe dikker zijde van het papier punt is vlak en daarom laatvoor een goede condensatie van de MTA in de blootliggende pulp. </li><li> Etsen tand gedurende 15 s door het plaatsen van het 35% fosforzuur etsmiddel waar het alleen betrekking op de tand. Wees extra voorzichtig om de plaatsing van het etsmiddel te beperken, zoals het tandvlees weefsels kunnen irriteren. Opmerking: Het etsmiddel wordt geleverd in een injectiespuit en wordt gebruikt om de tanden te ruwen zodat adhesieven in kan stromen naar micromechanische binding mediëren op de tand. Omdat ze viskeus, kan het onafhankelijk door toepassing van kleine hoeveelheden direct op de tand. </li><li> Gebruik negatieve druk zuigkracht aan het etsmiddel te verwijderen. Gebruik een wattenstaafje dat licht is doordrenkt met H 2 O om de resten van het etsmiddel te verwijderen. Herhaal deze stap tot het etsmiddel volledig van de tand wordt verwijderd. </li><li> Met behulp van een perslucht stofdoek, voorzichtig droog de tand. </li><li> Breng de dentale hechtmiddelen via de achterzijde van het papier punt. </li><li> Maak de kleeflaag dunne met behulp van perslucht voor 3 s. </li><li> Cure de tandheelkundige kleefstoffen voor 20 s met behulp van de uitharding-light unit. </li><li> Plaats de vloeibare composiet in kleine hoeveelheden op de tand die werd afgesloten met MTA. Gebruik de punt van de verkenner op de samengestelde stromen in de tand groeven. </li><li> Genezen van de composiet gedurende 30 seconden met behulp van een licht uitharden unit te polymeriseren. Bevestigen dat de samengestelde volledig is uitgehard en hard met behulp van de verkenner. </li></ol> 3. Post-op Care <ol><li> Dien carprofen (5 mg / kg) subcutaan (sc) onmiddellijk na de capping-pulp procedure. </li><li> Leg de muizen op een verwarmingselement op laag vermogen om de dieren warm te houden voordat ze wakker worden. </li><li> Zet de muizen om het terrarium voor huisvesting. </li></ol> 4. Tissue Procurement <ol><li> Na 5-6 weken, euthanaseren de muizen door cervicale dislocatie onder een volledige narcose staat met isofluraan. </li><li> Verwijder voorzichtig de bovenkaak uit de basis van de schedel en zet het in een 50-mL buis. Bevestig de entire maxilla dat zowel de pulp bedekte tanden en de contralaterale uncapped tand in 4% paraformaldehyde in PBS, pH 7,4 bevat, bij 4 ° C overnacht, en bewaar vervolgens in een 70% ethanoloplossing. LET OP: Paraformaldehyde is giftig en kankerverwekkend. Het juiste gebruik paraformaldehyde moeten worden gecontroleerd zoals beschreven in de standaard operationele procedures (SOP). </li><li> Scan de muis maxillae met behulp van de μCT scan. Om de maxillae te beveiligen tijdens het scannen, wikkel de monsters met een gaasje doordrenkt met 70% ethanol en plaats ze in de 15-mL celcultuur buis. </li></ol> 5. μCT Scanning <ol><li> Bereid de monsters voor μCT scannen. In het kort, wikkel de monsters met een gaasje doordrenkt met 70% ethanol en zet ze in een algemene 15-mL celkweek conische buis. Monteer de slang op de μCT scannende platform, zoals beschreven in de instructies van de fabrikant. </li><li> Stel de röntgenbron om een ​​stroom van 145 uA, een spanning van 55 kVp en een belichtingstijd van 200 ms. </li><li> Voer beeldacquisitie met de μCT scanner op een 20-um-resolutie en met een 0,5 mm Al filter. </li><li> Reconstrueren van het beeld en visualiseren 11. </li><li> Zodra de μCT scan is voltooid, start ontkalking met 5% EDTA en 4% sucrose in PBS (pH 7,4) gedurende 2 weken. </li></ol> 6. Weefsel bewerken en kleuring <ol><li> Insluiten de ontkalkt weefsels in paraffine. Voor het inbedden, trim de bovenkaak door het maken van een sagittale snede onmiddellijk anterior naar de eerste kies. Terwijl inbedden plaatst dit oppervlak omlaag, zodat de langsdoorsnede van de eerste molaar is het snijoppervlak. </li><li> Met behulp van de microtoom, voor te bereiden 5 urn dikke dia&#39;s. De pulp capping gebieden meestal samen met de distopalatal (DP) wortel, die kan worden gebruikt als een mijlpaal. Bepaal het precieze gebied van belang door onderzoek van de histologie onder de lichtmicroscoop en het vergelijken van de μCT beelden. </li><li> Voor H &amp; E kleuring, deparaffinize en hydrateren de glaasjes met xyleen (2 x) en serieel verdunde ethanol (100% EtOH 2x, 95% EtOH 2x en 70% EtOH 1x). </li><li> Spoel de dia&#39;s met stromend water. </li><li> Vlek met Hematoxylin oplossing voor 2,5 minuten en spoel af met leidingwater. </li><li> Dompel de glaasjes in 95% ethanol gedurende 1 minuut. </li><li> Vlek met Eosine oplossing voor 1 min en spoel af met leidingwater. </li><li> Dehydrateren met serieel verdunde ethanol (70% EtOH 1x, 95% EtOH 2x en 3x 100% EtOH) en xyleen (3x). </li><li> Monteer de dia&#39;s met montage-oplossing. </li></ol>

<ol><li>Dye, B., Thornton-Evans, G., Li, X., Iafolla, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+caries+and+tooth+loss+in+adults+in+the+United+States%2C+2011-2012%5BTitle%5D)+AND+%22NCHS+Data+Brief%22%5BJournal%5D)">Dental caries and tooth loss in adults in the United States, 2011-2012.</a> NCHS Data Brief. (197), 197(2015).</li>
<li>Bagramian, R. A., Garcia-Godoy, F., Volpe, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+global+increase+in+dental+caries.+A+pending+public+health+crisis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Dent%22%5BJournal%5D)">The global increase in dental caries. A pending public health crisis.</a> Am J Dent. 22 (1), 3-8 (2009).</li>
<li>Koliniotou-Koumpia, E., Tziafas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulpal+responses+following+direct+pulp+capping+of+healthy+dog+teeth+with+dentine+adhesive+systems%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent%22%5BJournal%5D)">Pulpal responses following direct pulp capping of healthy dog teeth with dentine adhesive systems.</a> J Dent. 33 (8), 639-647 (2005).</li>
<li>Tarim, B., Hafez, A. A., Cox, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulpal+response+to+a+resin-modified+glass-ionomer+material+on+nonexposed+and+exposed+monkey+pulps%5BTitle%5D)+AND+%22Quintessence+Int%22%5BJournal%5D)">Pulpal response to a resin-modified glass-ionomer material on nonexposed and exposed monkey pulps.</a> Quintessence Int. 29 (8), 535-542 (1998).</li>
<li>Tziafa, C., Koliniotou-Koumpia, E., Papadimitriou, S., Tziafas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dentinogenic+responses+after+direct+pulp+capping+of+miniature+swine+teeth+with+Biodentine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endod%22%5BJournal%5D)">Dentinogenic responses after direct pulp capping of miniature swine teeth with Biodentine.</a> J Endod. 40 (12), 1967-1971 (2014).</li>
<li>Dammaschke, T., Stratmann, U., Fischer, R. J., Sagheri, D., Schafer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+histologic+investigation+of+direct+pulp+capping+in+rodents+with+dentin+adhesives+and+calcium+hydroxide%5BTitle%5D)+AND+%22Quintessence+Int%22%5BJournal%5D)">A histologic investigation of direct pulp capping in rodents with dentin adhesives and calcium hydroxide.</a> Quintessence Int. 41 (4), 62-71 (2010).</li>
<li>Jegat, N., Septier, D., Veis, A., Poliard, A., Goldberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-term+effects+of+amelogenin+gene+splice+products+A%2B4+and+A-4+implanted+in+the+exposed+rat+molar+pulp%5BTitle%5D)+AND+%22Head+Face+Med%22%5BJournal%5D)">Short-term effects of amelogenin gene splice products A+4 and A-4 implanted in the exposed rat molar pulp.</a> Head Face Med. 3, 40(2007).</li>
<li>Paterson, R. C., Radford, J. R., Watts, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+response+of+the+rat+molar+pulp+of+two+proprietary+calcium+hydroxide+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Br+Dent+J%22%5BJournal%5D)">The response of the rat molar pulp of two proprietary calcium hydroxide preparations.</a> Br Dent J. 151 (6), 184-186 (1981).</li>
<li>Sela, J., Ulmansky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reaction+of+normal+and+inflamed+dental+pulp+to+Calxyl+and+zinc+oxide+and+eugenol+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Surg+Oral+Med+Oral+Pathol%22%5BJournal%5D)">Reaction of normal and inflamed dental pulp to Calxyl and zinc oxide and eugenol in rats.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 30 (3), 425-430 (1970).</li>
<li>Maurice, C. G., Schour, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+cavity+preparations+in+the+molar+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Experimental cavity preparations in the molar of the rat.</a> J Dent Res. 34 (3), 429-434 (1955).</li>
<li>Skyscan, N. V. NRecon user manual. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://bruker-microct.com/next/NReconUserGuide.pdf">http://bruker-microct.com/next/NReconUserGuide.pdf</a> (2011).</li>
<li>Sohn, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+ORAI1+in+the+Odontogenic+Differentiation+of+Human+Dental+Pulp+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">The Role of ORAI1 in the Odontogenic Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells.</a> J Dent Res. 94 (11), 1560-1567 (2015).</li>
<li>Kim, S., Shin, S. J., Song, Y., Kim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Experiments+with+Dental+Pulp+Stem+Cells+for+Pulp-Dentin+Complex+Regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Mediators+Inflamm%22%5BJournal%5D)">In Vivo Experiments with Dental Pulp Stem Cells for Pulp-Dentin Complex Regeneration.</a> Mediators Inflamm. 2015, 409347(2015).</li>
<li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+%28DPSCs%29+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (25), 13625-13630 (2000).</li>
<li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odontogenic+capability%3A+bone+marrow+stromal+stem+cells+versus+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Odontogenic capability: bone marrow stromal stem cells versus dental pulp stem cells.</a> Biol Cell. 99 (8), 465-474 (2007).</li>
<li>Zhu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+dental+pulp+stem+cells+and+platelet-rich+plasma+for+pulp+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endod%22%5BJournal%5D)">Transplantation of dental pulp stem cells and platelet-rich plasma for pulp regeneration.</a> J Endod. 38 (12), 1604-1609 (2012).</li>
<li>Iohara, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dentin+regeneration+by+dental+pulp+stem+cell+therapy+with+recombinant+human+bone+morphogenetic+protein+2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Dentin regeneration by dental pulp stem cell therapy with recombinant human bone morphogenetic protein 2.</a> J Dent Res. 83 (8), 590-595 (2004).</li>
<li>Saito, K., Nakatomi, M., Ida-Yonemochi, H., Ohshima, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteopontin+Is+Essential+for+Type+I+Collagen+Secretion+in+Reparative+Dentin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Osteopontin Is Essential for Type I Collagen Secretion in Reparative Dentin.</a> J Dent Res. , (2016).</li>
<li>Hunter, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+Acts+as+a+Pro-Survival+Signal+to+Enhance+Dentin+Regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Wnt Acts as a Pro-Survival Signal to Enhance Dentin Regeneration.</a> J Bone Miner Res. , (2015).</li>
<li>Goldberg, M., Kulkarni, A. B., Young, M., Boskey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dentin%3A+structure%2C+composition+and+mineralization%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci+%28Elite+Ed%29%22%5BJournal%5D)">Dentin: structure, composition and mineralization.</a> Front Biosci (Elite Ed). 3, 711-735 (2011).</li>
<li>Nascimento, A. B., Fontana, U. F., Teixeira, H. M., Costa, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocompatibility+of+a+resin-modified+glass-ionomer+cement+applied+as+pulp+capping+in+human+teeth%29%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Dent%22%5BJournal%5D)">Biocompatibility of a resin-modified glass-ionomer cement applied as pulp capping in human teeth).</a> Am J Dent. 13 (1), 28-34 (2000).</li>
<li>Bogen, G., Kim, J. S., Bakland, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+pulp+capping+with+mineral+trioxide+aggregate%3A+an+observational+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Dent+Assoc%22%5BJournal%5D)">Direct pulp capping with mineral trioxide aggregate: an observational study.</a> J Am Dent Assoc. 139 (3), 305-315 (2008).</li>
<li>Miller, R. A., Nadon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+animal+use+for+gerontological+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gerontol+A+Biol+Sci+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Principles of animal use for gerontological research.</a> J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 55 (3), 117-123 (2000).</li>
<li>Shah, A., Song, M., Cao, Y., Kang, M. K., Kim, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoclasts+are+absent+in+pulpal+and+periapical+inflammatory+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Osteoclasts are absent in pulpal and periapical inflammatory lesions.</a> J Dent Res. 95, 1503(2016).</li>
<li>Williams, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+bone+resorption+and+woven+bone+formation+are+associated+with+development+of+osteonecrosis+of+the+jaw-like+lesions+by+bisphosphonate+and+anti-receptor+activator+of+NF-kappaB+ligand+antibody+in+mice%29%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Impaired bone resorption and woven bone formation are associated with development of osteonecrosis of the jaw-like lesions by bisphosphonate and anti-receptor activator of NF-kappaB ligand antibody in mice).</a> Am J Pathol. 184 (11), 3084-3093 (2014).</li>
<li>McPherson, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+physical+map+of+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A physical map of the human genome.</a> Nature. 409 (6822), 934-941 (2001).</li>
<li>Gregory, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+physical+map+of+the+mouse+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A physical map of the mouse genome.</a> Nature. 418 (6899), 743-750 (2002).</li>
<li>Hilton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Keys+to+clinical+success+with+pulp+capping%3A+a+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Oper+Dent%22%5BJournal%5D)">Keys to clinical success with pulp capping: a review of the literature.</a> Oper Dent. 34 (5), 615-625 (2009).</li>
<li>Holmdahl, R., Bockermann, R., Backlund, J., Yamada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+pathogenesis+of+collagen-induced+arthritis+in+mice--a+model+for+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Ageing+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">The molecular pathogenesis of collagen-induced arthritis in mice--a model for rheumatoid arthritis.</a> Ageing Res Rev. 1 (1), 135-147 (2002).</li>
<li>Kalu, D. N., Chen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovariectomized+murine+model+of+postmenopausal+calcium+malabsorption%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Ovariectomized murine model of postmenopausal calcium malabsorption.</a> J Bone Miner Res. 14 (4), 593-601 (1999).</li>
<li>Yokochi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+experimental+murine+model+for+lipopolysaccharide-mediated+lethal+shock+with+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Innate+Immun%22%5BJournal%5D)">A new experimental murine model for lipopolysaccharide-mediated lethal shock with lung injury.</a> Innate Immun. 18 (2), 364-370 (2012).</li>
<li>Abe, T., Hajishengallis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+ligature-induced+periodontitis+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of the ligature-induced periodontitis model in mice.</a> J Immunol Methods. 394 (1-2), 49-54 (2013).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Momenteel zijn er verschillende experimentele modellen voor de in vivo effecten van tandheelkundige materialen, scaffolds of groeifactoren op odontogene differentiatie van dentale pulp stamcellen (DPSC&#39;s) 13 te valideren. Deze modellen omvatten ectopische autologe transplantatie van DPSC&#39;s in een orgaan, zoals de renale capsule of subcutane transplantatie van DPSC in immuungecompromitteerde muizen met steigers 14,15. Echter, deze methoden beperkt hun odontogene effect op DPSC&#39;s...

Tandcariës is een van de meest voorkomende orale ziekten en de belangrijkste oorzaak van chirurgische ingrepen aan de gebitsopstelling bij bijna alle individuen1,2. De prognose van chirurgische ingrepen en restauraties van een tand hangt grotendeels af van een goede pulpale respons en succesvolle wondgenezing. Inderdaad, tandcariës die diep door het tandglazuur en dentine penetreren, leiden vaak tot de blootstelling van het onderliggende pulpweefsel dat vaak wordt "afgedekt" met tandheelkundige materialen, zoals calciumhydroxide (Ca(OH)2) of hydraulische calcium-silicaatcementen (HCSC's), inclusief minerale trioxide aggregaten (MTA). Het uiteindelijke doel van een dergelijke pulpa-afdekprocedure is om de pulpale wondgenezing te versnellen door regeneratieve dentine te vormen, een fysische barrière die functioneert als een "biologische afdichting" om het onderliggende pulpweefsel te beschermen en de levensverwachting van de tand en de algehele mondgezondheid te verlengen. De onderliggende mechanismen van pulpale wondgenezing en regeneratieve dentinevorming zijn echter niet volledig begrepen.
Om de mechanismen van pulpale wondgenezing en regeneratieve dentinevorming in vivo beter te begrijpen, zijn eerder verschillende dieren gebruikt, waaronder apen, honden en varkens3-5. Onder hen worden ratten vaak gebruikt omdat ze relatief kleiner zijn in vergelijking met de andere dieren, maar hun tanden zijn groot genoeg om directe pulpa-afdekking uit te voeren zonder technische moeilijkheden6-10. Deze diermodellen zijn ideale alternatieven voor menselijke studies om pulpale reacties en regeneratieve dentinevorming te onderzoeken. Hun gebruik is echter beperkt tot observationele studies op cellulair niveau en ze geven nauwelijks mechanistische inzichten tijdens de regeneratieve dentinevorming op moleculair niveau.
Recente technische vooruitgang in genetische techniek heeft waardevolle en onmisbare onderzoeksinstrumenten opgeleverd - muizen die een gen bevatten dat ofwel overgeëxpresseerd of verwijderd is - die onmisbaar zijn voor het bestuderen van moleculaire mechanismen van menselijke ziekten in vivo. Het aantal verschillende stammen van transgene of knockout muizen die op strategische wijze op celspecifieke wijze inducibel zijn, groeit voortdurend in de wetenschappelijke gemeenschap. Daarom zou het onderzoeken van pulpale wondgenezing en regeneratieve dentine in deze muizen sterk helpen om ons begrip van deze processen op moleculair niveau te versnellen. Het gebruik van muizen wordt echter aanzienlijk geremd, omdat het uitvoeren van een pulpa-afdekprocedure op een muis-tand technisch uitdagend is vanwege de miniatuurgrootte. Hier presenteren we onze reproduceerbare methode om directe pulpa-afdekking uit te voeren bij muizen voor de evaluatie van pulpale wondgenezing en regeneratieve dentinevorming in vivo.

<table><tbody><tr><td>BM-LED stereo microscope</td><td>MEIJI Techno</td><td></td><td>Microscoop&nbsp;</td></tr><tr><td>Optima MCX-LED&nbsp;</td><td>Bien Air Dental</td><td>1700588-001</td><td>Elektrische motormotor</td></tr><tr><td>isoflurane</td><td>Henry schein diergezondheid</td><td>NDC 11695-0500-2</td><td></td></tr><tr><td>1/4 ronde stift</td><td>Brasseler</td><td>001092T0</td><td></td></tr><tr><td>Endodontische K-file</td><td>Roydent</td><td>98947</td><td></td></tr><tr><td>ProRoot MTA</td><td>Dentsply</td><td>PROROOT5W</td><td>MTA</td></tr><tr><td>Papier punt</td><td>Henry schein</td><td>100-3941</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-Etch</td><td>Ultradent product Inc.</td><td></td><td>Fosforzuur etser</td></tr><tr><td>OptiBond SoloPlus</td><td>Kerr</td><td>29669</td><td>Klevende middelen</td></tr><tr><td>Coltolux LED</td><td>Coltene/whaledent Inc.</td><td>C7970100115</td><td>Uithardingslicht unit</td></tr><tr><td>Karakterisering tint</td><td>Bisco</td><td>T-14012</td><td>Flowable composiet</td></tr><tr><td>Skyscan</td><td>Breuker</td><td>1275</td><td>uCT scanner</td></tr><tr><td>Microm</td><td>Thermo</td><td>HM355S</td><td>Microtoom</td></tr><tr><td>Hematoxyline-1</td><td>Thermo Scientific</td><td>7221</td><td></td></tr><tr><td>Eosin-Y</td><td>Thermo Scientific</td><td>7111</td><td></td></tr><tr><td>Cytoseal 60</td><td>Thermo Scientific</td><td>8310-16</td><td>Montage oplossing</td></tr></tbody></table>

ontwikkeling van een direct-pulp aftopping model voor de evaluatie van pulpal wondgenezing en reparative dentin formation in muizen

Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice

De tandpulp is een vitaal orgaan van een tand dat volledig beschermd wordt door glazuur en dentine. Wanneer de pulp wordt blootgesteld door cariogeen of iatrogeen letsel, wordt deze vaak bedekt met biocompatibele materialen om de genezing van de pulpwond te versnellen. Het uiteindelijke doel is het regenereren van reparatieve dentine, een fysische barrière die functioneert als een "biologische verzegeling" en het onderliggende pulpweefsel beschermt. Hoewel deze directe pulpkappenprocedure al lang wordt gebruikt in de tandheelkunde, is het onderliggende moleculaire mechanisme van pulpgenezing en de vorming van reparatief dentine nog steeds slecht begrepen. Om reparatief dentine te induceren, is pulpkappen experimenteel uitgevoerd bij grote dieren, maar minder bij muizen, waarschijnlijk vanwege hun kleine omvang en de daaruit voortvloeiende technische moeilijkheden. Hier presenteren we een gedetailleerde, stap-voor-stap methode om een pulpkappenprocedure bij muizen uit te voeren, inclusief de voorbereiding van een Klasse-I-achtige holte, het plaatsen van pulpkappenmaterialen en de restauratieprocedure met behulp van tandcomposiet. Ons pulpkappen muismodel zal instrumenteel zijn bij het onderzoeken van de fundamentele moleculaire mechanismen van pulpgenezing in de context van reparatief dentine in vivo door het mogelijk te maken om transgene of knockout-muizen te gebruiken die wijd beschikbaar zijn in de onderzoeksgemeenschap.

Hier toonden we de procedures stap-voor-stap om pulp uit te voeren aftopping op muizen tanden. Een van de belangrijkste aspecten van de pulp aftopping in muizen is om de juiste apparatuur hebben. In dit verband heeft de microscoop met 10x vermogenvergroting essentieel (Figuur 1A). Een klasse-I-achtige preparaat in de tand maken, gebruikten we een ¼-round burr in een elektrische hoge snelheid handstuk bij 200.000 rpm (Figuur 1B). Alternatief andere motore...

We beschrijven een stap voor stap methode om direct pulp aftopping op muizen tanden voor de evaluatie van pulpa wondgenezing en vorming herstellende dentine in vivo.

Ontwikkeling van een Direct-Pulp aftopping model voor de evaluatie van pulpal wondgenezing en Reparative Dentin Formation in Muizen

Dental pulp is a vital organ of a tooth fully protected by enamel and dentin. When the pulp is exposed due to cariogenic or iatrogenic injuries, it is ...

Het algemene doel van dit protocol is om de directe pulpa-cappingprocedure bij muizen te presenteren. Deze methode kan u helpen antwoorden te geven op belangrijke vragen in de pulpbiologie, zoals hoe pulp geneest, of hoe reparatieve dentine zich vormt, wanneer u gevangen pulpa-cappingmaterialen op de blootgestelde pulp plaatst. Het grote voordeel van deze techniek is dat de eigenlijke directe pulpa-cappingprocedure die bij mensen wordt uitgevoerd, ook bij muizen kan worden uitgevoerd, op precies dezelfde manier.De implicaties van deze techniek strekken zich uit tot het verbeteren van materiaaleigenschappen om tanden te redden die anders zouden zijn veroordeeld tot meer invasieve behandelingen, zoals wortelkanaalbehandeling. Nadat u de muis goed hebt verdoofd voor de procedure, plaatst u de mondhouder in zijn mond en bevestigt u het andere uiteinde aan de tafel zodat de kop naar boven is gericht. Gebruik goede verlichting en een stereoscoop om de eerste maxillaire kies te observeren.Gebruik vervolgens de kwart-ronde ronde slijpsteen in een hoogsnelheidshandapparaat met 200.000 tpm om het centrale gebied van het glazuur van de tand te verwijderen totdat het pulp zichtbaar is door het transparante dentine. Wees voorzichtig om niet in het pulp door te dringen. Gebruik vervolgens een nummer.15 endodontische k-bestand, om het dentine te doorboren en het pulp bloot te leggen. Duw geen puin in het pulp; dit kan worden vermeden door de k-bestand een kwartslag te draaien en vervolgens de k-bestand eruit te trekken. Bereid nu de MTA voor en breng de MTA aan met behulp van de explorer, en vervolgens in het blootgestelde gebied verpakken met behulp van de achterkant van het papierpunt en zachtjes tikken.Gebruik vervolgens een spuit geladen met 35%fosforzuur etser om de tand te bedekken met de etser, waarbij u het tandvlees vermijdt, en laat de etser 15 seconden werken. Na 15 seconden, zuigt u de etser van de tand en gebruikt u een met water bevochtigde wattenstaafje om eventuele resterende etser af te vegen. Zuig en veeg totdat alle etser is verwijderd.Breng vervolgens de tandheelkundige kleefstoffen aan met behulp van de achterkant van het papierpunt. Maak de kleurlaag dun door deze enkele seconden met perslucht te blazen. Laat vervolgens de kleefstof 30 seconden uitharden met de juiste lamp.Plaats nu kleine hoeveelheden composiet op de tand met behulp van de punt van de explorer om het composiet in de groeven van de tand te laten stromen. Na het aanbrengen, laat de composiet 30 seconden uitharden. Na het euthanaseren van de muis en het verwijderen van de gehele maxilla, plaatst u de kaak in 4%paraformaldehyde in PBS bij een pH van 7,4.Bewaar het weefsel een nacht bij 4 graden Celsius en breng het de volgende ochtend over in 70%ethanol voor opslag tot het kan worden verwerkt. Om een micro CT-scan van de maxilla uit te voeren, bevestigt u deze eerst in gaas gedrenkt in 70%ethanol en vervolgens in een 15 milliliter celcultuurbuisje. Monteer vervolgens de buis op de micro CT-scanfase.Stel vervolgens de röntgenbron in om een stroom van 145 microamp met 55 piek kilovolt gedurende 200 milliseconden af te geven. Gebruik een 0,5 millimeter aluminium filter om afbeeldingen met een resolutie van 20 micron te verkrijgen. Nadat de scans zijn voltooid, begint u met het ontkalken van de maxilla met 5%EDTA en 4%sucrose in PBS, bij een pH van 7,4.Laat deze reactie twee weken bij 4 graden Celsius doorgaan. Na het inbedden van de maxilla, maakt u vijf micron dikke plakjes. De pulpa-cappinggebieden vallen meestal samen met de distale palatinale wortel, die als een herkenningspunt kan worden gebruikt.Bepaal het precieze gebied van belang door de histologie onder de lichtmicroscoop te onderzoeken en de resultaten te vergelijken met de micro CT-scans. Voor H&E-kleuring verwijdert u het paraffine en herhydrateert u de dia's met twee baden in xyleen gedurende enkele minuten elk. Breng ze vervolgens door een reeks stapvoezig verdunde ethanol.Elk bad moet slechts een minuut worden aangebracht. Volg de herhydratie met een spoeling. En breng vervolgens de hemotoxylin-oplossing gedurende twee en een halve minuut aan.Verwijder de kleurstof met een spoeling en plaats de dia's vervolgens een minuut in 95%ethanol. Vervolgens worden de dia's gedurende één minuut met eosin-oplossing gekleurd en vervolgens afgespoeld. Draai de hydratatie-stappen om de gekleurde weefsels te dehydrateren, beginnend met ethanol.Behandel ze vervolgens met xyleen. De dia's kunnen vervolgens worden gemonteerd en geïmagerd. Met behulp van de beschreven procedures werd pulpa-capping uitgevoerd op 8 weken oude muizen.Zes weken later werden hun maxillae geoogst en onderzocht. Merkwaardig genoeg onthulde H&E-kleuring dentinevorming in de gehele pulpkamer en de wortelkanalen. Ter vergelijking, vertoonde de onbekapselde kies geen gelijkaardige dentinevorming.In de gekapselde kies waren er kenmerken van zowel dentine-achtige als beenachtige formatie, omdat zowel dentinebuisjes als osteocyten in de reparatieve dentine werden gevonden, wat suggereert dat beschadigd pulp kan worden gemineraliseerd door zowel aanwezige odontoblasten als geïmmigreerde osteoblasten. Het gebruik van DMP1 immunohistochemische kleuring bevestigde verder verhoogde activiteiten van cellen die reparatieve dentine vormen. Net als in echte tandheelkundige klinische praktijken is het hebben van een assistent buitengewoon nuttig.Met een assistent kan deze techniek bijvoorbeeld in slechts tien minuten worden uitgevoerd, zodra deze is beheerst. Belangrijk is dat u, wanneer u het pulp blootstelt, een endofile moet gebruiken, niet de slijpsteen. En wanneer u de MTA afgeeft, wees voorzichtig.Vergeet niet dat het werken met fixeermiddelen zoals paraformaldehyde uiterst gevaarlijk kan zijn. Voorzorgsmaat

development-direct-pulp-capping-model-for-evaluation-pulpal-wound

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

This video showcases a technique for establishing a co-culture of trigeminal neurons and primary dental pulp cells using a transwell filter. In this physically separated condition, mesenchymal cells obtained from dental pulp tissue secrete paracrine signaling molecules that traverse through the pores, promoting the differentiation and migration of neurons towards the mesenchymal cells establishing a co-culture system.

Establishing a Co-Culture of Dental Pulp Cells and Trigeminal Neurons for Cross-Communication

Een murine model van cutane wondgenezing die kunnen worden gebruikt om therapeutische samenstellingen te beoordelen fysiologische en pathofysiologische instellingen.

Muizenmodel van wondgenezing

Hier presenteren we een protocol voor het lokaal opwekken van apicale parodontitis bij muizen. We laten zien hoe we een gat in de tand van de muis boren en de pulp ervan blootstellen, om lokale ontstekingen te veroorzaken. Analysemethoden om de aard van deze ontsteking te onderzoeken, zoals micro-CT en histologie, worden ook aangetoond.

Het inducerende apicale periodontitis bij muizen

Hier worden twee murine wondgenezingsmodellen beschreven, een ontworpen om cellulaire en cytokinewondgenezingsreacties te beoordelen en de andere om de snelheid van wondsluiting te kwantificeren. Deze methoden kunnen worden gebruikt met complexe ziektemodellen zoals diabetes om mechanismen van verschillende aspecten van slechte wondgenezing te bepalen.

Beoordeling van acute wondgenezing met behulp van de dorsale subcutane polyvinyl alcohol spons implantatie en excisional Tail Skin Wound Models.

Dit protocol demonstreert stapsgewijze details over het extraheren van de mandibulaire eerste kies in de muis. Het biedt een alternatieve methode voor onderzoekers die zich richten op kaakbotgenezing en -regeneratie.

De oprichting van een Murine Mandibular Molar Extraction Socket Healing Model

Dit artikel presenteert een gestroomlijnd protocol voor het opstellen van een pulpitismodel bij muizen met behulp van een innovatieve mondknevel, gevolgd door daaropvolgende histologische analyse.

Opstelling van een blootstellingsmodel voor muizenpulp met een nieuwe mondknevel voor onderzoek naar pulpitis

Deze studie presenteert twee cruciale experimentele technieken: de constructie van een muiswondmodel voor het beoordelen van wondsluiting en de voorbereiding van suspensies van enkele cellen uit muishuid om de celviabiliteit te behouden.

Muizenwondmodellen en het bereiden van single-cell suspensies

Microhardheid is een mechanische eigenschap en een informatieve parameter voor het evalueren van de pathofysiologie van hard weefsel. Hier demonstreren we een gestandaardiseerd protocol (monstervoorbereiding, polijsten, plat oppervlak en indrukplaatsen) voor microhardheidsanalyse in tand- en alveolair bot in mondziektemodellen van knaagdieren, namelijk tandfluorose en ligatuur-geïnduceerde parodontale botresorptie.

Microhardheidsmetingen op tand en alveolair bot in modellen voor mondziekten bij knaagdieren

Wonden vormen een wereldwijde gezondheidsuitdaging. Deze studie ontwikkelde een gestandaardiseerde fotocabine die gebruikmaakt van digitale planimetrie om de variabiliteit van wondmetingen te minimaliseren. Monitoring van wonden bij muizen gedurende 14 dagen toonde een aanvankelijke toename van het wondgebied en de omtrek, gevolgd door geleidelijke sluiting. Deze methodologie kan helpen bij het evalueren van de kinetiek van wondsluiting in preklinische modellen.

Digitale planimetrie voor het beoordelen van de kinetiek van wondsluiting in een muismodel

Om gecombineerde transplantatie van vaste organen en vaatvoorziene samengestelde allogene transplantaten te bestuderen, beschrijven we een nieuw heterotopisch en bloc model voor borstwand-, thymus- en harttransplantatie bij muizen, waarbij gebruik wordt gemaakt van een cervicale niet-naadloze manchettechniek.

A Novel Microchirurgische Model voor Heterotope, En Bloc borstwand, Thymus, en harttransplantatie in Muizen

Leer directe pulpkapping bij muizen voor tandheelkundig onderzoek naar pulpwondgenezing en reparatief dentinevorming. Deze methode biedt inzicht in biologische processen voor verbeterde behandelingen.

Ontwikkeling van een Direct-Pulp aftopping model voor de evaluatie van pulpal wondgenezing en Reparative Dentin Formation in Muizen (Video) | JoVE Journal

Ontwikkeling van een Direct-Pulp aftopping model voor de evaluatie van pulpal wondgenezing en Reparative Dentin Formation in Muizen

Meer video's verkennen