Murine myocardinfarct model met behulp van permanente Ligatie van linker anterieure aflopende coronaire slagader

Dit murinemodel van myocardiale overtreding maakt het mogelijk om pathologische processen te monitoren die zich voordoen van coronaire occlusie tot hartfalen in een laat stadium bij het lokale hartweefsel en systemische niveaus. Deze methode is compatibel met elke uitlezing die momenteel wordt gebruikt in de hartbiologie en fysiologie. Bovendien profiteert het van de enorme diversiteit aan murine genetische modellen.

Het verwerven van adequate chirurgische vaardigheden kan de tijd nemen om onder de knie te krijgen. Deze procedure wordt het best stap voor stap geleerd met een ervaren onderzoeker. Visuele demonstratie van dit murine model maakt het delen van hints die kunnen helpen met de chirurgische ingreep en versnellen van het leerproces.

Gebruik een elektrisch scheermes om snel een verdoofde, 25-tot-30-gram, man, C57-Black/6 muis op de keel en de linkerkant van de ribbenkast te scheren. Bevestig een gebrek aan reactie op teen knijpen. Breng zalf aan op de ogen van het dier.

Plaats de muis in de supine positie op een verwarmingskussen, en plaats een klein gaas kompres onder het hoofd om oververhitting van de ogen te voorkomen. Zet de ledematen vast met plakband. Geef een lus van 5-0 zijden hechting onder de bovenste snijtanden, en zet het uiteinde van de lus op het verwarmingskussen om de mond open te houden tijdens de cannulation.

Breng ontharingscrème aan op de voorgeschoren gebieden en masseer zachtjes met een wattenstaafje gedurende een minuut. Verwijder de overtollige vacht en room met gaas, en maak de blootgestelde huid schoon met druppels van 0,9% zoutoplossing en gaas. Breng stukjes steriel gaas aan op de geschoren keel en thorax en geniet van het gaas met iodopovidone.

Stel de ventilator in op een getijdenvolume van zeven milliliter per kilogram en een ventilatiesnelheid van 140 slagen per minuut. Beweeg de muis onder een microchirurgie stereo microscoop microscoop microscoopmicroscoop Houd de huid op het midden van de keel, maak een incisie van 0,5 centimeter langs de caudal/cephalic lijn en scheid de lobben van de speekselklier.

Gebruik gebogen tangen om de fascia van de sternohyoid spier voorzichtig te scheiden totdat het strottenhoofd en de luchtpijp zichtbaar zijn. Beveilig vervolgens de randen van de opening met oprolmechanismen aan elastische banden. Trek vervolgens voorzichtig de tong zijwaarts en gebruik tangen om de afgestompte binnennaald van een 16-meter canule in de luchtpijp te steken.

Visualiseer een correcte invoeging in de luchtpijp door de keelincisie en sluit de canule aan op de ventilator. Plaats steriel 0,9%zoutoplossing aangevuld met iodopovidone gedrenkt gaas op de incisie om de weefsels nat te houden tijdens de operatie. Plaats vervolgens de uitlaatbuizen in het water.

De aanwezigheid van bellen duidt op een succesvolle intubatie. Voor ligatie van de linker voorste aflopende kransslagader, of LAD, voorzichtig verplaatsen van de muis in de rechterkant decubitus positie, en herbeveiligen de linker voorste ledemaat in de nieuwe positie. Identificeer de lijn tussen de linker pectoralis kleine en grote spieren, en maak een schuine een-centimeter huid incisie langs de lijn.

Met behulp van botte ontleden micro schaar, scheiden de fascia van de pectoralis spieren zonder insnijden van de weefsels, en gebruik oprolmechanismen bevestigd aan elastische banden om de scheiding te behouden. Zet de ventilator met een positieve einddruk van drie centimeter water. Gebruik stompe tangen om de borstholte te openen op de derde intercostale ruimte tussen de derde en vierde ribben.

Plaats twee oprolmechanismen in de ribbenkast, een op elke rib, en gebruik een gebogen fijne tang om het hartzakje zorgvuldig te verwijderen zonder het hart en de longen te schaden. Zoek de LAD als een oppervlakkige heldere rode lijn die loopt van de rand van de linker oorschelp naar de top. Gebruik een naaldhouder om een 7-0 zijden hechting onder de LAD twee tot drie millimeter onder de linker atria door te geven.

Trekken de zijde langzaam om te voorkomen dat scheuren hartweefsel, bind de ligatuur met drie knopen. Het linkeronderdeel van de linkerventrikel zal bij ligatie direct bleek worden. Laat nu de rib oprolaars los en houd de derde rib met tangen twee passen met een 6-0 zijden hechting onder de derde en vierde ribben.

Plaats drie druppels van 37-graden Celsius 0,9% zoutoplossing op de opening, en sluit de expiratie uitlaatbuis voor twee of drie ademhalingscycli om goed op te blazen de longen. Draai en zet de hechting vast met twee worpen en laat de oprolmechanismen die de spieren vasthouden los, waardoor de spieren terugkeren naar hun juiste anatomische locatie. Sluit vervolgens de thoracale huid met twee steken en twee worpen van 5-0 hechtingszijde.

Sluit de keel huid met een steek van 5-0 hechting zijde en twee gooit. Verwijder aan het einde van de procedure de tapebanden uit de ledematen, draai het dier voorzichtig naar ventrale decubitus op het komperkussen en plaats een kompres op het verwarmingskussen aan de rechterkant van het dier. Intraperitoneally injecteren 0,3 milliliter van 37-graden-Celsius opgewarmd 5%glucose oplossing.

Stop de beademing. Als de muis spontaan ademt, verwijder dan voorzichtig de canule. Onderhuids injecteren 0,1 milligram per kilogram buprenorfine.

Plaats de muis in een kooi van 30 graden Celsius geventileerd met 100% zuurstof gedurende ten minste een uur met monitoring. Tijdens de twee eerste dagen na de operatie, de muis te voorzien van een zacht dieet en water ad libitum, opwarming van het dier als dat nodig is. Zeven dagen na de operatie blijven de ischemische gebieden onbevlekt door triphenyltetrazoliumchloride, terwijl het levende weefsel rood vlekken als gevolg van de aanwezigheid van dehydrogenasen.

De ischemische gebieden kunnen vervolgens worden berekend als het percentage van het witte gebied van de linker ventrikel in een imaging software programma. Westerse blot-analyse voor alfaglad spieractine en SMAD2-fosforylatie, die respectievelijk belangrijke uitlezingen zijn van myofibroblasten en van het transformeren van bètasignaleringsactivering van groeifactoren, kunnen worden gebruikt om de omvang van fibrose in het hart van de infarcten te bepalen. Real-time polymerase kettingreactie analyse van transformerende groeifactor bèta en de downstream doel mRNA expressie kan ook worden uitgevoerd om de aanwezigheid van myocardiale fibrose te beoordelen.

Pro-inflammatoire signaleringstrajecten en de expressie van ontstekingsgenertendenten blijken meestal binnen de eerste week na het hartinfarct te worden geactiveerd. mRNA expressie van pro-inflammatoire genen en monocyten / macrofaag markers wordt ook waargenomen. De ligatiehoogte heeft een kritische invloed op de overleving en moet worden aangepast aan elke stam of genotype, omdat LAD-vertakkingen kunnen variëren.

Constanten in ligatie is de sleutel tot reproduceerbare resultaten te verkrijgen. Deze procedure kan worden gekoppeld aan elke analytische methode en kan worden gevolgd door functionele analyse, weefselfixatie, celkweek of elke techniek van belang.