Name: Bestudering van overspraak van vet-endotheelcellen en adipocyten in menselijk onderhuids vetweefsel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-05T14:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 35 s
Description: Ontdek hoe microvasculaire endotheelcellen uit menselijk onderhuids vetweefsel worden geïsoleerd en gekweekt om de interactie met adipocyten te bestuderen. Deze methode verbetert cardiometabool onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Menselijke SATMVEC's: isolatie en onderzoek naar overspraak van adipocyten

<ol><li>Bierhansl, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+role+of+metabolism+in+endothelial+cell+function+and+vascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Central role of metabolism in endothelial cell function and vascular disease.</a> Physiology. 32 (2), 126-140 (2017).</li>
<li>Aird, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell heterogeneity.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 2 (1), a006429(2012).</li>
<li>Rajendran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vascular+endothelium+and+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">The vascular endothelium and human diseases.</a> Int J Biol Sci. 9 (10), 1057-1069 (2013).</li>
<li>Brown, O. I., Bridge, K., Kearney, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidases+in+glucose+homeostasis+and+diabetes-related+endothelial+cell+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases in glucose homeostasis and diabetes-related endothelial cell dysfunction.</a> Cells. 10 (9), 2315(2021).</li>
<li>Luk, C., Haywood, N. J., Bridge, K. I., Kearney, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paracrine+role+of+the+endothelium+in+metabolic+homeostasis+in+health+and+nutrient+excess%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Paracrine role of the endothelium in metabolic homeostasis in health and nutrient excess.</a> Front Cardiovasc Med. 26 (9), 882923(2022).</li>
<li>Click-iT EdU Imaging Kits. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2Fmp10338.pdf">https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2Fmp10338.pdf</a> (2024).</li>
<li>Bouïs, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelium+in+vitro%3A+A+review+of+human+vascular+endothelial+cell+lines+for+blood+vessel-related+research%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Endothelium in vitro: A review of human vascular endothelial cell lines for blood vessel-related research.</a> Angiogenesis. 4 (2), 91-102 (2001).</li>
<li>Ades, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HMEC-1%3A+establishment+of+an+immortalized+human+microvascular+endothelial+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">HMEC-1: establishment of an immortalized human microvascular endothelial cell line.</a> J Invest Dermatol. 99 (6), 683-690 (1992).</li>
<li>Chi, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+diversity+revealed+by+global+expression+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell diversity revealed by global expression profiling.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (19), 10623-10628 (2003).</li>
<li>Brignole, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((213+ESC+Guidelines+on+cardiac+pacing+and+cardiac+resynchronization+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">213 ESC Guidelines on cardiac pacing and cardiac resynchronization therapy.</a> Eur Heart J. 34 (29), 2281-2329 (2013).</li>
<li>Greenspon, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+permanent+pacemaker+implantation+in+the+United+States+from+1993+to+2009%3A+Increasing+complexity+of+patients+and+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Trends in permanent pacemaker implantation in the United States from 1993 to 2009: Increasing complexity of patients and procedures.</a> J Am Coll Cardiol. 60 (16), 1540-1545 (2012).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Prioritized+Research+Agenda+for+Prevention+and+Control+of+Noncommunicable+Diseases%22">Prioritized Research Agenda for Prevention and Control of Noncommunicable Diseases</a>. Mendis, S. A., Alwan, A. , World Health Organization. Geneva. (2011).</li>
<li>Brown, O. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+among+diabetes%2C+obesity%2C+and+cardiovascular+disease+phenotypes%3A+A+UK+biobank+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Relationship among diabetes, obesity, and cardiovascular disease phenotypes: A UK biobank cohort study.</a> Diabetes Care. 46 (8), 1531-1540 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>170L CO2 Incubator</td><td>GS Biotech</td><td>170G-014</td><td></td></tr><tr><td>2-NBDG (2-(N-(7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)Amino)-2-Deoxyglucose)</td><td>Invitrogen</td><td>N13195</td><td></td></tr><tr><td>4% PARAFIX buffered histological fixative</td><td>VWR Chemicals</td><td>PRC/R/38/1</td><td></td></tr><tr><td>Akt (tAkt) Rabbit&nbsp; 1:1000</td><td>Cell Signalling Technology</td><td>9272</td><td></td></tr><tr><td>BD Venflon Pro Safety 14 g x 45 mm, Orange, 50/pk</td><td>Medisave</td><td>393230</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin solution, 7.5%</td><td>Merck</td><td>A8412-100ML</td><td></td></tr><tr><td>CD144&nbsp;(VE-Cadherin) Antibody, anti-human, PE, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-118-495</td><td></td></tr><tr><td>CD31 Antibody, anti-human, PerCP-Vio 700, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-110-811</td><td></td></tr><tr><td>CD31 MicroBead Kit, human, 1 kit</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-935</td><td></td></tr><tr><td>CD45 Antibody, anti-human, FITC, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-110-769</td><td></td></tr><tr><td>Cell Extraction Buffer</td><td>Invitrogen</td><td>FNN0011</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge 5804 R</td><td>Eppendorf</td><td>5805000060</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT EdU Cell Proliferation Kit for Imaging, Alexa Fluor 488 dye</td><td>Invitrogen</td><td>C10337</td><td>Celproliferatiebeeldvormingskit</td></tr><tr><td>Collagenase/Dispase, 500 mg</td><td>Roche/Merck</td><td>11097113001</td><td></td></tr><tr><td>Corning Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix</td><td>Corning&nbsp;</td><td>354230</td><td>Basement Membrane Matrix</td></tr><tr><td>Corning 100 mm TC-treated Culture Dish</td><td>Corning&nbsp;</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>Costar 24-well Clear TC-treated Multiple Well Plates, Individually Wrapped, Sterile</td><td>Corning&nbsp;</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>Costar 6-well Clear TC-treated Multiple Well Plates, Individually Wrapped, Sterile</td><td>Corning&nbsp;</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>CytoFLEX S &ndash; 4 laser flow Cytometer</td><td>Beckman</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dead Cell Removal Kit</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&prime;s Phosphate Buffered Saline</td><td>Merck</td><td>D8537-500ML</td><td></td></tr><tr><td>EASYstrainer Cell sieve for 50 mL tubes, 70 &micro;m mesh, Blue, sterile, 50/pk</td><td>Greiner Bio-One</td><td>542070</td><td></td></tr><tr><td>Endothelial Cell Growth Medium MV</td><td>PromoCell</td><td>C-22020</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Safe-Lock micro test tubes</td><td>Merck</td><td>EP0030120094</td><td></td></tr><tr><td>Ethylenediaminetetraacetic acid solution</td><td>Merck</td><td>E8008-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 24 Well TC-Treated Cell Polystyrene Permeable Support Companion Plate, with Lid, Sterile, 1/Pack, 50/Case</td><td>Appleton Woods</td><td>CF537</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Permeable Support for 24 Well Plate with 0.4 &micro;m Transparent PET Membrane, Sterile, 1/Pack, 48/Case</td><td>Appleton Woods</td><td>CF521</td><td></td></tr><tr><td>Freezing Medium Cryo-SFM</td><td>PromoCell</td><td>C-29912</td><td></td></tr><tr><td>Gelatin solution, 2% in water</td><td>Merck</td><td>G1393-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Antibiotic-Antimycotic (100x), 100mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>11570486</td><td></td></tr><tr><td>Gibco TrypLE Select Enzyme (1x), no phenol red</td><td>Fisher Scientific</td><td>12563029</td><td></td></tr><tr><td>Hanks&prime; Balanced Salt solution</td><td>Merck</td><td>H6648-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Human Subcutaneous Preadipocyte Cells</td><td>Lonza</td><td>PT-5020</td><td></td></tr><tr><td>Incucyte ZOOM</td><td>Essen BioScience</td><td></td><td>Live-cell analysesysteem</td></tr><tr><td>Insulin solution human</td><td>Merck</td><td>I9278-5ML</td><td></td></tr><tr><td>LS Columns, 25/pk</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>MACS Tissue Storage Solution</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-100-008</td><td></td></tr><tr><td>MACSmix Tube Rotator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-753</td><td>Tube Rotator</td></tr><tr><td>MS Columns, 25/pk</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE 4&ndash;12% Bis-Tris Gel</td><td>Invitrogen</td><td>NP0322BOX</td><td></td></tr><tr><td>OctoMACS Separator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-109</td><td></td></tr><tr><td>PGM-2 Preadipocyte Growth Medium-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>PT-8002</td><td></td></tr><tr><td>Phospho (Ser1177) eNOS Rabbit 1:1000</td><td>Cell Signalling Technology</td><td>9570</td><td></td></tr><tr><td>Phospho-Akt (Ser473) Rabbit&nbsp; 1:1000</td><td>Cell Signalling Technology</td><td>4060</td><td></td></tr><tr><td>Pre-Separation Filters 30 &micro;m, 50/pk</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution</td><td>Cell Signalling Technology</td><td>4087</td><td></td></tr><tr><td>QuadroMACS Separator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel Disposable Sterile Style 10</td><td>VWRI</td><td>501</td><td></td></tr><tr><td>Screw cap tube, 15 ml, (Lx&Oslash;): 120 x 17 mm, PP, with print</td><td>Sarstetd</td><td>62.554.502</td><td></td></tr><tr><td>Screw cap tube, 50 ml, (Lx&Oslash;): 114 x 28 mm, PP, with print</td><td>Sarstedt</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>Screw cap tube, 50 ml, (Lx&Oslash;): 114 x 28 mm, PP, with print</td><td>Sarstetd</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>Total eNOS Mouse 1:1000</td><td>BD Biosciences</td><td>610297</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100, BioUltra, for molecular biology</td><td>Merck</td><td>93443-500ML</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Actin (C4)

bestudering van overspraak van vet-endotheelcellen en adipocyten in menselijk onderhuids vetweefsel

Studying Adipose Endothelial Cell/Adipocyte Cross-Talk in Human Subcutaneous Adipose Tissue

Bestudering van overspraak van vet-endotheelcellen en adipocyten in menselijk onderhuids vetweefsel

Microvascular endothelial cells (MVECs) have many critical roles, including control of vascular tone, regulation of thrombosis, and angiogenesis. ...

studying-adipose-endothelial-celladipocyte-cross-talk-human

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Vetweefsel (AT) kan de homeostase van het hele lichaam beïnvloeden, daarom is het begrijpen van de moleculaire mechanismen van adipocytendifferentiatie en -functie van belang. We bieden een protocol voor het verkrijgen van nieuwe inzichten in deze processen door adipocytenhomeostase, differentiatie en blootstelling aan hypoxie te analyseren als een model voor geïnduceerde adipocytenapoptose.

Mechanisme van de verordening van Adipocyte Numbers in volwassen organismen door differentiatie en apoptose Homeostasis

Hier worden een methode beschreven voor het isoleren van Adipocyte Progenitor Cell (APC) populaties uit Perivascular Adipose Tissue (PVAT) met behulp van Magnetisch-geactiveerde Cell Sorting (MCS). Deze methode zorgt voor een verhoogde isolatie van APC per gram vetweefsel in vergelijking met Fluorescence-Activated Cell Sorting (FACS).

Uitbreiding en Adipogenese Inductie van Adipocyt Progenitors van Perivasculaire Adipose Weefsel Geïsoleerd door Magnetische Geactiveerde Cell Sorting

De differentiatie van wit en beige adipocytes uit vetweefsel vasculaire progenitoren beren mogelijkheden voor metabole verbetering in obesitas. We beschrijven protocollen voor een CD34 + CD31 + endothelial cel los van menselijk vet en voor een latere in vitro expansie en de differentiatie in wit en beige adipocytes. Verschillende downstream toepassingen worden besproken.

Isolatie, uitbreiding en Adipogenic inductie van CD34 + CD31 + endotheliale cellen van menselijke Omental en onderhuids vetweefsel

Als gevolg van het hoge vetgehalte, heeft adipeus weefsel is uitdagend om te visualiseren met behulp van traditionele histologische methoden. Adipo-Clear is een weefsel clearing techniek waarmee robuuste labeling en hoge resolutie volumetrische fluorescerende beeldvorming van vetweefsel. Hier beschrijven we de methoden voor de bereiding van de monsters, voorbehandeling, kleuring, clearing en montage voor imaging.

Adipo-Clear: Een weefsel Clearing methode voor driedimensionale beeldvorming van vetweefsel

We beschrijven een 3D menselijke extracellulaire matrix-adipocyte in vitro cultuur systeem dat het mogelijk maakt dissectie van de rollen van de matrix en adipocytes in bij te dragen tot vetweefsel metabole fenotype.

Een menselijke 3D-extracellulaire matrix-Adipocyte cultuur model voor het bestuderen van matrix-cel metabole Overspraak

We presenteren een protocol voor de isolatie, cultuur en adipogene inductie van neurale kam afgeleide vet-afgeleide stamcellen (NCADSCs) uit de periaortische vetweefsel van Wnt-1 Cre+/-; Rosa26RFP/+ muizen. De NCADSCs kunnen een gemakkelijk toegankelijke bron van ADSCs voor het modelleren van adipogenese of lipogenese in vitro.

Isolatie, cultuur en adipogene inductie van neurale crest originele vet-afgeleide stamcellen uit periaortic vetweefsel

Dit protocol beschrijft de technische benadering om adipogene en fibro-inflammatoire stromale celsubpopulaties te isoleren uit intra-abdominale witte vetweefseldepots (WAT) van muizen door middel van fluorescentie-geactiveerde celsortering of immunomagnetische parelscheiding.

Isolatie van adipogene en fibro-inflammatoire stromale celsubpopulaties uit intra-abdominale vetdepots van muizen

Dit protocol biedt een efficiënte collagenase-verteringsmethode voor isolatie van levensvatbare adipocyten en stromale vasculaire fractie-SVF-cellen uit menselijk visceraal vet in één enkel proces, inclusief methodologie om hoogwaardig RNA uit adipocyten te verkrijgen en fenotypificatie van SVF-macrofagen door kleuring van meerdere membraangebonden markers voor analyse door middel van flowcytometrie.

Isolatie van levensvatbare vetcellen en stromale vasculaire fractie uit menselijk visceraal vetweefsel geschikt voor RNA-analyse en macrofaagfenotypering

Het manuscript en de bijbehorende video demonstreren een percutane biopsietechniek om monsters van onderhuids vetweefsel te verkrijgen uit gebieden rond de navel. Deze methode is een laag-risico en efficiënte manier om een reeks parameters (bijv. Gen- of eiwitexpressie, enzymactiviteit, lipidengehalte) in vetweefsel te onderzoeken.

Humane subcutane vetweefselbemonstering met behulp van een mini-liposuctietechniek

Dit protocol beschrijft de semi-geautomatiseerde isolatie van de stromale vasculaire fractie (SVF) uit muizenvetweefsel om preadipocyten te verkrijgen en adipocytendifferentiatie in vitro te bereiken. Het gebruik van een weefseldissociator voor collagenasevertering vermindert experimentele variatie en verhoogt de reproduceerbaarheid.

Semi-geautomatiseerde isolatie van de stromale vasculaire fractie uit muizenwit vetweefsel met behulp van een weefseldissociator

Ontdek hoe microvasculaire endotheelcellen uit menselijk onderhuids vetweefsel worden geïsoleerd en gekweekt om de interactie met adipocyten te bestuderen. Deze methode verbetert cardiometabool onderzoek.

Bestudering van overspraak van vet-endotheelcellen en adipocyten in menselijk onderhuids vetweefsel

Meer video's verkennen