Method Article

Wytwarzanie mikrotkanek przy użyciu modułów komórek zawierających żel kolagenowy

DOI:

10.3791/2177

⸱

December 13th, 2010

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Biomaterials and Biomedical Engineering / Department of Chemical Engineering and Applied Chemistry, University of Toronto, 2Institute of Biomaterials and Biomedical Engineering, University of Toronto

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tworzenie mikrotkanek za pomocą cylindrycznych żeli kolagenowych, zwanych modułami, które zawierają osadzone komórki i których powierzchnia jest pokryta komórkami śródbłonka.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Protokół ten opisuje wytwarzanie rodzaju mikrotkanek zwanych modułami. Podejście modułowe generuje jednolite, skalowalne i unaczynione tkanki. Moduły mogą być wykonane z kolagenu, a także innych materiałów żelowalnych lub sieciowalnych. Po wyprodukowaniu mają około 2 mm długości i 0,7 mm średnicy, ale kurczą się wraz z osadzonymi komórkami lub gdy moduły są pokryte komórkami śródbłonka. Moduły pojedynczo są na tyle małe, że osadzone komórki znajdują się w limicie dyfuzji tlenu i innych składników odżywczych, ale moduły można upakować razem, tworząc większe tkanki, które są przepuszczalne. Tkanki te mają budowę modułową, ponieważ różne typy komórek mogą być osadzone w modułach lub pokryte nimi, zanim zostaną one upakowane razem, tworząc złożone tkanki. Istnieją trzy główne etapy tworzenia modułów: (1) neutralizacja kolagenu i osadzanie w nim komórek, (2) żelowanie kolagenu w tubie i cięcie modułów oraz (3) powlekanie modułów komórkami śródbłonka.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1) Przygotowanie rurki

  1. Wytnij rurki polietylenowe o długości od 2 do 3 m (średnica wewnętrzna 0,76 mm x średnica zewnętrzna 1,22 mm).
  2. Nawlecz igłę 20 G1 na jeden koniec rurki.
  3. Zwiń rurkę i umieść w samouszczelniającej się torbie konwertera (7 1/2" x 13"). Dwa końce rurki należy umieścić na nieszczelnym końcu worka i przykleić taśmą taśmą do sterylizacji gazowej.
  4. Worek uszczelniający i sterylizacja gazowa.

2) Neutralizacja kolagenu

Uwaga: 1 ml kolagenu wypełnia około 2 m rurki polietylenowej.

  1. Umieść niezbędną ilość kolagenu potrzebną do uzyska....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wytworzyliśmy kilka różnych mikrotkanek przy użyciu modułów osadzonych w różnych typach komórek1-11. Z powodzeniem osadziliśmy pierwotne kardiomiocyty, wyspy trzustkowe, tłuszczowe komórki macierzyste i mezenchymalne komórki zrębowe, a także kilka linii komórkowych, w tym HepG2, NIH 3T3 i klon 9 komórek wątroby. Pokryliśmy moduły kilkoma typami komórek śródbłonka, w tym komórkami śródbłonka aorty szczura, ludzkimi komórkami śródbłonka żyły pępowinowej i ludzkimi komórkami śródbłonka mikronaczyniowego. Wypro.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Finansowanie zostało zapewnione przez National Institutes of Health (EB 001013), Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada oraz Canadian Institutes of Health Research. Dziękujemy dr A. P. McGuigan za jej wiedzę i pomoc w opracowaniu modułów.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Rurki Intramedic PE60BD Biosciences427416Do zmiany średnicy modułów można użyć różnych średnic przewodów
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS)GIBCO, firmy Life Technologies20012-027
Trypsin-EDTAGIBCO, firmy Life Technologies25200-072
Zakwaszony kolagen Purcol, 3 mg/mlCedarlane Labs5005-B
Wodorowęglan soduSigma-AldrichS5761
Igła 20GBD Biosciences305175Średnica igły musi być zbliżona do średnicy rurki
Strzykawka 3 mlBD Biosciences309585
Probówka 15 mlBD Biosciences352096
Probówka 50 mlBD Biosciences352070
Konwertery Torebka samouszczelniająca 7 1/2” x 13”Cardinal Health92713
Pipeta serologiczna z szeroką końcówką 10 mlBD Biosciences357504
Pipeta serologiczna 10 mlBD Biosciences357551
Pipeta serologiczna 5 mlBD Biosciences357543

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chamberlain, M. D., Gupta, R., Sefton, M. V. Chimeric vessel tissue engineering driven by endothelialized modules. , (2010).
  2. Corstorphine, L. E., Sefton, M. V. Effectiveness factor and diffusion limitations in collagen gel modules containing HepG2 cells. J Tissue Eng Regen Me....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Collagen Gel ModulesMicro tissue FabricationEndothelial Cell CoatingPolyethylene Tubing CuttingCollagen NeutralizationTissue Engineering ModulesVascularized MicrotissuesModular Tissue ConstructionCell Embedding ProtocolMicrofluidic Chamber Assays

Related Articles