Amplifying and Quantifying HIV-1 RNA in HIV Infected Individuals with Viral Loads Below the Limit of Detection by Standard Clinical Assays

Helene Mens; Mary Kearney; Ann Wiegand; Jonathan Spindler; Frank Maldarelli; John W. Mellors; John M. Coffin

doi:10.3791/2960

Amplifikacja i ilościowe oznaczanie RNA HIV-1 u osób zakażonych wirusem HIV z wiremią poniżej gra...

JoVE Journal
Immunology and Infection

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Immunology and Infection

Amplifying and Quantifying HIV-1 RNA in HIV Infected Individuals with Viral Loads Below the Limit of Detection by Standard Clinical Assays

Amplifikacja i ilościowe oznaczanie RNA HIV-1 u osób zakażonych wirusem HIV z wiremią poniżej granicy wykrywalności za pomocą standardowych testów klinicznych

Full Text

32,168 Views

13:58 min

September 26, 2011

DOI: 10.3791/2960-v

Helene Mens¹, Mary Kearney¹, Ann Wiegand¹, Jonathan Spindler¹, Frank Maldarelli¹, John W. Mellors², John M. Coffin³

¹The virology Core at the HIV Drug Resistance Program,NCI-Frederick, ²Division of Infectious Diseases,University of Pittsburgh, ³Department of Molecular Biology and Microbiology,Tuffts University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Ilościowe określenie poziomów RNA HIV-1 w osoczu i sekwencjonowanie pojedynczych genomów HIV-1 od osób z wiremią poniżej granicy wykrywalności (50-75 kopii/ml) jest trudne. Tutaj opisujemy, jak ekstrahować i oznaczać ilościowo RNA wirusa w osoczu za pomocą testu PCR w czasie rzeczywistym, który niezawodnie mierzy RNA HIV-1 do 0,3 kopii/ml oraz jak amplifikować genomy wirusa za pomocą sekwencjonowania pojedynczego genomu z próbek o bardzo niskim mianie wirusa.

W tym filmie zademonstrowano metody ilościowego określania i sekwencjonowania pojedynczych genomów wirusa HIV od osób z wiremią mniejszą niż 50 kopii na mililitr osocza. Po pierwsze, probówka zawierająca siedem mililitrów osocza jest odwirowywana do podniebienia. RNA wirusa jest następnie ekstrahowane w celu ilościowego określenia poziomu wirusa HIV.

Przeprowadza się test z pojedynczą kopią, w którym RNA jest przepisywane wstecznie, ładowane na 96-dołkową płytkę z wzorcami i kontrolami oraz poddawane ilościowej reakcji PCR w czasie rzeczywistym. Poziom wiremii jest następnie obliczany na podstawie objętości wejściowej osocza. Można wykryć zaledwie 0,3 kopii na mililitr, aby scharakteryzować populację wirusa.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos

Explore More Videos