Högupplöst video Spårning av rörelseorgan hos vuxna Drosophila melanogaster
Summary
I studien av komplexa rörelseorganen beteende i<em> Drosophila melanogaster</em> Är beroende av förmågan att kvantifiera förändringar i ett givet fluga rörelse. Den här artikeln visar hur man gör detta med hjälp av en högupplöst tracking system.
Abstract
Flugor ge en viktig modell för att studera komplext beteende på grund av den uppsjö av genetiska verktyg tillgängliga för forskare inom detta område. Studera rörelseorganen beteende i<em> Drosophila melanogaster</em> Bygger på förmågan att kunna kvantifiera förändringar i rörelse under eller som svar på en given uppgift. Av denna anledning är en högupplöst video system för spårning, som den vi beskriver i detta dokument, ett värdefullt verktyg för att mäta förflyttning i realtid. Vår protokoll innebär att man använder en initial luftpuffar att bryta flugor fart, följt av 1 / 32 filmar period i en kvadrat kammare. Ett tracking-program används sedan för att beräkna den momentana hastigheten för varje flyga i kammaren i 10 ms steg. Analys programvara sammanställer sedan dessa data, och resultatet blir ett antal olika parametrar som medelhastighet, maxhastighet, tid i rörelse, acceleration, osv Detta protokoll kommer att diskutera lämplig utfodring och hantering av flugor för beteende-uppgifter, hantering flugor utan anesthetization eller fixering , inrätta en kontrollerad miljö, och köra analysen från början till slut.
Protocol
Discussion
I vår inställning, slutar en måttligt stark luftpuffar övergående fluga rörelse. När luften pulsen slutar, är de flyger ut från den stationära tillstånd och locomote normalt, vilket visas i figur 2. Eftersom detta luftpuffar effektivt synkroniserar rörelseorganen av befolkningen använder vi den för att starta rättegången, så att vi kan också studera uppkomsten av rörelsen efter en fart-breaking stimulans. Analysen kan dock göras utan en luft puls sedan rörelseapparaten parametrar efter påbörjad p?…
Acknowledgements
Detta arbete stöddes av National Institutes of Health Grant R01 GM54408 tilldelas LC Griffith. Vi vill tacka Fred Wolf för all hans hjälp med att utforma våra torg kammare och sätta upp vår analys, Frank Mello vid Brandeis University mekanisk verkstad för att bygga vår kammare, och Dan Valente och Tim Lebestky för bra samtal om analys frågor.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Square Chamber | Tool | Machine Shop | N/A | Design from Wolf et al. 20021 |
| Digital Camera | Camera | Sharp | ViewcamZ VL-23 | |
| Flowmeter | Tool | Cole Parmer | SY-32003-12 | |
| Light Box | Tool | DNASTAR, Inc. | Seq-Easy | |
| Charcoal Filter | Tool | Fisher Scientific | 09-744-37 | |
| DIAS 3.2 | Software | Soll technologies | N/A | www.solltechnologies.com |
Referências
- Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T. High-Resolution Analysis of Ethanol-Induced Locomotor Stimulation in Drosophila. J Neurosci. 22 (24), 11035-11044 (2002).
- Soll, D. R. The use of computers in understanding how animal cells crawl. International review of cytology. 163, 43-104 (1995).
- Martin, J. R., Ollo, R. A new Drosophila Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase (Caki) is localized in the central nervous system and implicated in walking speed. The EMBO journal. 15 (8), 1865-1876 (1996).
- Levine, J. D., Funes, P., Dowse, H. B. Resetting the Circadian Clock by Social Experience in Drosophila melanogaster. Science. 298, 2010-2012 (2002).
