Criação de micro-tecidos utilizando gel de colágeno cilíndricos, chamados módulos, que contêm células embarcados e cuja superfície é revestida com as células endoteliais.
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Artigo de método
Fabricação de Micro-tecidos utilizando Módulos de Colágeno Gel células contendo
Neste artigo
Resumo
Resumo
Este protocolo descreve a fabricação de um tipo de micro-tecidos chamados de módulos. A abordagem módulo gera uniforme, tecidos escalável e vascularizada. Os módulos podem ser feitas de colágeno, bem como outros materiais gelable ou reticulável. Eles são cerca de 2 mm de comprimento e 0,7 mm de diâmetro sobre a fabricação, mas encolher de tamanho com células incorporado ou quando os módulos são revestidos com células endoteliais. Os módulos individualmente são pequenos o suficiente que as células incorporados estão dentro do limite de difusão de oxigênio e outros nutrientes, mas módulos pode ser embalado para formar tecidos maiores que são perfusable. Estes tecidos são modulares na construção, porque tipos diferentes de células pode ser incorporado em ou revestidos nos módulos antes de serem embalados para formar tecidos complexos. Há três passos principais para fazer os módulos: (1) neutralizar o colágeno e incorporação de células-lo, (2) gelificação do colágeno no tubo e corte os módulos e (3) revestimento dos módulos com células endoteliais.
Protocolo
1) Preparação de Tubos
- Corte 2-3 comprimentos m de tubos de polietileno (0,76 mm de diâmetro x 1,22 milímetros OD).
- Um fio de agulha 20 G1 em uma das extremidades do tubo.
- Tubos de bobina e coloque em uma bolsa de conversores auto-vedação (7 1 / 2 "x 13"). As duas extremidades do tubo devem ser colocados no final unsealed do saco e gravado no local com fita de esterilização a gás.
- Saco de vedação e gás esterilizar.
2 Neutralização) de colágeno
Nota: 1 ml de colágeno preenche cerca de 2 m de tubos de polietileno.
- Coloque a quantidade necessária de coláge....
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Discussão
Nós fabricamos diversas micro-tecidos usando módulos integrados com diferentes tipos de células 1-11. Conseguimos incorporados cardiomiócitos primária, ilhotas, células-tronco adiposas e células mesenquimais do estroma, bem como várias linhagens de células incluindo HepG2, NIH 3T3 e clone 9 células do fígado. Temos os módulos revestidos com vários tipos de células endoteliais de aorta de ratos, incluindo células endoteliais, células endoteliais da veia umbilical humana e humanos células endoteliais microvascu.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
O financiamento foi fornecido pelo National Institutes of Health (EB 001.013), Ciências Naturais e Pesquisa de Engenharia Council of Canada e Canadian Institutes of Health Research. Agradecemos ao Dr. AP McGuigan por sua experiência e ajudar no desenvolvimento de módulos.....
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Tubo Intramedic PE60 | BD Biosciences | 427416 | Pode-se usar tubos de diâmetro diferente para alterar o diâmetro dos módulos |
| Solução salina tamponada com fosfato (PBS) | GIBCO, por Life Technologies | 20012-027 | |
| Tripsina-EDTA | GIBCO, por Life Technologies | 25200-072 | |
| Colágeno ácido Purcol, 3 mg/mL | Cedarlane Labs | 5005-B | |
| Bicarbonato de sódio | Sigma-Aldrich | S5761 | |
| Agulha 20G | BD Biosciences | 305175 | O diâmetro da agulha precisa ser semelhante ao diâmetro do tubo |
| Seringa de 3 mL | BD Biosciences | 309585 | |
| Tubo de 15 mL | BD Biosciences | 352096 | |
| Tubo de 50 mL | BD Biosciences | 352070 | |
| Envelope autoadesivo Convertors 7 1/2” x 13” | Cardinal Health | 92713 | |
| Pipeta serológica de ponta larga de 10 ml | BD Biosciences | 357504 | |
| Pipeta serológica de 10 ml | BD Biosciences | 357551 | |
| Pipeta serológica de 5 ml | BD Biosciences | 357543 |
Referências
- Chamberlain, M. D., Gupta, R., Sefton, M. V. Chimeric vessel tissue engineering driven by endothelialized modules. , (2010).
- Corstorphine, L. E., Sefton, M. V. Effectiveness factor and diffusion limitations in collagen gel modules containing HepG2 cells. J Tissue Eng Regen Me....
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