Fabricação de Micro-tecidos utilizando Módulos de Colágeno Gel células contendo

Summary

Criação de micro-tecidos utilizando gel de colágeno cilíndricos, chamados módulos, que contêm células embarcados e cuja superfície é revestida com as células endoteliais.

Abstract

Este protocolo descreve a fabricação de um tipo de micro-tecidos chamados de módulos. A abordagem módulo gera uniforme, tecidos escalável e vascularizada. Os módulos podem ser feitas de colágeno, bem como outros materiais gelable ou reticulável. Eles são cerca de 2 mm de comprimento e 0,7 mm de diâmetro sobre a fabricação, mas encolher de tamanho com células incorporado ou quando os módulos são revestidos com células endoteliais. Os módulos individualmente são pequenos o suficiente que as células incorporados estão dentro do limite de difusão de oxigênio e outros nutrientes, mas módulos pode ser embalado para formar tecidos maiores que são perfusable. Estes tecidos são modulares na construção, porque tipos diferentes de células pode ser incorporado em ou revestidos nos módulos antes de serem embalados para formar tecidos complexos. Há três passos principais para fazer os módulos: (1) neutralizar o colágeno e incorporação de células-lo, (2) gelificação do colágeno no tubo e corte os módulos e (3) revestimento dos módulos com células endoteliais.

Protocol

1) Preparação de Tubos

1. Corte 2-3 comprimentos m de tubos de polietileno (0,76 mm de diâmetro x 1,22 milímetros OD).
2. Um fio de agulha 20 G1 em uma das extremidades do tubo.
3. Tubos de bobina e coloque em uma bolsa de conversores auto-vedação (7 1 / 2 "x 13"). As duas extremidades do tubo devem ser colocados no final unsealed do saco e gravado no local com fita de esterilização a gás.
4. Saco de vedação e gás esterilizar.

2 Neutralização) de colágeno

Nota: 1 ml de colágeno preenche cerca de 2 m de tubos de polietileno.

1. Coloque a quantidade necessária de coláge....

Discussion

Nós fabricamos diversas micro-tecidos usando módulos integrados com diferentes tipos de células ^1-11. Conseguimos incorporados cardiomiócitos primária, ilhotas, células-tronco adiposas e células mesenquimais do estroma, bem como várias linhagens de células incluindo HepG2, NIH 3T3 e clone 9 células do fígado. Temos os módulos revestidos com vários tipos de células endoteliais de aorta de ratos, incluindo células endoteliais, células endoteliais da veia umbilical humana e humanos células endoteliais microvascu.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tubulação intramédica PE60	BD Biosciences	427416	Diferentes diâmetros de tubulação podem ser usados para alterar o diâmetro dos módulos
Solução salina tamponada com fosfato (PBS)	GIBCO, da Life Technologies	20012-027
Tripsina-EDTA	GIBCO, da Life Technologies	25200-072
Colágeno acidificado Purcol, 3 mg/mL	Cedarlane Labs	5005-B
Bicarbonato de sódio	Agulha Sigma-Aldrich	S5761
20G	BD Biosciences	305175	O diâmetro da agulha precisa ser semelhante ao diâmetro do tubo
Seringa de 3 mL	BD Biosciences	309585
tubo de 15 mL	BD Biosciences	352096
tubo de 50 mL	BD Biosciences	352070
Bolsa Auto-Selante para Conversores 7 1/2” x 13”	Cardinal Health	92713
Pipeta sorológica de ponta larga de 10 ml	BD Biosciences	357504
pipeta sorológica de 10 ml	BD Biosciences	357551
pipeta sorológica de 5 ml	BD Biosciences	357543