Ensaio de dose eritematosa mínima: um método para medir a sensibilidade UV em modelos de camundongos

- Os melanócitos produzem um pigmento escuro chamado eumelanina que absorve as radiações UV prejudiciais, protegendo a pele. Para medir a sensibilidade aos raios UV, comece pegando um modelo de camundongo anestesiado. Prepare o camundongo removendo seu pelo dorsal para expor a camada epidérmica. Prenda um pedaço de fita de bloqueio de UV com um determinado número de orifícios na pele exposta. Fixe pequenas fitas destacáveis em todos os orifícios, exceto um, para mascarar a abertura.

Agora, sujeite o mouse à radiação UV pelo tempo desejado. Durante o período de exposição, desmascare os orifícios restantes sequencialmente em pontos de tempo predeterminados. Isso facilita que as manchas cutâneas sucessivamente expostas recebam doses decrescentes de radiação UV. Os orifícios permitem a penetração localizada dos raios UV na epiderme do camundongo.

Após a exposição, as células epidérmicas liberam moléculas pró-inflamatórias. Essas moléculas se difundem em direção à derme e dilatam os vasos sanguíneos dérmicos, causando eritema ou vermelhidão da pele. Posteriormente, os leucócitos se infiltram na derme e causam edema ou inchaço na área exposta.

No desfecho experimental, pare a radiação e remova a fita para observar eritema e edema. No protocolo a seguir, mediremos a sensibilidade aos raios UV em um modelo de camundongo humanizado tratado com forscolina - uma droga produtora de melanina - determinando a Dose Eritematosa Mínima.

- Para determinar a Dose Eritematosa Mínima, ou MED, cada animal será exposto a uma variedade de doses de UV. Comece preparando um pedaço de fita oclusiva UV, usando um furador resistente com um recorte circular de 1 centímetro quadrado para fazer furos na fita. Sobre cada orifício da fita, aplique um pedaço de fita pequeno, mas facilmente destacável, que pode ser removido para exposição aos raios UV. Coloque a fita na superfície dorsal do camundongo anestesiado.

Se os olhos do animal estiverem abertos, aplique lágrimas artificiais para evitar ferimentos causados por ressecamento e exposição aos raios UV. Ligue a fonte UV composta por duas lâmpadas UVB com uma saída de pico de 313 nanômetros e uma faixa de 280 a 370 nanômetros. Deixe a lâmpada se equilibrar a uma saída UV constante antes de usar um fotômetro UV com o sensor UVB para verificar a saída.

Com base na taxa de transmissão UV medida pelo fotômetro UV, calcule o tempo de exposição UV para cada dose desejada. Por exemplo, a saída UVB da sua lâmpada mede 2,4 miliwatts por centímetro quadrado. Portanto, para administrar 5 quilojoules por metro quadrado, a pele precisaria ser exposta a 208 segundos de radiação UVB, conforme calculado aqui.

Em seguida, coloque a superfície ventral do animal sedado para baixo para garantir uma exposição uniforme aos raios UV. Para administrar a dose de radiação escolhida, remova sequencialmente os pequenos pedaços de fita que cobrem os orifícios no momento apropriado.

Por exemplo, se 40 quilojoules por metro quadrado é a maior dose, o camundongo ficaria sob a lâmpada por 27 minutos e 47 segundos e o buraco para essa dose seria exposto desde o início. No entanto, para a condição de 5 quilojoules por metro quadrado, a fita seria removida com 208 segundos de tempo de exposição restantes. Após a exposição aos raios UV, remova cuidadosamente a fita e coloque os animais em um local quente e silencioso para se recuperar da anestesia antes de devolvê-los às gaiolas.

O valor da Dose Eritematosa Mínima, ou MED, corresponde à dose mínima de UV que causa inflamação, definida por eritema e/ou edema de todo o círculo exposto da pele. Monitore o mouse por 24 a 48 horas para procurar áreas discretas de eritema ou edema nas áreas expostas aos raios UV.

Às vezes, a barba por fazer residual confunde a interpretação do teste MED ao mascarar o eritema ou edema cutâneo subjacente. Molhar a pele com etanol 70% torna a pele muito mais interpretável. Documente todos os achados da pele fotograficamente e, em seguida, devolva os camundongos ao biotério.