Encapsulation título celular por Droplets

Meu nome é Hang Moon. Estou trabalhando com o professor de preservativos. Ele e eu trabalhamos com o palco XYJ para fazer uma estrutura 3D de células.

Olá, eu sou PE e Lynn e estou trabalhando com o projeto de impressão de células com encapsulação de células e mídia e géis. Este é o solenóide para ejeção de uma célula e mistura de células de aros sobre a mídia celular. A válvula so é ativada por duas linhas de sinal.

A linha de sinal vem de um quadro seco aqui. O sinal vem daqui. Aquela linha através daquela linha, aquela é a função do primeiro gerador.

Então primeiro é gerado pelo nosso modo programado. Então, se você quiser, você quer mudar o purse, você pode mudar o programa com aquela linha de switches ou você pode controlar esse processo gerador para o computador. A válvula celular é aberta e fechada pelo sinal elétrico, mas a célula é fornecida através daquela linha.

A célula e a mídia ou o gel agro são fornecidos através das seringas. As seringas dentro da água, dentro da seringa é a pressão leve pelo ar. O ar pressurizado é fornecido a partir de um tanque como aqui a linha.

Então a pequena linha e o ar izado fluem através do filtro de ar. O filtro de ar discrimina a poeira e outro tipo de sujeira. Este é o gerador de pressão que chamamos de geração do sinal usado para abrir o sino de ar solar ou fechar a válvula de ar solar. O computador é conectado através do conector P-I-B-U-S-V.

Então podemos usar a porta USB diretamente em nosso computador, o laptop. Então aquele está conectado a este lado aqui. E então podemos controlar através do controle do laptop aqui.

Então se quisermos sincronizar o movimento do palco e a abertura do sino, pode ser controlado pelo mesmo controlador como um laptop. Então podemos controlar o tempo quando ele abre, quando ele fecha, quando ele se move e quando ele para. E podemos sincronizar o movimento e a abertura do sino.

Aquele palco é o palco motorizado. Ele é movido automaticamente através da linha de sinal de morte e motor. Então a motorização é de 0,1 micrômetros.

Então ele pode idealmente desenhar a linha até 100 milímetros de linha. Então o eixo jet está se movendo, subindo e descendo dessa maneira. Então ele controla a tampa entre o substrato e o cinto solar.

Então ele pode controlar a altura de ejeção. Aquele substrato é conectado aos estágios XY aqui, X aqui e Y lá. Então ele está se movendo em torno de um plano XY.

Então ele desenha alguns recursos de demonstração certo estágios são três Xs, X, Y e G. Então o eixo jet ou o eixo XY é controlado por sinal aqui. Então a linha de sinal está conectada ao controlador de movimento aqui. Aquele controlador de movimento não tem nenhuma chave manual em tudo porque não pode ser controlado manualmente.

É controlado através do laptop. Então o laptop está conectado. Na parte de trás do controlador, temos três xs para uma célula de impressão XY jet.

Então ele faz três tipos diferentes de sinal independentemente. E então o controlador de movimento se comunica através dos conectores rf 2, 3, 2 que estão diretamente conectados ao USV. E então o USV está conectado ao laptop.

Então o laptop controlado empresta. Usamos o programa AutoCAD, fazemos um caminho gen como aquele caminho bam. E então ele muda para a linguagem da máquina como aquela.

Então a linguagem da máquina é transferida para o simples como o caractere e números. Há cada posição relacionada aos estágios X, Y, Z aqui eu escolho o arquivo, contém aquele tipo de programa e então abro o programa de download daquela maneira. E então eu escolho do arquivo como faz o mesmo exato, o arquivo de texto.

Apenas o arquivo de texto é baixado, escolha o arquivo de texto e automaticamente baixe do laptop para o controlador de movimento executivo e então ele vai o personagem BAM como mencionei antes, BAM. Neste frasco estão N IH 3G três células de fibroblastos de camundongo. E eu vou primeiro aspirar a mídia velha.

Este processo é para passar as células e as células estão aderidas ao fundo do frasco. Então, depois de aspirar a mídia, vou colocar seis RYS em que é uma enzima. Ok? Então depois que o tripsina foi colocado no frasco, precisamos esperar de três a cinco minutos para que as células se separem do fundo do frasco.

Agora estamos prontos para colocar a mídia e passar as células para um tubo de centrífuga. É uma diluição de um para um. Então estou colocando seis mil de esta mídia aqui e vou lavar um pouco para ter certeza de que todos passaram.

E agora as células estão prontas para serem centrifugadas neste tubo. Agora vamos centrifugar essas células a mil RPM por três a cinco minutos. Agora que as células foram espalhadas em uma pelota, vou aspirar o sobrenadante.

Agora vou lavar as células com PBS. E isso é para, isso é para colorir as células. As colorações que estamos usando são substratos de esterases.

Ok, agora vamos centrifugar novamente e descer as células em uma paleta. E eu vou aspirar o PBS e eu vou resinar as células. Estou em mídia para ser contado.

Estou misturando as células para que quando tirarmos uma amostra dela, a concentração será uniforme em todo o tubo. Agora vou pegar cem microlitros das células para medir a densidade celular. Agora estou colocando cem microlitros de tipo e azul, que é uma coloração.

Vamos esperar de três a cinco minutos para que a coloração permeie as membranas das células mortas. Quando contamos as células, as azuis não contamos. As células estão prontas para serem contadas com o hemócitometro, vou transferir cinquenta microlitros da mistura celular para cada lado do hemócitometro.

Ok, vou cobri-lo com um slide de vidro. Há dois lados no hemócitometro. Vou contar o primeiro lado e depois de contar os dois lados, vou tirar a média e depois multiplicar por dois porque tivemos uma diluição de um para um com o tipo em azul.

Então basicamente nossa densidade celular será 135 vezes 10 a quatro células por mil. Para o nosso experimento, vamos usar uma solução celular com uma concentração de meio milhão de células por mil. E então, já que temos 13,5 milhões de células, vou ressuspensar as células em 27 mil de mídia.

Estamos usando dois tipos diferentes de colorações. Este é um ensaio vivo morto de sondas moleculares. Nossa primeira coloração é chamada cálcio am.

Nossa segunda coloração é chamada AUM homodímero. Ela cora células mortas. Usamos excitação azul para obter fluorescência verde e excitação verde para obter fluorescência vermelha. Para essas duas colorações, quando estamos imaginando nossa solução de dados será preparada em PBS.

Então primeiro vou transferir cinco mil de PBS para um tubo de solução salina tamponada com fosfato. Isso é uma solução salina. Agora vou adicionar meio microlitro de cálcio am por mil.

Agora estou adicionando 2,5 microlitros de cálcio am para o tubo e dois microlitros de athe homodímero por mil de PBS. Aqui está a máquina btex. Ela faz a célula e a mídia bem distribuídas por todo o volume.

Agora carregamos a célula 200 microlitros no sete aqui. E então colocamos a tampa, este é um selado bem apertado através desta maneira aqui eu abro a válvula e então é a luz de ar de pressão que entra e então eu ajusto o cinto daquela maneira. E então ele muda a pressão.

Então eu ajusto. A pressão é cinco PSI. A pressão dentro da tubulação é cinco PSI.

De aqui para aqui,