Encapsulation título celular por Droplets

Meu nome é Hang Moon. Estou trabalhando com o professor de preservativos. Ele e eu trabalhamos com o estágio XYJ para fazer uma estrutura 3D da célula.

Olá, sou PE e Lynn e estou trabalhando com o projeto de impressão celular com encapsulamento de células e mídia e géis. Este é o solenóide para ejeção de uma célula e mistura celular de aros sobre a mídia celular. A válvula é ativada por duas linhas de sinal.

A linha de sinal é proveniente de uma placa seca aqui. O sinal veio daqui. Essa linha através dessa linha, essa é a primeira função geradora.

Então, o primeiro é gerado pela nossa maneira programada. Então, se você quiser, você quer mudar a bolsa, você pode mudar o programa com a linha que muda ou você pode controlar esse gerador de processo para o computador. A válvula celular é aberta e fechada pelo sinal elétrico, mas a célula é alimentada por essa linha.

A célula e o meio ou agrogel são fornecidos através das seringas. As seringas dentro da água, dentro da seringa é a luz da imprensa pelo ar. O ar pressurizado é fornecido a partir de um tanque como aqui a linha.

Assim, a pequena linha e o ar ized são voar através do filtro de ar. O filtro de ar é discrimina a poeira e outros tipos de sujeira. Esse é o gerador de pressão que chamamos, está gerando o sinal usado para abrir o sino de ar solar ou fechar o computador da válvula de ar solar é conectado através do conector PIBUV.

Assim, podemos usar a porta USB diretamente em nosso computador, o laptop. Então esse está conectado a esse lado aqui. E então podemos controlar através do laptop de controle aqui.

Então, se quisermos sincronizar o movimento do palco e abrir a campainha é pode ser controlado pelo mesmo controlador que um laptop. Assim, podemos controlar o tempo em que ele abre, quando fecha, quando se move e quando para. E podemos sincronizar o movimento e o sino de abertura.

Esse estágio é o estágio motorizado. É movido automaticamente através da linha de sinal de morte e do motor. Portanto, a motorização é de 0,1 micrômetros.

Portanto, idealmente, ele pode desenhar a linha de até 100 milímetros. Então, o eixo do jato está se movendo, subindo e descendo dessa maneira. Portanto, controla a tampa entre o substrato e o cinturão solar.

Assim, ele pode controlar a altura de ejeção. Esse substrato está conectado aos estágios XY aqui, X aqui e Y ali. Portanto, está se movendo em torno de um plano XY.

Então, ele desenha alguns estágios certos de demonstração de recursos são três Xs, X, Y e G.So o eixo do jato ou o eixo XY é controlado pelo sinal aqui. Portanto, a linha de sinal está conectada ao controlador de movimento aqui. Esse controlador de movimento não possui nenhum interruptor manual porque não pode ser controlado manualmente.

É controlado através do laptop. Portanto, o laptop está conectado. Na parte traseira do controlador, temos três xs para um jato XY de célula de impressão.

Assim faz o tipo três diferente do sinal independentemente. E então o controlador de movimento é comunicado através dos conectores rf 2, 3, 2 é conectado diretamente ao USV. E então o USV é conectado ao laptop.

Então, mutuário controlado por laptop. Usamos o programa AutoCAD, fazemos um caminho gen A assim bam. E então muda para a linguagem de máquina assim.

Portanto, a linguagem de máquina é transferida para o caractere simples e números como esse. Há cada posição relacionada aos estágios X, Y, Z aqui eu escolho o arquivo, contenho esse tipo de programa e depois abro o programa de download dessa forma. E então eu escolho o arquivo como faz exatamente o mesmo, o arquivo de texto.

Apenas o arquivo de texto é baixado, escolha o arquivo de texto e baixe automaticamente do laptop para o executivo do controlador de movimento com e, em seguida, vá para o caractere BAM, como mencionei antes, BAM. Neste frasco estão N IH 3G três células de fibra de camundongo. E vou primeiro aspirar a velha mídia.

Este processo consiste em passar as células e as células são aderidas ao fundo do frasco. Então, depois de aspirar a mídia, vou colocar seis RYS nos quais é uma enzima. Okey? Então, depois que a tripsina foi colocada no frasco, precisamos esperar de três a cinco minutos para que as células se desprendam do fundo do frasco.

Agora estamos prontos para colocar a mídia e passar as células para um tubo de centrífuga. É uma diluição de um para um. Então, estou colocando seis mil dessa mídia aqui e vou lavar um pouco as serras para garantir que todas elas sejam aprovadas.

E agora as células estão prontas para serem centrifugadas neste tubo. Agora vamos centrifugar essas células a mil RPM de três a cinco minutos. Agora que as células foram transformadas em um chumbinho, vou aspirar o sobrenadante.

Agora vou lavar as células com PBS. E isso é para, isso é para colorir as células. As manchas que estamos usando são substratos de esterase.

Ok, agora vamos centrifugar novamente e girar as células em um palato. E vou aspirar o PBS e resinar as células. Estou na mídia para ser contado.

Estou misturando as células para que, quando tirarmos uma amostra, a concentração seja uniforme em todo o tubo. Agora vou pegar cem microlitros de células para medir a densidade celular. Agora estou colocando cem microlitros de tipo e azul, que é uma mancha.

Vamos esperar de três a cinco minutos para que a mancha permeie as membranas das células mortas. Quando contamos as células, as azuis não contamos. As células estão prontas para serem contadas com o hemocitômetro, vou transferir 50 microlitros da mistura de células para cada lado do hemocitômetro.

Ok, vou cobri-lo com um lado deslizante de vidro. Há dois lados no hemocitômetro. Vou contar o primeiro lado e depois de contar os dois lados, vou pegar a média e depois multiplicar por dois porque tivemos uma diluição de um para um com o tipo em azul.

Então, basicamente, nossa densidade celular será 135 vezes 10 elevado a quatro células por mil. Para nosso experimento, usaremos uma solução celular com uma concentração de meio milhão de células por mil. E assim, como temos 13,5 milhões de células, estarei suspendendo as células em 27 mil de mídia.

Estamos usando dois tipos diferentes de manchas. Este é um ensaio de mortos-vivos de sondas moleculares. Nossa primeira mancha é chamada de cálcio am.

Nossa segunda coloração é chamada de homodímero AUM. Ele mancha as células mortas. Usamos excitação azul para obter fluorescência verde e excitação verde para obter fluorescência vermelha Para essas duas manchas, quando estivermos visualizando, nossa solução de dados será preparada em PBS.

Então, primeiro vou transferir cinco mil de PBS para um tubo de solução salina tamponada com fosfato. Essa é uma solução salina. Agora vou adicionar meio microlitro de cálcio por mil.

Agora estou adicionando 2,5 microlitros de cálcio am ao tubo e dois microlitros de homodímero por mil de PBS. Aqui está a máquina BTEX. Isso torna a célula e a mídia bem distribuídas por todo o volume.

Agora carregamos a célula de 200 microlitros nos sete aqui. E então colocamos a tampa, esta é uma forma bem fechada e bem fechada assim, aqui eu abro a válvula e então é a pressão que o ar leve entra e então eu ajusto o cinto assim. E então muda a pressão.

Então eu me ajusto. A pressão é de cinco PSI. O interior da pressão da tubulação é de cinco PSI.

Daqui até aqui, ele se conectou através do buraco dentro do buraco. Então, basta abrir a campainha aqui e, em seguida, a célula injetada com a pressão de cinco PSI e depois começar a abrir. E então a válvula Sona começa a operar.

E então rolamos o substrato. Seu substrato é apenas um simples vidro deslizante. E então carregamos a parte adequada e eu coloquei um pouco de fita adesiva para fixar o substrato assim, certo?

E simplesmente eu apenas conserto. Então, estamos configurando toda a célula e a válvula ary e o substrato durante a movimentação do trabalho ary, começam a funcionar. Então, estamos configurados para tudo e, em seguida, abrimos a partida da válvula.

E então movemos o palco assim, certo? E então criamos algum padrão no padrão do substrato no substrato e no personagem bam. Vou mergulhar essas gotículas que imprimimos nessa solução de corante que fizemos anteriormente.

E agora as gotículas serão incubadas por 10 minutos e depois fotografadas. Primeiro vou ajustar a imagem através da ocular. Nossa primeira imagem é apenas uma imagem de campo claro.

Vou desligar a luz e trocar o filtro para que tenhamos excitação azul, que mostrará fluorescência verde. E a terceira imagem que tiraremos são as células mortas, que é a coloração Thm Homodimer. E com luz verde, obteremos fluorescência vermelha.