Um ensaio imunossorbente ligado à enzima (ELISA) é normalmente realizado para detectar a presença e/ou quantidade de uma proteína alvo de interesse dentro de uma amostra experimental. A detecção da proteína alvo é possível por anticorpos, que fazem do ELISA um imunoensaio. Através de uma série de etapas de incubação e lavagem, esses anticorpos, que são frequentemente ligados, ou conjugados, a uma enzima, detectarão o revestimento de proteínas na parte inferior de um poço em uma placa de microtráde. Quando exposta a um substrato, a enzima ligada a anticorpos causará uma mudança de cor, indicando assim a presença da proteína de interesse na amostra.
Neste vídeo, explica-se a teoria por trás de como as ELISAs funcionam, incluindo uma discussão sobre a ligação de anticorpos primários e secundários e a importância de bloquear etapas. A teoria é seguida pela prática, à medida que o vídeo progride para uma explicação do procedimento passo a passo. Finalmente, são introduzidas variações do ELISA padrão, como o sanduíche e os ELISAs competitivos, e as aplicações do mundo real deste método, como em testes de gravidez sem prescrição médica, são explicadas.
Procedimento
O ensaio elisa, ou ensaio imunossorbente ligado à enzima, é um método amplamente utilizado para determinar a presença ou ausência de uma proteína alvo específica. Através de uma série de etapas de lavagem e ligação, um anticorpo conjugado, ou ligado, a uma enzima reconhecerá uma proteína alvo na parte inferior de uma placa de 96 poços. Quando o substrato é adicionado à amostra, ocorrerá uma reação enzimática, causando uma mudança de cor que permite a identificação e quantificação da proteí…