Método para obtenção de células do cancro do ovário primárias de amostras sólidas

O objetivo geral deste procedimento é isolar e caracterizar células primárias de câncer de ovário a partir de amostras clínicas sólidas. Isso é feito primeiro coletando a amostra do tumor ovariano e colocando-a em uma placa de Petri. O segundo passo é cortar a amostra em pedaços e transferir os pedaços para um tubo cônico com reagentes de digestão para incubação.

Em seguida, a pasta celular é passada por um filtro onde apenas as células são coletadas Para centrifugação, a etapa final é descartar o sobrenadante e ressuspender as células em meio para incubação durante a noite. Em última análise, as células epiteliais do câncer de ovário crescerão em cultura por semanas, o que permite aplicações a jusante. Esse método pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo do câncer de ovário, como qual é a melhor opção de tratamento para cada paciente.

As implicações dessa técnica se estendem ao tratamento do câncer de ovário, pois nos permite usar culturas de células mais realistas, que são altamente suscetíveis à manipulação genética e são mais úteis para testes de triagem de drogas. Para começar, suplemente 500 mililitros de delcos, águias modificadas, médio ou DMEM com 10% de soro fetal bovino ou FBS e 1% de penicilina, estreptomicina ou ps. Armazene o meio a quatro graus Celsius.

Colete a amostra da sala de cirurgia e transporte-a no gelo para o laboratório ainda dentro do contêiner transportado. Colocar a amostra numa capa de segurança biológica. Transfira a amostra de um tubo cônico de 50 mililitros para uma placa de Petri de 60 milímetros por 60 milímetros contendo 10 mililitros de PBS fresco e gelado.

Em seguida, usando uma lâmina de barbear estéril, corte a amostra em pedaços de dois milímetros ou menores. Em seguida, trate o DMEM com um tubo de pasta de disco em um tubo cônico de 15 litros. Transferir os tecidos picados para o tubo de mistura DMEM dispa two.

Em seguida, incube a amostra a 5% de dióxido de carbono e 37 graus Celsius por 30 minutos. Agite manualmente a pasta celular a cada cinco minutos para garantir a digestão ideal. Após a incubação, transfira a pasta celular através de um filtro de células de malha de 70 micrômetros colocado em cima de um tubo cônico de 50 mililitros.

Aplique pressão suavemente contra a tela usando um êmbolo de seringa, descarte qualquer tecido não associado remanescente no topo da tela e colete a suspensão celular obtida no tubo cônico estéril de 50 mililitros. Em seguida, centrifugue. O tubo cônico a 320 vezes G por sete minutos a quatro graus Celsius.

Descarte o sobrenadante e ressuspenda o pellet celular em 10 mililitros de DMEM contendo 10% de FBS e 1% de ps. Em seguida, transfira a suspensão celular para uma placa de Petri e incube a suspensão a 5% de dióxido de carbono e 37 graus Celsius. Troque o meio 24 horas após o plaqueamento inicial para remover os detritos celulares e a maioria dos eritrócitos presentes na cultura.

Finalmente, troque o meio a cada três dias durante as duas semanas seguintes, após as quais as culturas de células EOC primárias estão prontas para aplicações a jusante. Imediatamente após o revestimento. As células epiteliais do câncer de ovário ou células EOC aparecem como suspensões unicelulares e em aglomerados com eritrócitos e abundam os detritos celulares.

A cultura de células EOC três dias após o plaqueamento mostra aglomerados de células EOC semiaderentes e menor contaminação eritrocitária. Uma semana após o plaqueamento inicial, a cultura de células EOC torna-se um aglomerado de células semelhante a um redemoinho que se espalha no plástico da cultura de tecidos. A morfologia típica do paralelepípedo epitelial pode ser vista em uma monocamada confluente de células EOC após 14 dias em cultura.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como isolar e caracterizar células primárias de câncer de ovário de amostras clínicas sólidas.