Método para obtenção de células do cancro do ovário primárias de amostras sólidas
4 de fevereiro de 2014
Este estudo descreve um método detalhado para o isolamento e caracterização de células de cancro do ovário a partir de espécimes clínicos primários sólidos. Espécimes clínicos de câncer de ovário são submetidos a digestão enzimática para obter, câncer viável sem fibroblastos epitelial de ovário células (EdC) altamente adequados para aplicações a jusante.
O objetivo geral deste procedimento é isolar e caracterizar células primárias de câncer de ovário a partir de amostras clínicas sólidas. Isso é feito primeiro coletando a amostra do tumor ovariano e colocando-a em uma placa de Petri. O segundo passo é cortar a amostra em pedaços e transferir os pedaços para um tubo cônico com reagentes de digestão para incubação.
Em seguida, a pasta celular é passada por um filtro onde apenas as células são coletadas Para centrifugação, a etapa final é descartar o sobrenadante e ressuspender as células em meio para incubação durante a noite. Em última análise, as células epiteliais do câncer de ovário crescerão em cultura por semanas, o que permite aplicações a jusante. Esse método pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo do câncer de ovário, como qual é a melhor opção de tratamento para cada paciente.
As implicações dessa técnica se estendem ao tratamento do câncer de ovário, pois nos permite usar culturas de células mais realistas, que são altamente suscetíveis à manipulação genética e são mais úteis para testes de triagem de drogas. Para começar, suplemente 500 mililitros de delcos, águias modificadas, médio ou DMEM com 10% de soro fetal bovino ou FBS e 1% de penicilina, estreptomicina ou ps. Armazene o meio a quatro graus Celsius.
Colete a amostra da sala de cirurgia e transporte-a no gelo para o laboratório ainda dentro do contêiner transportado. Colocar a amostra numa capa de segurança biológica. Transfira a amostra de um tubo cônico de 50 mililitros para uma placa de Petri de 60 milímetros por 60 milímetros contendo 10 mililitros de PBS fresco e gelado.
Em seguida, usando uma lâmina de barbear estéril, corte a amostra em pedaços de dois milímetros ou menores. Em seguida, trate o DMEM com um tubo de pasta de disco em um tubo cônico de 15 litros. Transferir os tecidos picados para o tubo de mistura DMEM dispa two.
Em seguida, incube a amostra a 5% de dióxido de carbono e 37 graus Celsius por 30 minutos. Agite manualmente a pasta celular a cada cinco minutos para garantir a digestão ideal. Após a incubação, transfira a pasta celular através de um filtro de células de malha de 70 micrômetros colocado em cima de um tubo cônico de 50 mililitros.
Aplique pressão suavemente contra a tela usando um êmbolo de seringa, descarte qualquer tecido não associado remanescente no topo da tela e colete a suspensão celular obtida no tubo cônico estéril de 50 mililitros. Em seguida, centrifugue. O tubo cônico a 320 vezes G por sete minutos a quatro graus Celsius.
Descarte o sobrenadante e ressuspenda o pellet celular em 10 mililitros de DMEM contendo 10% de FBS e 1% de ps. Em seguida, transfira a suspensão celular para uma placa de Petri e incube a suspensão a 5% de dióxido de carbono e 37 graus Celsius. Troque o meio 24 horas após o plaqueamento inicial para remover os detritos celulares e a maioria dos eritrócitos presentes na cultura.
Finalmente, troque o meio a cada três dias durante as duas semanas seguintes, após as quais as culturas de células EOC primárias estão prontas para aplicações a jusante. Imediatamente após o revestimento. As células epiteliais do câncer de ovário ou células EOC aparecem como suspensões unicelulares e em aglomerados com eritrócitos e abundam os detritos celulares.
A cultura de células EOC três dias após o plaqueamento mostra aglomerados de células EOC semiaderentes e menor contaminação eritrocitária. Uma semana após o plaqueamento inicial, a cultura de células EOC torna-se um aglomerado de células semelhante a um redemoinho que se espalha no plástico da cultura de tecidos. A morfologia típica do paralelepípedo epitelial pode ser vista em uma monocamada confluente de células EOC após 14 dias em cultura.
Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como isolar e caracterizar células primárias de câncer de ovário de amostras clínicas sólidas.
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos
Visão Geral
Este estudo descreve um método detalhado para o isolamento e a caracterização de células primárias de câncer de ovário a partir de espécimes clínicos sólidos. O procedimento permite o crescimento de células de câncer epitelial de ovário em cultura, facilitando aplicações posteriores.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Oncologia
- Biologia Celular
- Pesquisa Clínica
Contexto
- O câncer de ovário é uma preocupação significativa de saúde com opções de tratamento complexas.
- O isolamento de células cancerígenas viáveis é crucial para a medicina personalizada.
- Os métodos atuais podem não produzir células puras de câncer de ovário epitelial.
- Este estudo tem como objetivo aprimorar o processo de isolamento para melhores resultados na pesquisa.
Objetivo do Estudo
- Isolar células primárias de câncer de ovário a partir de espécimes clínicos.
- Caracterizar as células isoladas para aplicações posteriores.
- Aprimorar a compreensão das opções de tratamento para pacientes com câncer de ovário.
Métodos Utilizados
- Coleta de espécimes de tumores ovarianos.
- Digestão enzimática das amostras de tecido.
- Filtração para isolamento de células viáveis.
- Centrifugação e ressuspendimento em meio de cultura.
Resultados Principais
- Isolamento bem-sucedido de células cancerígenas epiteliais ovarianas livres de fibroblastos.
- As células podem ser cultivadas por semanas, permitindo estudos extensivos.
- O método fornece uma fonte confiável de células cancerígenas para pesquisa.
- Potencial para orientar estratégias de tratamento personalizadas.
Conclusões
- O método descrito é eficaz para o isolamento de células de câncer de ovário.
- Ele auxilia pesquisas futuras sobre tratamentos para câncer de ovário.
- Estudos futuros podem se basear neste método para melhorar os resultados em pacientes.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
O estabelecimento de células primárias de câncer de ovário a partir de espécimes clínicos sólidos permite modelos relevantes para o paciente, reduzindo a dependência de linhagens celulares subcultivadas com artefatos genéticos acumulados. Essa abordagem apoia a desmistificação mecanicista na validação de alvos, preservando a heterogeneidade tumoral e a biologia específica do local de lesões primárias ou metastáticas. Os cultivos resultantes fornecem uma fonte renovável para triagens subsequentes, melhorando a confiança preditiva na tomada de decisões pré-clínicas.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia Farmacêutica
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Valor Científico: Permite a investigação de hipóteses terapêuticas utilizando células que refletem o perfil genético e fenotípico da amostra clínica original.
- Valor Operacional: Reduz a ambiguidade mecanicista ao evitar artefatos associados a linhagens celulares com passagens de longo prazo.
- Valor Preditivo: Apoia a triagem de portfólios por meio da validação de alvos com menor risco biológico em um sistema relevante para a doença.
Desenvolvimento de Triagem e Ensaio
- Valor Científico: Produz células de câncer epitelial de ovário adequadas para triagem de fármacos, mantendo propriedades tumorigênicas.
- Valor Operacional: Fornece suspensões celulares padronizadas e reprodutíveis após digestão enzimática e filtração.
- Escalabilidade: Permite o preparo de múltiplas culturas primárias a partir de diferentes espécimes para testes paralelos de ensaios.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Continuidade Translacional: Conecta a descoberta e o trabalho pré-clínico ao utilizar células derivadas diretamente de espécimes de pacientes.
- Alinhamento de Biomarcadores: Permite a avaliação de alvos e biomarcadores em um contexto que reflete o tumor do paciente.
- Avanço Ajustado ao Risco: Orienta decisões de prosseguimento ou interrupção com base em respostas em células primárias que predizem melhor os resultados clínicos.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
O método se insere no continuum de descoberta que vai da biologia inicial à identificação de compostos líderes, fornecendo células primárias que aumentam a relevância dos esforços subsequentes de triagem e validação.
- Biologia da Descoberta: Apoia a verificação de hipóteses e a elucidação de vias utilizando células com características específicas de tumor preservadas.
- Triagem: Fornece células primárias de câncer epitelial de ovário prontas para ensaios, com crescimento e morfologia quantificáveis, para avaliação de compostos.
- Análises: Permite a medição da resposta ao fármaco, da proliferação e de alterações fenotípicas em um sistema geneticamente estável e de baixo número de passagens.
- Pesquisa Translacional: Mantém a relevância clínica por meio da obtenção direta a partir de espécimes, apoiando a validação de biomarcadores e alvos.
- Reutilização Empresarial: Estabelece uma plataforma reutilizável para a geração de culturas primárias a partir de diversos espécimes, reduzindo a dependência de linhagens celulares limitadas.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Aumenta a confiança preditiva ao utilizar células que refletem a heterogeneidade e a biologia do tumor original.
- Valor Operacional: Garante reprodutibilidade por meio de etapas padronizadas de digestão enzimática, filtração e início do cultivo.
- Valor Estratégico: Melhora a eficiência do capital ao reduzir o risco de falha em estágios avançados por meio de uma melhor validação pré-clínica de alvos.
- Impacto no Portfólio: Permite a priorização ajustada ao risco de candidatos com base na atividade em células primárias derivadas de pacientes.
Considerações sobre a Implementação
- Requer experiência em manipulação estéril de tecidos, digestão enzimática e técnicas de cultivo celular primário.
- Depende do acesso a espécimes frescos ou adequadamente preservados de tumores ovarianos coletados em condições estéreis.
- Necessita de equipamentos de centrifugação, filtração e cultivo, incluindo capelas de segurança biológica e incubadoras de CO2.
- Envolve a otimização do tempo de digestão e da dissociação mecânica para maximizar o rendimento de células epiteliais, minimizando ao mesmo tempo a contaminação por fibroblastos.
- Limitado pela disponibilidade e viabilidade do espécime, que pode variar conforme o momento cirúrgico e as condições de transporte.
