Obtenção de células primárias de câncer de ovário a partir de amostras sólidas: um método para cultivar células epiteliais de câncer de ovário a partir de amostras de tumor ovariano

As células epiteliais presentes na superfície externa do ovário podem sofrer transformação maligna em células cancerígenas que podem se transformar em tumores ovarianos.

Para isolar essas células epiteliais de câncer de ovário ou EOCs, comece pegando uma amostra de tumor de ovário e pique-a em pequenos pedaços. Transfira os pedaços picados para um tubo contendo um tampão de digestão suplementado com a enzima protease desejada.

Essas proteases degradam as proteínas da matriz extracelular dentro do tecido, liberando células EOC, eritrócitos e alguns fibroblastos dissociados em suspensão.

Filtre a pasta celular através de um filtro para separar as células individuais suspensas dos pedaços de tecido não dissociados. Centrifugue a suspensão para peletizar as células EOC, eritrócitos e fibroblastos. Rejeitar o sobrenadante que contém enzimas.

Ressuspenda o pellet celular em um meio de crescimento epitelial e transfira-o para uma placa de cultura. Incube a cultura para permitir que as células EOC e os fibroblastos se fixem na base da placa enquanto os eritrócitos flutuam no meio.

Remova os eritrócitos suspensos atualizando a mídia. Com o tempo, o meio facilita o crescimento seletivo de células EOC sobre fibroblastos para formar uma monocamada de células primárias de câncer de ovário.

Colete a amostra da sala de cirurgia e transporte-a no gelo para o laboratório. Ainda dentro do recipiente transportado, coloque a amostra em uma capa de segurança biológica. Transfira a amostra de um tubo cônico de 50 mililitros para uma placa de Petri de 60 milímetros por 60 milímetros contendo 10 mililitros de PBS fresco e gelado.

Em seguida, usando uma lâmina de barbear estéril, corte a amostra em pedaços de 2 milímetros ou menores. Em seguida, trate o DMEM com dispase II em um tubo cônico de 15 mililitros. Transferir os tecidos picados para o tubo de mistura DMEM dispase II. Em seguida, incube a amostra a 5% de dióxido de carbono e 37 graus Celsius por 30 minutos. Agite manualmente a pasta celular a cada cinco minutos para garantir a digestão ideal.

Após a incubação, transfira a pasta de células através de um filtro de células de malha de 70 micrômetros colocado em cima de um tubo cônico de 50 mililitros. Aplique pressão suavemente contra a malha usando um êmbolo de seringa. Rejeitar qualquer tecido não dissociado que permaneça no topo da malha e recolher a suspensão celular obtida no tubo cónico estéril de 50 ml.

Em seguida, centrifugue o tubo cônico a 320 x g por sete minutos a 4 graus Celsius. Rejeitar o sobrenadante e ressuspender o sedimento celular em 10 mililitros de DMEM contendo 10% de FBS e 1% de PS. Em seguida, transfira a suspensão celular para uma placa de Petri e incube a suspensão a 5% de dióxido de carbono e 37 graus Celsius. Troque o meio 24 horas após o plaqueamento inicial para remover os detritos celulares e a maioria dos eritrócitos presentes na cultura.

Finalmente, troque o meio a cada três dias pelas duas semanas seguintes, após as quais as culturas de células EOC primárias estão prontas para aplicações a jusante.

• Ovarian Tumor Sample - The tissue of origin from an ovarian tumor, used for lab analysis.
• Epithelial Ovarian Tumor Sample - A subtype of ovarian tumor sourced from epithelial cells.
• Ovarian Cancer Sample - Biopsy or excision sample of an ovarian malignant growth.
• DMEM - Standard cell culture medium used for growing mammalian cells.
• FBS - Fetal Bovine Serum, a supplement used in cell cultures to promote growth and survival.

• Introduce Ovarian Tumor Sample – The sample retrieved from patients, used for cellular analyses (e.g., epithelial ovarian tumor sample).
• Key Concepts – Overview of sample processing techniques (e.g., mincing, digestion).
• Underlying Mechanisms – Dissecting the biochemical processes during sample handling, e.g., enzymatic digestion and cell plating.
• Connect to Experiment – The cultivation of epithelial ovarian cancer cells paves the way for further cancer research.

• What is an ovarian tumor sample and how to process it?
• How does the sample processing facilitate downstream applications?
• Why does cell slurry need to be strained and centrifuged?

• Practical Applications – Ovarian cancer research and possible therapeutic development (e.g., drug screening).
• Industry Impact – Used in biomedical research and pharmaceutical industry (e.g., cancer drug development).
• Societal Importance – Advances in ovarian cancer treatment can increase survival rates (e.g., patient prognosis).
• Link to scientific Advancements – Adoption of this methodology contributes to cancer research advancements.