Modelo de transplante de hindlimb heterotópico parcial em ratos

Apresentamos um modelo cirúrgico confiável e reprodutível de transplante heterotópico de escalada em ratos. Esta técnica é ideal para estudos de curto prazo sobre preservação ou rejeição imunológica em VCA. A descrição passo a passo permitirá que os estagiários dominem rapidamente a cirurgia.

Para começar, faça uma incisão circunferencial na pele acima do tornozelo no terço distal da perna. Esqueleto e cauterizar a artéria safena e o ramo terminal da artéria popliteal usando fórceps bipolares. Cauterize e corte os músculos gastrocnemius, soleus, tibialis anterior e bíceps femoris até que o osso tibial seja exposto.

Faça uma incisão de 2,5 centímetros na linha inguinal direita e disseque a almofada de gordura inguinal. Use um retrátil de anzol para agarrar o ligamento inguinal. Segure a almofada de gordura inguinal distally com fórceps de fixação e retraia a almofada de gordura para expor os vasos femorais.

Disseca os vasos femorais, individualize os ramos de Murphy e ligante com laços de nylon 8/0. Heparinize o rato doador injetando a heparina na veia dorsal peniana usando uma agulha calibre 27,5. Complete a incisão da pele ao redor do quadril.

Use os fórceps bipolares para cauterizar os músculos bíceps femoris e glúteos superficialis, em seguida, cauterizar e cortar o nervo ciático no comprimento do fêmur médio. Exponha o fêmur proximalmente ao nível da crista femoral posterior e liga os vasos femorais com laços de nylon ao nível do ligamento inguinal. Realize uma arteriotomia na artéria femoral logo abaixo da ligadura e dilate para inserir o angiocateter de calibre 24.

Cauterize e corte o músculo restante debaixo do pedículo para expor o lado anterior do fêmur. Use o cortador de osso para cortar a tíbia proximally e corte o fêmur o mais distally possível. Lave a retalho parcial com dois mililitros de soro fisiológico de heparina para obter uma saída venosa clara.

Coloque a plataforma traseira no gelo em uma gaze estéril até a transferência microvascular. Disseque a almofada de gordura inguinal e recline a almofada de gordura inguinal distally para expor os vasos femorais. Use um gancho para retrair o ligamento inguinal e os fórceps de fixação para segurar a almofada de gordura inguinal distally.

Disseque os vasos femorais, individualize os ramos de Murphy, e ligante com laços de nylon como demonstrado. Ligate ambas as naves acima dos vasos epigástricos usando laços de nylon. Coloque os grampos aproximadores proximicamente, dilate a lente do vaso e enxágue com soro fisiológico de heparina.

Faça uma incisão no flanco esquerdo acima do quadril e crie um bolso subcutâneo com um túnel subcutâneo para o vinco inguinal. Coloque a parte proximal do membro parcial e a almofada de gordura inguinal através do túnel subcutâneo para transferência microvascular. Realize as anastomoses venosas e arteriais usando suturas de nylon.

Remova os dois grampos aproximadores e observe a revascularização do membro. Realize um teste de ordenha em ambos os vasos para avaliar a patência de cada anastomose. Faça uma incisão longitudinal da pele no lado medial do membro transplantado e insira o enxerto.

Remova o excesso de pele do enxerto e feche a ferida com suturas separadas e uma sutura em execução usando suturas absorventes 4/0. Sutura juntar as almofadas de gordura inguinal do membro transplantado e o receptor usando duas suturas absorvíveis separadas e fechar o vinco inguinal após o último check-up da anastomose microvascular. A evolução do modelo de retrocesso heterotópico foi monitorada até o final do estudo.

O crescimento capilar foi observado durante a primeira semana pós-operatória, e a retração cutânea apareceu após duas semanas. Falha vascularizada de aotransplante composto pode ocorrer durante a primeira semana pós-operatória devido à trombose microvascular. A trombose venosa foi a causa da eutanásia precoce em 20% dos casos, todos ocorridos antes do quinto dia de pós-operatório.

A pele parecia azul e ficava mais escura a cada dia. A automutilação é uma preocupação séria em enxertos não-sentidos e ocorre frequentemente entre o segundo e o sétimo dia. Se limitado a menos de um terço da superfície do enxerto e diz respeito apenas à pele, o debridamento cirúrgico e a sutura utilizando suturas não absorvíveis podem ser discutidos com o veterinário da equipe.

A prevenção da automutilação depende do uso de uma coleira e costurada no pescoço até o sétimo dia de pós-operatório e limpeza de qualquer sangue ou crosta nas feridas cirúrgicas do animal. Autofagia grave de múltiplas camadas do enxerto leva à eutanásia do animal. Cistos dérmicos apareceram após o pós-operatório 14, às vezes com um centro necrosado cutâneo antes da fístula.

É crucial garantir que a colocação do enxerto não impeça o animal de ser ambulatorial, e que o pedículo não esteja torcido ou apertado durante o inset do enxerto. Nossa equipe realizou estudos de preservação nos membros adquiridos antes do transplante. Os efeitos de diferentes durações do armazenamento estático a frio foram avaliados, bem como diferentes protocolos de perfusão de membros.