عالية الإنتاجية في المختبر المقايسة باستخدام الجهازيات الورم المستمدة من المريض

الأجهزة السرطانية المشتقة من المريض تلخص بنية ووظيفة أنسجة الورم بدقة مع استنساخ أفضل للمرض. لذلك ، يمكن تقييم استجابة المريض للأدوية المضادة للسرطان بدقة باستخدام هذا النموذج. الأورام العضوية غير مناسبة لنظام فحص الإنتاجية العالية في المختبر أو تحليل الخلايا بسبب تكوين مجموعات كبيرة في الثقافة.

باستخدام هذه التقنية ، تم تطوير HTS بسيطة وأكثر دقة لتقييم الأدوية الجزيئية المستهدفة. منذ الثقافة organoid يختلف كثيرا عن الثقافة 2D، قد يشعر المرء بالارتباك حول الثقافة في البداية، ولكن من المهم أن نلاحظ بعناية التغيرات المورفولوجية من organoids. بعد إزالة الخسيس المجمد من تخزين النيتروجين السائل ، قم بإثارة الأعضاء السرطانية المشتقة من المريض بلطف في حمام مائي عند 37 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة.

إزالة الخسيس من حمام الماء ومسح مع 70٪ الإيثانول. ثم ضع القارورة في خزانة السلامة البيولوجية. نقل organoids الورم في أنبوب 15 ملليلتر تحتوي على وسيطة ل organoids.

استخدام ماصة نقل ثلاثة ملليلتر لخلط بلطف organoids الورم والمتوسطة عن طريق الأنابيب صعودا وهبوطا خمس مرات. بيليه أسفل الأجهزة السرطانية عن طريق الطرد المركزي. تجاهل supernatant وإعادة إنفاق بيليه الورم organoid في خمسة ملليلتر من المتوسطة الطازجة.

نقل تعليق الورم organoid في قارورة T25 واحتضان في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. بعد أسبوع واحد من المقطع الأول، نقل تعليق الورم organoid من اثنين من قوارير T25 إلى اثنين من أنابيب الطرد المركزي والكريه أسفل organoids الورم عن طريق الطرد المركزي. تقدير حجم الورم بيليه organoid وإعادة إنفاق بيليه في 2.5 ملليلتر من المتوسطة الطازجة لكل أنبوب.

تجمع تعليق الورم organoid في أنبوب واحد. نقل تعليق مجمعة في قارورة T75 تحتوي على 10 ملليلتر من المتوسطة الطازجة واحتضان في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. بعد 24 ساعة من التغيير المتوسط، فرم الأعضاء السرطانية باستخدام تفتيت الخلايا وأداة التشتت مجهزة حامل مرشح يحتوي على مرشح شبكة 70 ميكرومتر.

تمييع 15 ملليلتر من تعليق الورم العضوي 10 مرات. استخدام موزع تعليق الخلية لزرع 40 ميكرولتر من تعليق الورم العضي المخفف في 384 جيدا مرفق منخفض جدا لوحة صغيرة كروية. بعد 24 ساعة، استخدم معالج سائل لإضافة 0.04 ميكرولتر من حلول عوامل الاختبار من 10 مخففات متسلسلة في نطاقات تركيز نهائية من 20 ميكرومولار إلى 1.0 نانومولار في الآبار، واحتضان اللوحة لمدة ستة أيام.

في نهاية الحضانة، أضف كاشف قياس ATP داخل الخلايا في آبار الاختبار. استخدم الخلاط لخلط محتويات اللوحة واحتضان اللوحة لمدة 10 دقائق عند حوالي 25 درجة مئوية. استخدم قارئ لوحة لقياس محتوى ATP داخل الخلية كما التلألؤ.

بعد 24 ساعة من الممر الثالث، ضع لوحة صغيرة فائقة النحافة من المرفقات منخفضة للغاية 384 مع 40 ميكرولتر من المتوسط لكل طبق وجهة على نظام التقاط الخلايا والتصوير. بناء غرفة الانتقاء مع ستة ملليلتر من الثقافة المتوسطة والطرد المركزي في 1، 500 مرة G لمدة دقيقتين لإزالة فقاعات الهواء. إضافة أربعة ميكرولترات من تعليق الورم organoid في غرفة الانتقاء، وتعيين غرفة الانتقاء على النظام.

السماح لمجموعات الخلية لتسوية في الجزء السفلي من الغرفة لمدة دقيقة واحدة بعد التشتت ومن ثم بدء المسح الضوئي الغرفة. تعيين حجم الانتقاء إلى 140 إلى 160 ميكرومتر على النظام للاختيار التلقائي لمجموعات الخلايا. بعد ذلك، تحقق من جودة مجموعات الخلايا المحددة على الصور الممسوحة ضوئيا ونقل 10 مجموعات خلايا لكل بئر باستخدام نصائح الانتقاء في لوحة الوجهة.

في الدراسة الحالية ، تم تقييم تأثير العوامل المضادة للسرطان على عضو الورم المشتقة من المريض. وقد أشارت قيم التركيز المثبطة القصوى النصفية إلى الحساسية العالية لجميع عوامل مضادة القلق أقل من ميكرومولارين في المنطقة تحت قيم المنحنى أقل من 282. بالنسبة لتقييم السمية الخلوية المعتمدة على الأجسام المضادة ، تم قياس التحلل الخلوي في المئة من الأعضاء السرطانية في وجود جسمين مضادين مختلفين.

زاد تحليل الخلايا في المئة مع مرور الوقت. دون الأجسام المضادة في ست ساعات مع نسبة الخلايا التأثير إلى الهدف من واحد إلى واحد، وصل تحليل الخلايا 45٪، بينما في نسبة اثنين إلى واحد، وصل تحليل الخلايا 70٪، وتحلل الخلايا القاتل الطبيعي بوساطة باستخدام trastuzumab كان ما يقرب من 60٪ في نسبة التأثير إلى الخلية المستهدفة من واحد إلى واحد، و 80٪ بنسبة اثنين إلى واحد في ست ساعات. في المقابل, وكان cetuximab تأثير الجرعة تعتمد على الخلية القاتل الطبيعية بوساطة تحليل الخلايا.

في أعلى تركيز من cetuximab, لوحظ 90٪ تحليل الخلايا في نسبة الخلايا من واحد إلى واحد، ولوحظ 100٪ تحليل الخلايا بنسبة اثنين إلى واحد, مما يدل على تأثيرية عالية من cetuximab. نظام تقييم الإنتاجية العالية باستخدام الأجهزة السرطانية المشتقة من المريض متفوقة على تقييم العوامل المضادة للسرطان المحتملة ويقدم فرصا لتقييم الأدوية والتقدم في الطب الشخصي.