Name: Estudando a conversa cruzada de células endoteliais adiposas/adipócitos no tecido adiposo subcutâneo humano (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-05T14:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 35 s
Description: Aprenda a isolar e cultivar células endoteliais microvasculares de tecido adiposo subcutâneo humano para estudar a conversa cruzada com adipócitos em doenças cardiovasculares.

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<meta charset="utf8"></head><body>SATMVECs humanos: estudos de isolamento e diafonia de adipócitos

<ol><li>Bierhansl, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+role+of+metabolism+in+endothelial+cell+function+and+vascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Central role of metabolism in endothelial cell function and vascular disease.</a> Physiology. 32 (2), 126-140 (2017).</li>
<li>Aird, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell heterogeneity.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 2 (1), a006429(2012).</li>
<li>Rajendran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vascular+endothelium+and+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">The vascular endothelium and human diseases.</a> Int J Biol Sci. 9 (10), 1057-1069 (2013).</li>
<li>Brown, O. I., Bridge, K., Kearney, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidases+in+glucose+homeostasis+and+diabetes-related+endothelial+cell+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases in glucose homeostasis and diabetes-related endothelial cell dysfunction.</a> Cells. 10 (9), 2315(2021).</li>
<li>Luk, C., Haywood, N. J., Bridge, K. I., Kearney, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paracrine+role+of+the+endothelium+in+metabolic+homeostasis+in+health+and+nutrient+excess%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Paracrine role of the endothelium in metabolic homeostasis in health and nutrient excess.</a> Front Cardiovasc Med. 26 (9), 882923(2022).</li>
<li>Click-iT EdU Imaging Kits. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2Fmp10338.pdf">https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2Fmp10338.pdf</a> (2024).</li>
<li>Bouïs, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelium+in+vitro%3A+A+review+of+human+vascular+endothelial+cell+lines+for+blood+vessel-related+research%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Endothelium in vitro: A review of human vascular endothelial cell lines for blood vessel-related research.</a> Angiogenesis. 4 (2), 91-102 (2001).</li>
<li>Ades, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HMEC-1%3A+establishment+of+an+immortalized+human+microvascular+endothelial+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">HMEC-1: establishment of an immortalized human microvascular endothelial cell line.</a> J Invest Dermatol. 99 (6), 683-690 (1992).</li>
<li>Chi, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+diversity+revealed+by+global+expression+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell diversity revealed by global expression profiling.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (19), 10623-10628 (2003).</li>
<li>Brignole, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((213+ESC+Guidelines+on+cardiac+pacing+and+cardiac+resynchronization+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">213 ESC Guidelines on cardiac pacing and cardiac resynchronization therapy.</a> Eur Heart J. 34 (29), 2281-2329 (2013).</li>
<li>Greenspon, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+permanent+pacemaker+implantation+in+the+United+States+from+1993+to+2009%3A+Increasing+complexity+of+patients+and+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Trends in permanent pacemaker implantation in the United States from 1993 to 2009: Increasing complexity of patients and procedures.</a> J Am Coll Cardiol. 60 (16), 1540-1545 (2012).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Prioritized+Research+Agenda+for+Prevention+and+Control+of+Noncommunicable+Diseases%22">Prioritized Research Agenda for Prevention and Control of Noncommunicable Diseases</a>. Mendis, S. A., Alwan, A. , World Health Organization. Geneva. (2011).</li>
<li>Brown, O. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+among+diabetes%2C+obesity%2C+and+cardiovascular+disease+phenotypes%3A+A+UK+biobank+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Relationship among diabetes, obesity, and cardiovascular disease phenotypes: A UK biobank cohort study.</a> Diabetes Care. 46 (8), 1531-1540 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>170L CO2 Incubadora</td><td>GS Biotech</td><td>170G-014</td><td></td></tr><tr><td>2-NBDG (2-(N-(7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-il)Amino)-2-Desoxiglicose)</td><td>Invitrogen</td><td>N13195</td><td></td></tr><tr><td>4% PARAFIX fixador histológico tamponado</td><td>VWR Chemicals</td><td>PRC/R/38/1</td><td></td></tr><tr><td>Akt (tAkt) Tecnologia de Sinalização Celular 1:1000</td><td></td><td>9272</td><td></td></tr><tr><td>BD Venflon Pro Safety 14 g x 45 mm, Laranja, 50/pk</td><td>Solução de</td> albumina de soro bovino Medisave <td>393230</td><td></td></tr><tr><td>, 7.5%</td><td>Merck</td><td>A8412-100ML</td><td></td></tr><tr><td>CD144&nbsp;( VE-Caderina) Anticorpo, anti-humano, PE, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-118-495</td><td></td></tr><tr><td>CD31 Anticorpo, anti-humano, PerCP-Vio 700, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-110-811</td><td></td></tr><tr><td>CD31 MicroBead Kit, humano, 1 kit</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-935</td><td></td></tr><tr><td>CD45 Anticorpo, anti-humano, FITC, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-110-769</td><td></td></tr><tr><td>Extração de células Buffer</td><td>Invitrogen</td><td>FNN0011</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge 5804 R</td><td>Eppendorf</td><td>5805000060</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT EdU Kit de Proliferação Celular para Imagem, Corante Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>C10337</td><td>Kit de imagem de proliferação celular</td></tr><tr><td>Colagenose/Dispase, 500 mg</td><td>Roche/Merck</td><td>11097113001</td><td></td></tr><tr><td>Corning Matrigel Matriz de Membrana Basal Reduzida ao Fator de Crescimento (TFG)</td><td>Corning&nbsp;</td><td>354230</td><td>Basement Membrane Matrix</td></tr><tr><td>Corning 100 mm TC-treated Culture Dish</td><td>Corning&nbsp;</td><td></td><td></td>430167</tr><tr><td>Placas de Múltiplos Poços Transparentes de 24 Poços Costar, Embaladas Individualmente, Corning Estéril</td><td>&nbsp;</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>Costar 6-well Clear TC-treated Multiple Well Plates, Embaladas Individualmente, Corning Estéril</td><td>&nbsp;</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>CytoFLEX S &ndash; 4 Citômetro de fluxo de laser</td> Kit de Remoção de Células <td>Mortas Beckman</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&prime; s Fosfato Tampolado Salino</td><td>Merck</td><td>D8537-500ML</td><td></td></tr><tr><td>EASYstrainer Peneira de células para tubos de 50 mL, 70 &micro; m mesh, Azul, estéril, 50/pk</td><td>Greiner Bio-One</td><td>542070</td><td></td></tr><tr><td>Meio de Crescimento de Células Endoteliais MV</td><td>PromoCell</td><td>C-22020</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Safe-Lock micro tubos de ensaio</td><td>Merck</td><td>EP0030120094</td><td></td></tr><tr><td>Solução de ácido etilenodiaminotetracético</td><td>Merck</td><td>E8008-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 24 Poços TC-Treated Cell Polystyrene Placa Companheira de Suporte, com Tampa, Estéril, 1/Pacote, 50/Caixa</td><td>Appleton Woods</td><td>CF537</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Suporte Permeável para Placa de 24 Poços com 0.4 &micro; m Membrana PET Transparente, Estéril, 1/Pacote, 48/Caixa</td><td>Appleton Woods</td><td>CF521</td><td></td></tr><tr><td>Meio de Congelamento Cryo-SFM</td><td>PromoCell</td><td>C-29912</td><td></td></tr><tr><td>Solução de gelatina, 2% em água</td><td>Merck</td><td>G1393-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Antibiótico-Antimicótico (100x), 100mL</td><td>Enzima Fisher Scientific</td><td>11570486</td><td></td></tr><tr><td>Gibco TrypLE Select (1x), sem fenol vermelho</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td>12563029</tr><tr><td>Hanks&prime; Solução salina balanceada</td><td>Merck</td><td>H6648-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Células pré-adipócitos subcutâneas humanas</td><td>Lonza</td><td>PT-5020</td><td></td></tr><tr><td>Incucyte ZOOM</td><td>Essen BioScience</td><td></td><td>Sistema de análise de células vivas</td></tr><tr><td>Solução de insulina humana</td><td>Merck</td><td>I9278-5ML</td><td></td></tr><tr><td>LS Colunas, 25/pk</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>Solução de Armazenamento de Tecidos MACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-100-008</td><td></td></tr><tr><td>MACSmix Rotador de Tubo</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-753</td><td></td></tr><tr><td>Rotador de Tubo MS Colunas, 25/pk</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE 4&ndash; 12% Bis-Tris Gel</td><td>Invitrogen</td><td>NP0322BOX</td><td></td></tr><tr><td>Separador OctoMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-109</td><td></td></tr><tr><td>PGM-2 Meio de Crescimento de Pré-adipócitos-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>PT-8002</td><td></td></tr><tr><td>Phospho (Ser1177) eNOS Rabbit 1:1000</td><td>Tecnologia de Sinalização Celular</td><td>9570</td><td></td></tr><tr><td>Phospho-Akt (Ser473) Rabbit&nbsp; 1:1000</td><td>Tecnologia</td> <td>de Sinalização Celular4060</td><td></td></tr><tr><td>Filtros de Pré-Separação 30 &micro; m, 50/pk</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>Solução de coloração de iodeto de propídio (PI)/RNase</td><td>Tecnologia de sinalização celular</td><td>4087</td><td></td></tr><tr><td>Separador QuadroMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi descartável estilo estéril 10</td><td>VWRI</td><td>501</td><td></td></tr><tr><td>Tubo com tampa de rosca, 15 ml, (Lx&Oslash;): 120 x 17 mm, PP, com impressão</td><td>Sarstetd</td><td>62.554.502</td><td></td></tr><tr><td>Tubo com tampa de rosca, 50 ml, (Lx&Oslash;): 114 x 28 mm, PP, com impressão</td><td>Sarstedt</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>Tubo com tampa de rosca, 50 ml, (Lx&Oslash;): 114 x 28 mm, PP, com impressão</td><td>Sarstetd</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>Total eNOS Mouse 1:1000</td><td>BD Biosciences</td><td>610297</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100, BioUltra, para biologia molecular</td><td>Merck</td><td>93443-500ML</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Actina (C4) Camundongo 1:5000</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>&nbsp; SC-47778</td><td></td></tr></tbody></table>

estudando a conversa cruzada de células endoteliais adiposas/adipócitos no tecido adiposo subcutâneo humano

Studying Adipose Endothelial Cell/Adipocyte Cross-Talk in Human Subcutaneous Adipose Tissue

Pureza e fenótipo hSATMVEC O hSATMVEC isolado de pacientes controle (ou seja, aquelas pessoas sem história de doença cardiometabólica) foi de 99,5% CD31+CD144+CD45- na citometria de fluxo (Figura 2). O hSATMVEC isolado tinha uma morfologia semelhante a paralelepípedos típica de CEs ( Figura 3A ). Os hSATMVECs tiveram um tempo médio de duplicação da população de 56,6 h ± 8,1 h (média ± SEM, n = 10) (Figura 3B), e a replicação ativa do DNA em hSATMVECs foi confirmada usando um kit de imagem de proliferação celular ( Figura 3C ).
hSATMVEC se comportou como MVECs funcionais e formou tubos em Matrigel (Figura 3D). A expressão relativa das proteínas-chave envolvidas na via de sinalização da insulina Akt-eNOS é mostrada na Figura 3E. Tanto os eNOs quanto a Akt demonstraram aumentos na fosforilação induzida pela insulina, representada como a razão entre proteína fosforilada e proteína total normalizada para ß-actina (Figura 3E).
co-cultura de hSATMVEC-adipócitos Um modelo ilustrativo de co-cultura de hSATMVEC-adipócitos pode ser visto na Figura 4A. À medida que os pré-adipócitos brancos subcutâneos humanos se tornam mais diferenciados, nota-se o desenvolvimento de vacúolos lipídicos ( Figura 4B ), que pode ser quantificado pela coloração Oil Red O ( Figura 4B ).
O contraste de fase ilustrativo e a imagem de fluorescência (excitação 440-480 nm / emissão 504-544 nm) de adipócitos diferenciados após 30 minutos de incubação com 20 μM de glicose 2-NBD são mostrados na Figura 4C. A captação de glicose pode ser quantificada medindo a área verde como uma porcentagem da área total da célula.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig01v2.jpg"> Figura 1: Esquema demonstrando a coleta e processamento de hSATMVECs <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig02.jpg"> Figura 2: Saída típica da análise de citometria de fluxo de hSATMVECs cultivados. (A) Gráfico de dispersão da área de dispersão lateral (SSC-A) e área de dispersão direta (FSC-A) mostrando gating (caixa vermelha) de hSATMVECs cultivados em torno da densidade populacional de células específicas. (B) Gráfico de dispersão da largura de dispersão direta (FSC-Width) e FSC-A mostrando gating (caixa vermelha) de hSATMVECs cultivados em torno da densidade populacional de células específicas. (C) Histograma mostrando fluorescência de células fechadas para CD45-FITC. (D) Gráfico de dispersão da intensidade de fluorescência de CD144-PE (eixo x) e CD31-PerCP (eixo y). (E) Histograma mostrando fluorescência de células fechadas para CD144-PE. (F) Histograma mostrando fluorescência de células fechadas para CD31-PerCP. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig03.jpg"> Figura 3: fenótipo hSATMVEC. (A) Imagem de microscopia óptica de hSATMVEC perto da confluência mostrando aparência de paralelepípedo. (B) tempo de duplicação do hSATMVEC - Microscopia de luz do HATEC realizada com 24 h de intervalo, demonstrando a extensão da proliferação celular. (C) proliferação de hSATMVEC. Microscopia de fluorescência de hSATMVEC com iodeto de propídio e EdU/Alexa-fluor 488 de indivíduos controle. (D) Formação de tubo hSATMVEC de indivíduos de controle (imagens tiradas com ampliação de 4x). (E) Estimulação com insulina de HATECs - mostrando expressão relativa de Akt fosforilada (serina 473) para Akt total (painel esquerdo) eNOS fosforilada (serina 1177) para eNOS total (painel direito) em concentrações crescentes de insulina com western blots ilustrativos abaixo padronizado para B-actina. Os dados são mostrados como média ± SEM. Os tamanhos das amostras estão abaixo de cada painel. Abreviaturas: 5-Etinil-2'-desoxiuridina (EdU), células endoteliais microvasculares do tecido adiposo subcutâneo humano (hSATMVEC), erro padrão da média (SEM). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig04.jpg"> Figura 4: co-cultura de hSATMVEC-adipócitos. (A) Imagem esquemática da co-cultura de hSATMVEC-adipócitos. (B) Diferenciação de adipócitos. O painel esquerdo mostra os pré-adipócitos no dia 0 e o painel direito mostra os adipócitos diferenciados no dia 10 após a adição de PDM. A figura inferior mostra a quantidade de lipídios armazenados em adipócitos e pré-adipócitos corados com Oil Red O. (C) Ensaio de captação de glicose. O painel esquerdo mostra imagens de fase de adipócitos após co-cultura e incubação com 20 μM de glicose 2-NBD por 30 min. O painel direito mostra imagens verdes a partir das quais a captação de glicose (como % verde da área total) pode ser quantificada. Os dados são mostrados como média ± SEM. Abreviaturas: Dia 10 (D10), células endoteliais microvasculares do tecido adiposo subcutâneo humano (hSATMVEC), meios de diferenciação de pré-adipócitos (PDM) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
Tabela Suplementar 1: Coquetel de coloração para citometria de fluxo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/Supplementary%20Table%201.zip" target="_blank">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>

Estudando a conversa cruzada de células endoteliais adiposas/adipócitos no tecido adiposo subcutâneo humano

Microvascular endothelial cells (MVECs) have many critical roles, including control of vascular tone, regulation of thrombosis, and angiogenesis. ...

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O tecido adiposo (TA) pode influenciar a homeostase de todo o corpo, portanto, entender os mecanismos moleculares de diferenciação e função dos adipócitos é importante. Fornecemos um protocolo para obter novos insights sobre esses processos, analisando a homeostase, diferenciação e exposição à hipóxia dos adipócitos como um modelo para a apoptose induzida de adipócitos.

Mecanismo do Regulamento de Números de adipócitos em adultos Organismos através da diferenciação e apoptose homeostase

Aqui, relatamos um método para o isolamento das populações de células progênitentes de adipócitos (APC) do tecido de tecido adiposo perivascular (PVAT) usando a classificação celular celular ativada por magnética (MCS). Este método permite um maior isolamento de APC por grama de tecido adiposo quando comparado à Classificação de células ativadas por fluorescência (FACS).

Expansão e adipogênese Indução de progenitores de adipócitos do tecido adiposo perivascular isolado pela classificação de células ativadas magnéticas

A diferenciação dos adipócitos brancos e bege de tecido adiposo vascular progenitores tem potencial para melhoria metabólica em obesidade. Descrevemos os protocolos para um CD34 + CD31 + isolamento de células endoteliais de gordura humana e uma subsequente em vitro expansão e diferenciação em adipócitos brancos e bege. Diversas aplicações a jusante são discutidas.

Isolamento, expansão e indução de Adipogenic de CD34 + CD31 + células endoteliais de tecido adiposo humano de Omental e subcutâneo

Devido ao alto teor lipídico, o tecido adiposo tem sido desafiador para visualizar usando métodos histológicos de tradicionais. Adipo-Clear é um tecido de limpeza técnica que permite que a rotulagem robusto e alta resolução imagem fluorescente volumétrica do tecido adiposo. Aqui, descrevemos os métodos para a preparação da amostra, pré-tratamento, coloração, limpeza e montagem para a imagem latente.

Adipo-Clear: Um método de compensação por imagem tridimensional do tecido adiposo tecido

Descrevemos um sistema de cultura in vitro de matriz extracelular em 3D que permite a dissecação dos papéis da matriz e dos adipócitos em contribuir para o fenótipo metabólico do tecido adiposo.

Um modelo de cultura de matriz-adipócito extracelular humano para estudar crosstalk metabólico de matriz e células

Apresentamos um protocolo para o isolamento, cultura e indução adipogênica de células-tronco derivadas de adipose derivados da crista neural (NCADSCs) do tecido periártico adiposo de Wnt-1 Cre+/-; Rostou rosa26RFP/+. Os NCADSCs podem ser uma fonte de ADSCs facilmente acessível para modelar adipogênese ou lipogênese in vitro.

Isolamento, cultura e indução adipogênica de células-tronco originais de adipose da crista neural do tecido adipogênico periaorótico

Este protocolo descreve a abordagem técnica para isolar subpopulações de células estromais adipogênicas e fibroinflamatórias de depósitos de tecido adiposo branco intra-abdominal murino (WAT) por classificação de células ativadas por fluorescência ou separação de esferas imunomagnéticas.

Isolamento de Subpopulações de Células Estromais Adipogênicas e Fibro-Inflamatórias de Depósitos Adiposos Intra-Abdominais Murinos

Este protocolo fornece um método eficiente de digestão de colagenase para isolamento de adipócitos viáveis e células da fração vascular estromal-SVF da gordura visceral humana em um único processo, incluindo metodologia para obtenção de RNA de alta qualidade a partir de adipócitos e fenotipificação de macrófagos SVF através da coloração de múltiplos marcadores ligados à membrana para análise por citometria de fluxo.

Isolamento de Adipócitos Viáveis e Fração Vascular Estromal do Tecido Adiposo Visceral Humano Adequado para Análise de RNA e Fenotipagem de Macrófagos

O manuscrito e o vídeo associado demonstram uma técnica de biópsia percutânea para obter amostras de tecido adiposo subcutâneo de áreas ao redor do umbigo. Este método é uma maneira de baixo risco e eficiente para investigar uma série de parâmetros (por exemplo, expressão genética ou proteica, atividade enzimática, conteúdo lipídico) dentro do tecido adiposo.

Amostragem de tecido adiposo subcutâneo humano usando uma técnica de mini-lipoaspiração

Este protocolo descreve o isolamento semi-automatizado da fração vascular estromal (FVS) do tecido adiposo murino para obtenção de pré-adipócitos e diferenciação de adipócitos in vitro. O uso de um dissociador tecidual para digestão da colagenase reduz a variação experimental e aumenta a reprodutibilidade.

Isolamento Semi-Automatizado da Fração Vascular Estromal do Tecido Adiposo Branco Murino Usando um Dissociador de Tecido

Aprenda a isolar e cultivar células endoteliais microvasculares de tecido adiposo subcutâneo humano para estudar a conversa cruzada com adipócitos em doenças cardiovasculares.

Estudando a conversa cruzada de células endoteliais adiposas/adipócitos no tecido adiposo subcutâneo humano

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