Name: Imagem ao vivo e caracterização da dinâmica da microglia e interações com sinapses na retina murina doente (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-16T12:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 19 s
Description: Aprenda a quantificar a dinâmica da microglia e suas interações com sinapses na retina murina usando microscopia confocal de disco giratório e análise de imagem 3D. Este método ex vivo permite estudar a poda sináptica mediada por microglia em modelos de neurodegeneração retiniana.

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<ol><li>Wu, Y. K., Hengen, K. B., Turrigiano, G. G., Gjorgjieva, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homeostatic+mechanisms+regulate+distinct+aspects+of+cortical+circuit+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Homeostatic mechanisms regulate distinct aspects of cortical circuit dynamics.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 117 (39), 24514-24525 (2020).</li>
<li>Paolicelli, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+pruning+by+microglia+is+necessary+for+normal+brain+development%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Synaptic pruning by microglia is necessary for normal brain development.</a> Science. 333 (6048), 1456-1458 (2011).</li>
<li>Rosin, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+microglia+interact+with+hypothalamic+radial+glia+during+development+and+upregulate+the+TAM+receptors+MERTK+and+AXL+following+an+insult%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Embryonic microglia interact with hypothalamic radial glia during development and upregulate the TAM receptors MERTK and AXL following an insult.</a> Cell Rep. 34 (1), 108587(2021).</li>
<li>Wang, X., Li, K., Guo, L., Liu, X., Guo, Y., Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+changes+in+microglia+development+on+the+plasticity+of+the+developing+visual+cortex+circuit+in+juvenile+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The influence of changes in microglia development on the plasticity of the developing visual cortex circuit in juvenile mice.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 66 (4), 45(2025).</li>
<li>Blume, Z. I., Lambert, J. M., Lovel, A. G., Mitchell, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+the+developing+retina+couple+phagocytosis+with+the+progression+of+apoptosis+via+P2RY12+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Microglia in the developing retina couple phagocytosis with the progression of apoptosis via P2RY12 signaling.</a> Dev Dyn. 249 (6), 723-740 (2020).</li>
<li>Brown, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+are+dispensable+for+experience-dependent+refinement+of+mouse+visual+circuitry%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglia are dispensable for experience-dependent refinement of mouse visual circuitry.</a> Nat Neurosci. 27 (8), 1462-1467 (2024).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+use+TAM+receptors+to+detect+and+engulf+amyloid+%CE%B2+plaques%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Microglia use TAM receptors to detect and engulf amyloid β plaques.</a> Nat Immunol. 22 (5), 586-594 (2021).</li>
<li>Ding, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+microglial+SIRP%CE%B1+promotes+synaptic+pruning+in+preclinical+models+of+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Loss of microglial SIRPα promotes synaptic pruning in preclinical models of neurodegeneration.</a> Nat Commun. 12 (1), 2030(2021).</li>
<li>He, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+mediate+synaptic+material+clearance+at+the+early+stage+of+rats+with+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Microglia mediate synaptic material clearance at the early stage of rats with retinitis pigmentosa.</a> Front Immunol. 10, 912(2019).</li>
<li>Yu, A., Fang, C., Tan, L. X., Lakkaraju, A., Della Santina, L., Ou, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+target+synaptic+sites+early+during+excitatory+circuit+disassembly+in+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Microglia target synaptic sites early during excitatory circuit disassembly in neurodegeneration.</a> iScience. 28 (4), 112201(2025).</li>
<li>Xu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+changes+and+the+response+of+microglia+in+a+light-induced+photoreceptor+degeneration+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Synaptic changes and the response of microglia in a light-induced photoreceptor degeneration model.</a> Mol Vis. 27, 206-220 (2021).</li>
<li>Paolicelli, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+states+and+nomenclature%3A+a+field+at+its+crossroads%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Microglia states and nomenclature: a field at its crossroads.</a> Neuron. 110 (21), 3458-3483 (2022).</li>
<li>Yu, Z., Gutu, A., Kim, N., O'Shea, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synapse+weakening-induced+caspase-3+activity+confers+specificity+to+microglia-mediated+synapse+elimination%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Synapse weakening-induced caspase-3 activity confers specificity to microglia-mediated synapse elimination.</a> bioRxiv. , (2024).</li>
<li>Miller, E. B., Zhang, P., Ching, K., Pugh, E. N., Burns, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+reveals+transient+microglia+recruitment+and+functional+recovery+of+photoreceptor+signaling+after+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging reveals transient microglia recruitment and functional recovery of photoreceptor signaling after injury.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 116 (33), 16603-16612 (2019).</li>
<li>Wahl, D. J., Ng, R., Ju, M. J., Jian, Y., Sarunic, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensorless+adaptive+optics+multimodal+en-face+small+animal+retinal+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Sensorless adaptive optics multimodal en-face small animal retinal imaging.</a> Biomed Opt Express. 10 (1), 252(2019).</li>
<li>Ou, Y., Jo, R. E., Ullian, E. M., Wong, R. O. L., Della Santina, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+vulnerability+of+specific+retinal+ganglion+cell+types+and+synapses+after+transient+ocular+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Selective vulnerability of specific retinal ganglion cell types and synapses after transient ocular hypertension.</a> J Neurosci. 36 (35), 9240-9252 (2016).</li>
<li>Della Santina, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disassembly+and+rewiring+of+a+mature+converging+excitatory+circuit+following+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Disassembly and rewiring of a mature converging excitatory circuit following injury.</a> Cell Rep. 36 (5), 109463(2021).</li>
<li>Ramírez, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+changes+in+the+early+aging+stage+in+a+healthy+retina+and+an+experimental+glaucoma+model%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Microglial changes in the early aging stage in a healthy retina and an experimental glaucoma model.</a> Prog Brain Res. 256, 125-149 (2020).</li>
<li>de Hoz, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bilateral+early+activation+of+retinal+microglial+cells+in+a+mouse+model+of+unilateral+laser-induced+experimental+ocular+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Bilateral early activation of retinal microglial cells in a mouse model of unilateral laser-induced experimental ocular hypertension.</a> Exp Eye Res. 171, 12-29 (2018).</li>
<li>Soliño, M., Yu, A., Della Santina, L., Ou, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+survey+of+excitatory+synapses+reveals+sublamina-specific+and+asymmetric+synapse+disassembly+in+a+neurodegenerative+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Large-scale survey of excitatory synapses reveals sublamina-specific and asymmetric synapse disassembly in a neurodegenerative circuit.</a> iScience. 26 (8), 107262(2023).</li>
<li>Negrini, M., Wang, G., Heuer, A., Björklund, T., Davidsson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AAV+production+everywhere%3A+a+simple%2C+fast%2C+and+reliable+protocol+for+in-house+AAV+vector+production+based+on+chloroform+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Neurosci%22%5BJournal%5D)">AAV production everywhere: a simple, fast, and reliable protocol for in-house AAV vector production based on chloroform extraction.</a> Curr Protoc Neurosci. 93 (1), e103(2020).</li>
<li>Imaris reference manual. , 
 <a target="_blank" href="https://lims.gzzoc.com/files/instrument/20240722/2024072212391299299_ImarisManual.pdf">https://lims.gzzoc.com/files/instrument/20240722/2024072212391299299_ImarisManual.pdf</a> (2024).</li>
<li>Joseph, A., Power, D., Schallek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+the+dynamics+of+individual+processes+of+microglia+in+the+living+retina+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Imaging the dynamics of individual processes of microglia in the living retina in vivo.</a> Biomed Opt Express. 12 (10), 6157(2021).</li>
<li>Wu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+in+mouse+spinal+cord+reveals+that+microglia+prevent+degeneration+of+injured+axons%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging in mouse spinal cord reveals that microglia prevent degeneration of injured axons.</a> Nat Commun. 15 (1), 8837(2024).</li>
<li>Lee, J. E., Liang, K. J., Fariss, R. N., Wong, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+dynamic+imaging+of+retinal+microglia+using+time-lapse+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Ex vivo dynamic imaging of retinal microglia using time-lapse confocal microscopy.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 49 (9), 4169-4176 (2008).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Agulha de calibre 25</td><td>Alcon</td><td>8065420920</td><td></td></tr><tr><td>26s Bitola 10 & micro; Seringa L</td><td>Hamilton</td><td>701RNWG</td><td></td></tr><tr><td>7m8</td><td>Addgene</td><td>64839</td><td>http://n2t.net/addgene:64839</td></tr><tr><td>Fio Multiuso de Aço Inoxidável 304</td><td>Materiais Avançados de Stanford</td><td>SS3368</td><td>Fio de aço para fazer anéis</td></tr><tr><td>Cloreto de Cálcio Hexahidratado</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5080-500G</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de Dissecação</td><td>Amscope</td><td></td><td>Dissecar e montar retinas</td></tr><tr><td>Tesoura de Dissecação</td><td>FST</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-glicose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7528-250G</td><td></td></tr><tr><td>Pinças</td><td>Dumont</td><td>11252-21</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375-500G</td><td></td></tr><tr><td>Imaris 10.0.2</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td>Software de análise</td></tr><tr><td>Conversor de Arquivos Imaris</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Controle de Gel Ultra Supercola Loctite</td><td>Loctite</td><td>1363589</td><td>Cola para fazer anéis</td></tr><tr><td>Cloreto de Magnésio Hexahidratado</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272-100G</td><td></td></tr><tr><td>Papel filtro de membrana MCE (13 mm)</td><td>Millipore</td><td>HABG01300</td><td>0,45 & mu; m Tamanho dos poros</td></tr><tr><td>Câmara Microambiental</td><td>Tokai Hit</td><td>STXG-TIZBX-SET</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio invertido Nikon Eclipse Ti2-E</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elementos do NIS</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neomicina e Polimixina B Sulfas e Bacitracina Solução Oftalâmica de Zinco, USP</td><td>Bausch + Lomb</td><td>24208-780-55</td><td></td></tr><tr><td>Pincel Tamanho 00</td><td>Amazon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prisma 8.0</td><td>GraphPad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solução Oftalmônica de Proparacaína Cloridrato USP, 0,5%</td><td>Sandoz</td><td>61314-0016-01</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri revestida com PDL (35 mm)</td><td>Matek</td><td>P35GC-1.5-14-C</td><td>Cobertura nº 1.5</td></tr><tr><td>PSD95_pTagRFP</td><td>Addgene</td><td>52671</td><td>http://n2t.net/addgene:52671</td></tr><tr><td>Cloreto de potássio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333-500G</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Monohidrato de Fosfato de Sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9638-25G</td><td></td></tr></tbody></table>

imagem ao vivo e caracterização da dinâmica da microglia e interações com sinapses na retina murina doente

Live Imaging and Characterization of Microglia Dynamics and Interactions with Synapses in Diseased Murine Retina

Imagem ao vivo e caracterização da dinâmica da microglia e interações com sinapses na retina murina doente

Microglia are the resident macrophages of the central nervous system (CNS) that respond to tissue infection and injury. In addition to their role in ...

live-imaging-characterization-microglia-dynamics-interactions-with

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Fonte: Maruoka, H., et. al. Imagem simultânea da dinâmica microglial e atividade neuronal em camundongos acordados. J. Vis. Exp.Exp..  (2022) Este vídeo mostra um procedimento de microscopia de dois fótons para imagem da atividade neuronal e da dinâmica microglial em um camundongo acordado durante a estimulação visual, destacando transientes de cálcio e interações celulares.

Imagem simultânea da dinâmica microglial e atividade neuronal em um camundongo acordado

Fonte: Bosco, A., et al.  In vivo Dinâmica da ativação microglial da retina durante a neurodegeneração: imagem oftalmoscópica confocal e morfometria celular no glaucoma de camundongo. J. Vis. Exp. (2015) Este vídeo demonstra imagens in vivo da microglia da retina em um modelo de glaucoma em camundongos. Um camundongo transgênico com microglia retiniana que expressa proteína fluorescente é posicionado sob um oftalmoscópio. A iluminação infravermelha é usada para localizar a cabeça do nervo...

Imagem in vivo da microglia retiniana em um modelo de camundongo com glaucoma

Ativação da micróglia e microgliose são respostas fundamentais para a neurodegeneração crónica. Aqui, apresentamos métodos para in vivo, visualização de longo prazo de CX3CR1-GFP + células microgliais da retina por oftalmoscopia confocal, e para limiar e análises morfométricas para identificar e quantificar a sua activação. Monitoramos alterações microgliais durante estágios iniciais de glaucoma relacionada com a idade.

In Vivo Dinâmica da Retinal microglia Ativação Durante Neurodegeneration: confocal oftalmoscópico Imagem e morfometria celular no mouse Glaucoma

Este protocolo descreve técnicas como de alta resolução de imagem como tomografia de coerência óptica de domínio espectral e digitalização laser Oftalmoscopia pode ser utilizado em pequenos roedores, usando um sistema de plataforma de imagem oftálmica, para obter informações sobre espessura da retina e microglial celular distribuição, respectivamente.

Na Vivo Imagem de Cx3cr1gfp/gfp repórter ratos com a tomografia de coerência óptica espectral-domínio e digitalização Laser Oftalmoscopia

Este protocolo descreve uma técnica crônica de implantação de janelas cranianas que pode ser usada para imagens longitudinais de estruturas neuro-glio-vasculares, interações e função em condições saudáveis e doentes. Serve como uma alternativa complementar à abordagem de imagem transcranária que, embora muitas vezes preferida, possui algumas limitações críticas.

Mapeamento cerebral preciso para realizar imagens repetitivas in vivo da dinâmica neuro-imune em camundongos

A imagem in vivo é uma ferramenta poderosa para o estudo da biologia na saúde e na doença. Este protocolo descreve imagens transpupilares da retina de camundongos com um microscópio padrão de dois fótons. Também demonstra diferentes métodos de imagem in vivo para marcar fluorescentemente múltiplas coortes celulares da retina.

Imagem transpupilar de dois fótons in vivo da retina do rato

Aqui, descrevemos um protocolo combinando injeção de vírus adenoassociado com implante de janela craniana para obtenção simultânea de imagens da dinâmica microglial e atividade neuronal em camundongos acordados.

Imagem Simultânea da Dinâmica Microglial e Atividade Neuronal em Camundongos Acordados

Demonstramos um método que aproveita a microscopia confocal de varredura rápida para realizar imagens ao vivo de células da microglia no tectum óptico do peixe-zebra em desenvolvimento, permitindo a análise da dinâmica dessas células in vivo.

Imagem ao vivo e caracterização da dinâmica da microglia no embrião de peixe-zebra

Nós descrevemos um método para visualizar repetidamente microglia murino e monócitos...

A Técnica de Janela crânio-fino para Crônica de dois fótons In vivo Imaging da Microglia murino em Modelos de Neuroinflammation

O vídeo atual demonstra um método que tira proveito da combinação de eletroporação e microscopia confocal para realizar imagens ao vivo em células individuais progenitoras neurais no cérebro anterior zebrafish em desenvolvimento.

Lapso de tempo de imagens ao vivo de relação clonal células progenitoras neurais no desenvolvimento Zebrafish Encéfalo anterior

Aprenda a quantificar a dinâmica da microglia e suas interações com sinapses na retina murina usando microscopia confocal de disco giratório e análise de imagem 3D. Este método ex vivo permite estudar a poda sináptica mediada por microglia em modelos de neurodegeneração retiniana.

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