Остеокласты основной клеток костного резорбции в организме. Возможность изолировать остеокластов в больших количествах привело к значительному прогрессу в понимании остеокластов биологии. В этом протоколе, мы опишем метод для изоляции, культивирования и количественного активность остеокластов в пробирке.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Остеокластов Вывод из костного мозга мыши
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Остеокласты высоко специализированные клетки, которые являются производными от моноцитов / макрофагов костного мозга. Их уникальная способность поглощать как органические, так и неорганические матрицы кости означает, что они играют ключевую роль в регуляции скелетных ремоделирования. Вместе остеобласты и остеокласты отвечают за динамического процесса связи в который вовлечены и резорбции кости и образование костной ткани, действующее вместе для поддержания нормального скелета во время здоровья и болезни.
В качестве основного клетки костной резорбции в организме, изменение остеокластов дифференциации или функции может привести к глубоким эффектов в организме. Заболевания, связанные с измененной функции остеокластов может изменяться в тяжести от смертельной заболевания у новорожденных из-за отказа сформировать пространство мозга для кроветворения, чтобы чаще наблюдается патологий, таких как остеопороз, в котором чрезмерное остеокластов резорбции кости предрасполагает к разрушению образования. ЛОР "> Возможность изолировать остеокластов в больших количествах в лабораторных позволило добиться значительных успехов в понимании цикла костного ремоделирования и проложил путь для открытия новых терапевтических стратегий, борьбе с этими заболеваниями.
Здесь мы опишем протокол для изоляции и культивировать остеокластов из костного мозга мыши, который будет давать большое число остеокластов.
Введение
Костного ремоделирования является динамичным и включает муфту формирования костей с костной резорбции 1. Это жестко регулируется процесс отвечает за поддержание скелет в нормальном гомеостаза, и в ответ на повреждение и болезни.
Остеокласты уникальны, многоядерные клетки, которые способны к резорбции как органические, так и неорганические матрицы кости. Остеокласты выводятся из моноцитов / макрофагов костного мозга 2-5. Отклонения в функции или образованием остеокластов может привести в различных клинических патологий, в том числе общих заболеваний, как остеопороз.
Способность генерироват....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
ПРИМЕЧАНИЕ: Этические заявление: Все исследования с участием позвоночных животных проводили в протоколах соответствии утвержденным Административным панели Стэнфордского на лабораторных животных (APLAC).
1. Подготовка
- Разрешить 10 мл коммерчески доступного разделения градиент плотности клеток средах (который содержит polysucrose и натрия диатризоат, доводили до плотности 1,077 г / мл), чтобы прийти к комнатной температуре в 50 мл коническую пробирку.
- Подготовьте проточной цитометрии (FACS) буфер с 1x фосфатным буферным раствором (PBS) и 2% фетальной телячьей сыворотки (FCS). Берут 50 мл аликвоты и поддерживать эту аликвоту при КТ в течение....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Цель этого метода было легко изолировать большое число остеокластов в пробирке, как правило, в течение одной недели. Успешное выделение большого количества остеокластов была подтверждена с помощью тартрат устойчивостью кислую фосфатазу окрашивание (фиг.1А). Большие остеокластов визуализируются как больших фиолетовых клеток с несколькими ядрами (как правило, ≥ 3 ядер). Используя этот протокол, он является общим для изоляции остеокластов с целых 30 ядер в остеокластов (рис 1b). <.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Возможность легко изолировать и вырастить большое количество остеокластов в пробирке был ответственен за помощь для углубления понимания биологии кости и остеокластов-опосредованных заболеваний. Это было определение RANKL, что приведет к этому, когда он был недавно идентифицирован в качестве основного регулятора образование остеокластов, дифференцировки и выживания 16-18.
Это был наш опыт, что выращивание в пробирке остеокластов из костного мозга в значительной с.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Ни один из авторов не имеет раскрытие или конфликт интересов объявлять.
Благодарности
Мы признаем поддержку грантов НИЗ R01 DE021683, R01 DE019434, U01 HL099776, Фонда Дуб и Hagey лаборатории детской регенеративной медицины.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| MEM, без глютамина, без фенола красного | Gibco | 51200-038 | |
| M-CSF, рекомбинантная мышь | Gibco | PMC2044 | |
| рекомбинантный мышиный транс/RANK L/TNFSF11 (E. coli экспрессирован) | R& D Systems | 462-TEC-010 | |
| Простагландин E2 | Sigma-Aldrich | ||
| Histopaque-1077 | Sigma-Aldrich | 10771 | |
| Кислая фосфатаза, лекоциты (TRAP) набор | Sigma-Aldrich | 387A | |
| Остеопроба костные резорбционные пластины, 24 луночные пластины | Corning Life Sciences | 3987 |
Ссылки
- Sims, N. A., Martin, T. J. Coupling the activities of bone formation and resorption: a multitude of signals within the basic multicellular unit. BoneKEy reports. 3, 481 (2014).
- Kahn, A. J., Simmons, D. J. Investi....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
