Визуализация экспрессии белка на основе CUBIC: процедура визуализации экспрессии белка при биопсии кожи мыши полной толщины

- Кожа – это сложный орган, состоящий из различных клеточных популяций, расположенных в нескольких слоях. CUBIC, метод трехмерной визуализации, основанный на очищении тканей, помогает визуализировать паттерны экспрессии белков внутри этих клеток кожи с помощью биопсии всей кожи. Начните с того, что возьмите усыпленную мышь и удалите шерсть с ее спинной части шеи. Отрежьте кусок кожи и нарежьте его небольшими кусочками.

Погрузите кусочки в раствор для очистки CUBIC1 и инкубируйте. Клетки кожи непрозрачны, благодаря наличию хромофоров и липидов, вызывающих рассеяние света. Химические вещества в растворе CUBIC удаляют эти молекулы, тем самым уменьшая рассеяние света и делая ткань прозрачной.

Затем обработайте ткань желаемыми первичными антителами, которые специфически связываются со своими целевыми внутриклеточными белками, экспрессируемыми в клетках кожи. Кроме того, проводите лечение флуоресцентно меченными вторичными антителами, которые связываются с комплексами белок-первичные антитела. Покрасьте ткань ДНК-связывающим красителем, который окрашивает ядро.

Наконец, погрузите образец в раствор CUBIC2. Раствор еще больше уменьшает рассеяние света внутри ткани, делая ее более прозрачно