Обработка бактерий экссудатами корней растений для имитации in vitro взаимодействия растений и микробов

Возьмите исходную культуру Bacillus mycoides, ризобактерии, стимулирующей рост растений, и нанесите инокулюм на культуральную тарелку.

Инкубируйте пластину, чтобы способствовать размножению бактерий в колонии.

Закиньте одну колонию в жидкую среду и инкубируйте с встряхиванием, чтобы стимулировать рост бактерий.

Разведите культуру с помощью жидкой среды для достижения оптимальной плотности для анализа.

Добавляйте в культуру экссудаты корней картофеля, чтобы имитировать взаимодействие растений и микробов.

Инкубируйте культуру с перемешиванием, способствуя взаимодействию сигнальных молекул с бактериальными рецепторами.

Это взаимодействие индуцирует сигнальные пути, которые активируют регуляторные белки, которые связываются с ДНК и изменяют экспрессию генов.

Переложите культуру в пробирку и превратите бактериальные клетки в гранулу.

Выбросьте надосадочную жидкость и опустите пробирку в жидкий азот, чтобы мгновенно заморозить клетки.

Храните клетки для анализа вызванных экссудатом корней растений изменений в экспрессии бактериальных генов.

Чтобы вырастить бактерии, нанесите штамм B. mycoides с глицерина при температуре минус 80 градусов Цельсия на агаровую пластину LB и инкубируйте ее при температуре 30 градусов Цельсия в течение ночи. Затем инокулируйте жидкую среду LB одной колонией из планшета и выращивайте культуру в трясущемся инкубаторе при 200 об/мин в течение ночи при температуре 30 градусов Цельсия.

Для обработки и отбора проб бактерий разбавьте культуру B. mycoides в течение ночи 90 миллилитрами предварительно подогретой среды LB до начального наружного диаметра₆₀₀ ноль целых ноль целых пять десятых в колбе объемом 300 миллилитров. Впоследствии добавьте в культуру 10 миллилитров корневых выделений, а в качестве контроля используйте 10 миллилитров стерильной деионизированной воды для обработки. Затем инкубируйте их при температуре 30 градусов Цельсия в течение одного часа.

Через час переложите культуру в центрифужные пробирки объемом 50 миллилитров. Соберите клетки из культуры путем центрифугирования при температуре 9000 раз G в течение двух минут при четырех градусах Цельсия. После этого выбросьте надосадочную жидкость и сразу же заморозьте гранулу в жидком азоте.

Затем храните его при температуре минус 80 градусов Цельсия до использования.