Количественное определение на основе конъюгированных наночастиц антител с использованием микроскопии в темном поле: процедура захвата и количественного определения конкретных экзосом из жидкостей организма

Экзосомы представляют собой небольшие структуры, окруженные мембраной, которые секретируются клетками во внеклеточное пространство. Экзосомы в изобилии присутствуют в биожидкостях.

Чтобы идентифицировать и захватить конкретные экзосомы из жидкостей организма, начните с многолуночного иммунологического анализа. Это предметное стекло функционализировано белками, которые действуют как антигены и связываются со специфическими антителами.

Дополните предметное стекло нужным первичным раствором антител и инкубируйте. Эти антитела связываются с предварительно покрытыми антигенами на поверхности предметного стекла.

Аспирируйте оставшийся раствор, чтобы удалить все несвязанные антитела. Теперь добавьте блокирующий буфер, который блокирует свободные антигены, тем самым предотвращая неспецифическое связывание экзосом.

Затем извлеките блокирующий буфер, загрузите экзосомы, содержащие сывороточную суспензию, на предметное стекло и инкубируйте. Это позволяет осуществлять исключительное связывание специфичных для мишени экзосом с захваченными первичными антителами.

Затем загрузите на поверхность предметного стекла суспензию конъюгированных наночастицами золота вторичных антител. Эти антитела прикр