Трансформация генов на основе бинарного бактериального искусственного хромосомного вектора у растений арабидопсиса: метод получения трансгенных растений с вкраплением одной копии

Начните с растений арабидопсиса с незрелыми цветочными головками. Окуните цветочные головки в клеточную суспензию агробактерий, несущую Т-ДНК, клонированную бинарной бактериальной искусственной хромосомой или BIBAC, вектором, реплицирующимся как в системах E. coli, так и в системах Agrobacterium. Этот бинарный вектор Т-ДНК может доставлять крупные трансгены, такие как ген устойчивости к гербицидам и флуоресцентные селективные маркеры, вдоль промотора, специфичного для семян.

Пока цветочные головки все еще погружены в воду, осторожно взбалтывайте растения, чтобы усилить их контакт с агробактериями. Обладая присущей ей способностью заражать растения, агробактерия переносит трансген в клетку цветка. Когда трансген попадает в клетку, он перемещается в ядро и сливается с геномом растения.

Теперь оберните растение пищевой пленкой и инкубируйте в темноте, чтобы сохранить влажность для лучшего преобразования. Снимите пленку и выращивайте растения в физиологических условиях, пока они не дадут семена.

Далее соберите семена и понаблюдайте под флуоресцентным микроскопом для выбора трансформаторов. Теперь вырастите преобразованные семена в подходящих условиях до появления всходов. Опрыскайте ра