Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:51 мин. • July 8th, 2025
Возьмем мышь, иммунизированную металлопептитазой. Соберите данные из селезенки и получите клеточную суспензию.
Отфильтруйте суспензию через сетку и центрифугу, удаляя остатки тканей.
Выделенные клетки включают металлопептидазо-специфичные В-клетки, продуцирующие антитела против эпитопов металлопептидазы.
Добавьте бессмертные клетки миеломы, в которых отсутствует фермент HGPRT, препятствующий спасению нуклеотидных оснований для синтеза нуклеотидов. Они выживают за счет синтеза нуклеотидов de novo.
Центрифугу для получения гранул и выбросьте надосадочную жидкость.
Добавьте ПЭГ и инкубируйте, индуцируя слияние миеломы-В-клеток с образованием HGPRT-положительных бессмертных гибридом.
Добавьте среду HAT, содержащую гипоксантин, аминоптерин и тимидин. Перенос в лунки, содержащие питательный слой перитонеальных макрофагов, способствующий росту гибридомы.
Аминоптерин блокирует синтез нуклеотидов de novo, вызывая гибель неслившихся клеток миеломы. Неслившиеся В-клетки погибают из-за своей короткой продолжительности жизни.
HGPRT-положительные гибридомы сохраняют нуклеотидные предшественники гипоксантин и тимидин, пролиферируют и секретируют моноклональные антитела, специфичные для металлопеп
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео