Окрашивание протоколы по правам островков поджелудочной железы

Общая цель этой процедуры заключается в том, чтобы охарактеризовать глазки поджелудочной железы человека с помощью окрашивания гематином и эозином и иммуногистохимии. Это достигается путем создания последовательных срезов из образца поджелудочной железы, встроенного в парафиновый блок. Затем секции размещаются на слайдах в их исходной ориентации.

Часть стекол окрашивается гематином и эоином, в то время как остальные стекла окрашиваются иммуногистохимическим методом, последним шагом является сканирование окрашенных стекол и их организация по случаям. В конечном счете, эти изображения могут быть загружены в онлайн-базу данных патологоанатомов, где их могут просматривать другие исследователи в этой области. Основное преимущество данной методики перед существующими методами заключается в том, что предметные стекла окрашиваются последовательно с сохранением их первоначальной ориентации.

Демонстрировать процедуру будут Линда Снайдер, гистотехнолог, Эмили Монтгомери, биолог, и Тиффани Гиппо, лаборант в моей лаборатории. Для начала установите водяную баню и микротом, следуя стандартным процедурам для парафиновой микротомии. Далее метка положительно заряженных слайдов с номером дела, областью поджелудочной железы и номером слайда.

Как только все будет готово, поместите парафиновый блок в патрон микротома с кассетной этикеткой с левой стороны. После обычных процедур микротомии разрежьте блок до тех пор, пока ткань не будет равномерно обнажена. После того, как ткань будет равномерно встречена, изготовьте ленту из последовательных срезов толщиной около четырех микрон.

Требуется от трех до шести секций в зависимости от количества необходимых исходных пятен. Далее отделите участки ленты. Подхватите каждый раздел по порядку и разместите его на горке.

Запишите номер секции карандашом. Если раздел непригоден для использования, пропустите этот номер и продолжайте нумерацию разделов в точном порядке. Следите за тем, чтобы на слайде была та же ориентация, что и на кассете, при этом метка слайда была ориентирована влево.

Затем поместите слайды в решетку для слайдов и дайте им высохнуть в течение ночи. При комнатной температуре повторно запечатайте поверхность парафинового блока тонким слоем парафина, чтобы сохранить ткань, и архивируйте ее при комнатной температуре или температуре минус 20 градусов Цельсия. Повторите эту процедуру для следующего образца.

Важно поддерживать нумерацию последовательных секций на каждом уровне, как показано выше для окрашивания h и e. Поместите первый предметный предмет из каждого блока в решетку для слайдов, а затем поместите решетку в первый лоток автоматической морилки. Выберите стандартную программу HE и приступайте к процессу окрашивания.

Когда окрашивание будет завершено, снимите слайдеры с автоморилки и поместите их в капот, чтобы крышка не соскользнула. Поместите защитный лист на каждую горку, используя стандартные методы. Наконец, пометьте слайды напечатанной этикеткой и дайте им полностью высохнуть в капюшоне.

Начните с настройки автоокрашивателя и подготовки всех необходимых реагентов. Выбирайте программу Daco для двойных пятен. Введите количество слайдов и лечение, которое получит каждый из них.

Загрузите все реагенты в автоморилку в соответствии с рекомендациями производителя. Далее подготовьте TBST и цитрат, буферы, антитела и другие реагенты, необходимые для процедуры. Депарируйте предметные стекла, поместив их в ксилол на пять минут.

Не допускайте высыхания предметных стекол, так как это приведет к чрезмерному окрашиванию фона и пор во время снятия предметных стекол. Налейте цитратный буфер в пароварку для предварительного нагрева перед использованием. Затем отправьте слайды depa на серию промывок этанолом.

Промойте предметные стекла в последний раз в деионизированной воде. Добавьте предметные стекла в разогретый цитратный буфер и дайте им пропариться в течение 30 минут. По истечении этого срока сразу же переведите горки на водяную баню комнатной температуры до полного остывания.

После охлаждения перенесите слайды на стойки Dayco auto Stainer, соблюдая при этом правильную последовательность. Наконец, запустите программу двойного окрашивания, которая была загружена ранее, после завершения программы двойного окрашивания. Снимите предметные стекла с автоматической морилки и дайте им высохнуть не менее одного часа перед обезвоживанием.

Чтобы продолжить обезвоживание, переведите их на 80% этанол на одну минуту. Продолжайте обезвоживание предметных стекол, замачивая их в 95% этаноле, а затем завершите 100%. Наконец, окуните и удерживайте предметные стекла в ксилоле в течение одной минуты.

Немедленно смонтируйте предметные стекла с покровными стеклами с помощью цитоуплотнителя для завершения процедуры. Распечатайте этикетки, содержащие информацию о случае, включая номер органа и блока, тип пятна и дату. Поместите этикетку на каждый предметный стек, чтобы отсканировать слайды с пятнами.

Поместите их на лоток сканера и следуйте стандартным процедурам. Заархивируйте стекла при комнатной температуре, а оставшиеся неиспачканные стекла — при температуре минус 20 градусов Цельсия для использования в будущем. Наконец, систематизируйте окрашенные изображения по донорам и типам тканей.

Вот пример окрашивания KI 67 плюс инсулином как при низком, так и при большом увеличении. Изображения окрашенных участков поджелудочной железы отправляются в онлайн-базу данных патологий, создавая виртуальный биобанк. Используя эту базу данных, исследователи могут быстро получить доступ к информации, необходимой для исследований и лечения диабета первого типа.

После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее понимание того, как подготовить и окрашивать предметные стекла высокого качества из поджелудочной железы человека.