Дистанционное Магнитный Приведение в микрометрической зондов для

Общая цель следующего эксперимента заключается в выполнении в С двух измерений местных физических свойств бактериальной биоплёнки в микрометровом масштабе. Для этого в растущую биоплёнку вводятся магнитные частицы, которые служат зондами, которые могут быть дистанционно управляемы без нарушения структурных свойств биоплёнки. Затем с помощью специальных магнитных пинцетов на каждую частицу оказывается определённая сила.

После встраивания в пленку биоплёнки, смещение частиц, вызванное магнитным тягой, отслеживается с помощью видеомикроскопии для получения местных вязкоупругих параметров и обеспечения 3D-пространственного распределения механических свойств биоплёнки. Получаются результаты, которые показывают механическую неоднородность биоплёнки E. coli и дают указания о том, какие компоненты биоплёнки поддерживают её физические свойства. Таким образом, основное преимущество этой техники перед существующими методами, такими как микроскопия, цитология или целое биоразведение, заключается в том, что она отображает пространственное распределение механических свойств in situ без нарушения исходной структуры материала.

Для подготовки магнитных частиц для этого протокола, встряхивайте ампулу со штаммом частиц размером 2,8 микрометра, чтобы снова их суспендировать. Затем перенесите 10 микролитров в микроцентрифужную пробирку. Затем для промывания частиц добавьте 190 микролитров минимальной среды и встряхивайте пробирку, поместите ее на магнитный образец, подождите образования пыли и аспирируйте супернатный раствор.

Повторите этот шаг промывания еще два раза и снова суспендируйте шарики в 190 микролитрах минимальной среды. Затем добавьте 950 микролитров М 63 В один с 0,4% глюкозы к 50 микролитрам промытой раствора шаров, чтобы скорректировать концентрацию частиц до примерно 5 миллионов шаров на миллилитр. Для приготовления канала используйте алмазный стеклорубильник, чтобы вырезать две квадратные босиликатные стеклянные капилляры длиной 10 сантиметров, чтобы получить две восьмисантиметровые детали.

С помощью стеклорубильника разрежьте стеклянную пластину пополам. Затем с помощью быстродействующего цианоакрилатового клея или суперклея прикрепите две части капилляра к двум частям стеклянной пластины, как показано на этом диаграмме. С отступом в два сантиметра с одним сантиметром выступа на каждом конце прокалите всю установку и необходимые шланги.

Для дальнейшего соединения каналов сборите следующие стерильные материалы под ламинарным потоком. Смонтированная трубка канала и соединители, два детских фильтра пузырьков или ловушки. Две зажима, 30-миллиметровые шприцы, наполненные М 63 В, 1,4% глюкозой и бутылкой для отходов.

Соедините две капилляры одинаковым образом. Используя один из труб. Подключите бутылку для отходов к одному концу капилляра.

Затем, используя соединители типа "защелка", соедините другой конец капилляра с домашней ловушкой для пузырьков или ловушкой один и ловушкой один к ловушке два. Затем подключите 30-миллиметровый шприц М 63 В один к ловушке два. Затем заполните установку стерильным М 63 В один с 0,4% глюкозой.

Установите шприц на шприцевом насосе и включите шприцевый насос с скоростью примерно пять миллилитров в час выше экспериментальных показателей. Внимательно отслеживайте и устраняйте все пузырьки в схеме при необходимости. Отключайте и снова подключайте схему при выполнении этой процедуры.

Будьте осторожны, чтобы удалить все пузырьки до и при введении смеси клеточных частиц в трубку, это поможет разместить мусор над капиллярами, и это поможет для непрерывного роста биоплёнки. Разрешите среде протекать через систему в течение 10-15 минут. Между тем, в микроцентрифужной пробирке, смешайте один миллилитр бактериальной суспензии при оптической плотности 0,5 с одним миллилитром промытой раствора шаров, приготовленного ранее.

Выключите поток, снова подключите трубку, а затем закройте зажимы. Затем наполните один миллилитровый шприц смесью бактерий и шаров и введите его в капилляр. После домашней ловушки для пузырьков перенесите аппарат на микроскоп.

Установите капилляры на столике микроскопа и поместите контейнер для отходов на немного более высоком уровне. Поставьте шприцевый насос на рабочую поверхность рядом с микроскопом. Разрешите аппарату стоять 15-20 минут, чтобы бактерии могли оседаться и прикрепляться к поверхности капилляра.

Когда бактерии прикрепляются к капилляру, откройте зажимы, отрегулируйте скорость потока на шприцевом насосе и начните поток. В течение 24-48 часов на поверхности капилляра разовьется биоплёнка, сосредоточьтесь на нижней плоскости капил