Лаборатория Оценка Net трофических Transfer КПД ПХБ в озерной форели ( Salvelinus namaycush) От его добычи

Общая цель данного эксперимента состоит в том, чтобы оценить чистую эффективность трофического переноса соединений из группы ПХБ в озерную форель от ее добычи, а затем определить, влияет ли степень хлорирования или степень растворимости липидов конгенера ПХБ на его чистую трофическую эффективность переноса. Это достигается путем проведения лабораторного эксперимента, в котором озерную форель кормят натуральной пищей, такой как бло, в течение как минимум четырех месяцев. В качестве второго этапа экстракция и очистка используются для извлечения ПХБ из озерной форели и тканей бло, а также для подготовки экстрактов к процедуре количественного определения.

Далее используется газовая хроматографическая масс-спектрометрия с использованием отрицательной химической ионизации для определения концентрации конгенера ПХБ в тканях рыб. Результаты показывают, что степень хлорирования конгенеров ПХБ существенно не влияет на чистую трофическую эффективность переноса конгенеров ПХБ в озерную форель от ее добычи. Результаты также показывают, что активность озерной форели, по-видимому, не оказывает существенного влияния на эффективность сетевого трофического переноса.

Основное преимущество этого метода по сравнению с существующими методами, такими как впрыскивание загрязняющего вещества непосредственно в рыбу SIV или в пищу рыбы SIV, заключается в том, что рыба SS накапливает загрязнитель таким образом, который наилучшим образом имитирует процесс накопления загрязняющих веществ в свирепых рыбах в их естественной среде. Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, поскольку этапы концентрации и экстракции требуют большой осторожности для правильного выполнения. Эти шаги лучше всего усваиваются с помощью визуального наблюдения.

Демонстрировать эту процедуру будет Джим О'Киф, химик из моей лаборатории. Сначала разморозьте соответствующее количество рыбы-добычи, ранее хранившейся в морозильной камере при температуре минус 30 градусов по Цельсию. Размороженную рыбу-добычу нарежьте кусочками весом примерно от одного до пяти граммов с помощью поварского ножа.

После этого взвесьте количество рыбы-добычи, которая будет помещена в каждый из аквариумов, и бросьте кусочки в каждый аквариум. Дав хищной рыбе покормиться в течение примерно одного часа, уберите съеденный корм и дайте ему высохнуть на воздухе в течение примерно 20 минут. После того, как уне будет взвешен, запишите количество пищи, помещенной в каждый резервуар, и количество съеденного корма для каждого из резервуаров.

После умерщвления и замораживания хищной рыбы выберите набор композитов для хищников, рыб и/или рыб-жертв для размораживания и дайте композитам частично оттаять, используя гомогенизацию соответствующего размера. Каждый из композитов. Для каждого композита поместите от 50 до 100 граммов образца гомогената в очищенную, ацетоновую, промытую и промаркированную банку.

После укупорки банки храните ее при температуре минус 30 градусов Цельсия до момента обработки для экстракции. Взвесьте в стакане объемом 200 миллилитров 200 граммов размороженной гомогенизированной рыбьей ткани, затем примерно 40 граммов сульфата натрия и хорошо перемешайте лопаткой. Добавьте суррогатный спайковый раствор, содержащий CONGENERS 30, 61, 161 и 166 в концентрации, обеспечивающей конечную концентрацию 20 нанограммов на миллилитр.

В выписке. Дайте образцу высохнуть при комнатной температуре во время перемешивания Каждые 20 минут после того, как образец достигнет консистенции сухого песка. Установите аппарат для экстракции соли с колбой объемом 500 миллилитров, содержащей тефлоновую стружку, носок, сл и конденсатор.

Затем добавьте сушеную рыбную смесь в стеклянный наперсток с крупным фриттированным дисковым дном. Добавьте 150 миллилитров предварительно смешанного раствора 50% гексана и 50% хлорметана в стакан, используемый для образца, и перемешивайте, соскребая стенки стакана. С помощью шпателя перенесите растворитель в верхнюю часть солита, позволяя ему циркулировать через солит и попасть в колбу.

Повторив предыдущий шаг, поместите зажженный с помощью прикрепленной колбы носок на нагревательный элемент и прикрепите конденсатор. Далее включите нагревательный элемент, доведя растворитель до слабого кипения. Затем экстрагируйте растворитель в течение минимум 16 часов, следя за тем, чтобы холодная вода подавалась в конденсаторы.

После того как растворитель остынет, проверьте, содержит ли вода какая-либо из колб с образцами. Для колб с водой добавьте сульфат натрия и взбалтывайте, пока вода не впитается. После этого сконцентрируйте образец с помощью концентратора азотных проб.

После того как проба будет иметь объем менее двух миллилитров, переложите пробу в пятимиллилитровую мерную колбу. Затем доведите окончательный объем до пяти миллилитров, используя пять-семь небольших смывов гексана, чтобы перенести остаточный образец из предыдущей стеклянной посуды в мерную колбу. На этом этапе переложите образец во флакон объемом 10 миллилитров и пометьте его информацией о образце.

Приготовьте подкисленный силикагель, добавив 44 грамма концентрированной серной кислоты к 100 граммам активированного силикагеля. Затем добавьте 10 граммов подкисленного силикагеля в небольшую хроматографическую колонку, содержащую на дне небольшую пробку из стекловаты. Предварительно очистив колонку с 10 миллилитрами гексана, добавьте в нее один миллилитр экстракта пробы, вылейте колонку с 20 миллилитрами гексана и соберите пробу в коническую стеклянную пробирку объемом 20 миллилитров.

Далее поместите стеклянную трубку на азотный испаритель или аппарат NVAP под струю азота и погрузите ее в горячую воду. После того, как образец концентрируется до уровня менее одного миллилитра, переложите его в мерную колбу объемом один миллилитр. Затем доведите окончательный объем до одного миллилитра, используя две-три небольшие промывки гексана, чтобы перенести остаточный образец из пробирки в мерную колбу.

После этого переложите образец в автоматический пробоотборник объемом 1,8 мл с маркировкой с информацией о пробе. Добавьте во флакон четыре микролитра соответствующего внутреннего стандарта, который в данном случае представляет собой дека хлорфенхеля. Для калибровки прибора используются соответствующие стандарты.

Затем настройте хромато-масс-спектрометрическую систему в режиме отрицательной химической ионизации с водородом в качестве газа-носителя со скоростью 1 миллилитр в минуту и метаном в качестве газа-реагента. Используйте капиллярную колонку из плавленого кремнезема, покрытую DB XLB при температуре 0,25. Микрометровая толщина пленки для разделения.

Введите от одного до двух микролитров образца в режиме раздельного впрыска. На этом этапе проанализируйте все стандарты и образцы методом внутреннего стандарта с использованием углерода-13 с маркировкой DECA chloro b fenphele. Выполните проверку первоначальной калибровки с помощью второго исходного стандарта и стрелки Chlor 1242 и 1260, а затем сравните прогнозируемые значения для конгенеров Arrow Chlor с наблюдаемыми количествами, полученными в ходе этой процедуры проверки.

После успешного завершения первоначальной процедуры калибровки завершите анализ всех образцов. Выполняйте калибровочную проверку каждые 10 образцов с использованием любой из калибровочных смесей из первоначальной калибровки. Озерная форель Тре показала значительный рост в качестве первоначальной озерной форели.

Средний вес варьировался от 694 до 907 граммов, в то время как окончательный средний вес озерной форели варьировался от 853 до 1,566 грамма. Средние концентрации конгенеров ПХБ в озерной форели в ходе эксперимента увеличились для всех конгенеров ПХБ. Средняя эффективность сетевого трофического переноса для активной озерной форели существенно не отличалась от неактивной озерной форели.

Активная озерная форель удерживала конгенеры ПХБ из потребляемой пищи почти с той же эффективностью, что и неактивная озерная форель в 66 из 75 конгенеров ПХБ. Стандартная ошибка в отношении средней оценки чистой эффективности трофического переноса была мала для шести из девяти других конгенеров ПХБ. Стандартные погрешности в отношении средней оценки чистой эффективности трофического переноса были довольно низкими, так как при увеличении степени хлорирования оценки чистой эффективности трофического переноса показали небольшое снижение.

Однако чистая эффективность трофического переноса существенно не изменялась с увеличением степени хлорирования конгенеров ПХБ AS log KOW, а чистая эффективность трофического переноса снижалась экспоненциально. Этот темп снижения значительно отличался от нуля, но был равен 7% на единицу бревенчатого KOW. После просмотра этого видео у вас должно быть хорошее понимание того, как оценить чистую трофическую эффективность переноса сородичей CB к рыбам из их добычи с помощью лабораторного эксперимента, в котором рыбу кормят натуральной пищей.

Не забывайте, что работа с органическими растворителями, такими как гексан и дихлорметан, может быть опасной, и при выполнении этой процедуры всегда следует принимать меры предосторожности, такие как надлежащая вентиляция.