Белок Очистка Техника, что позволяет выявлять и SUMOylation Убиквитинирование бутонизации дрожжей кинетохор белков Ndc10 и Ndc80

Общая цель этой процедуры заключается в обнаружении симуляции и убиквитинации кинетических белков ядра почковающихся дрожжей, NDC 10 и NDC 80. Это достигается путем сбора дрожжевых клеток, которые экспрессируют флаг шипения, меченный SMT 3, и MT, меченный NDC 10 или NDC 80, и получение белковых экстрактов из этих клеток. Вторым шагом является очистка трех конъюгатов с маркировкой SMT для обнаружения суммирования или для иммуноосаждения белков кинетического ядра mik tagg для обнаружения убиквитинации.

Впоследствии суммирование или убиквитинация обнаруживается с помощью вестерн-блоттинга. В конечном счете, наличие лестничного паттерна для NDC 10 и NDC 80 подтверждает, что эти белки моделируются и убиквитинируются. Описанный метод очистки белков позволяет обнаруживать как моделирование, так и убиквитинацию белков коннико ND C 10 и NDC 80 в почковающемся дрожжевом крестце.