Количественный анализ микро CT Aortopathy в мышиной модели β-aminopropionitrile индуцированной аневризмы аорты и рассечение

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области сосудистой биологии, такие как определение того, как размер сосуда влияет на различные животные модели сосудистых заболеваний. Основное преимущество этого метода заключается в том, что микрокомпьютерная томография позволяет получить детальные изображения как крупных, так и мелких сосудов, как in vivo, так и ex vivo, которые могут быть точно количественно определены. За 24 часа до проведения КТ-анализа выполните хирургические процедуры для подготовки образца к посмертному внутрисердечному анализу.

Для анестезии используйте 3% изофлуран и обязательно используйте поглотитель древесного угля. Затем поддерживайте анестезию от двух до 2,5 процентов изофлурана из маски для лица, также прикрепленной к поглотителю с одним литром кислорода в минуту. Перед началом операции выполните защемление пальцев ног, чтобы проверить отсутствие педального рефлекса.

Затем настройте оперативное поле с инструментами и так далее. Далее расположите животное в спинном положении лежа и закрепите конечности. Теперь с помощью ножниц сделайте разрез по средней линии через кожу и мягкие ткани над грудиной между лобковым симфизом до грудинной выемки.

Далее с помощью ножниц создайте отверстие в диафрагме в месте мечевидного отростка для входа в грудную полость. Затем продолжайте с помощью ножниц рассекать диафрагму вентральной стенки грудной клетки с обеих сторон. Разрежьте реберные хрящи, чтобы отделить ребра от грудины на правой границе грудины.

Теперь наложите тонкий кровоостанавливающий зажим на кончик грудины рядом с мечевидным отростком и переместите кровоостанавливатель краниально так, чтобы он располагался над головой мыши. Затем резко рассеките любые прикрепления между сердцем и грудной стенкой. Ограничьте количество сосудов, поврежденных во время подготовки животного, так как это приведет к вытеканию контрастного вещества из отделенных сосудов, что изменит объем, необходимый для полного заполнения, и приведет к появлению артефактов при окончательном изображении.

Теперь подсоедините иглу для внутривенного катетера 27 калибра к шприцу, предварительно загруженному 10 миллилитрами гепаринизированного PBS, и заполните все трубки буфером, удалив все пузырьки воздуха. Удаление всех пузырей с линий имеет важное значение. Затем немедленно надрежьте правый желудочек или нижнюю полую вену, чтобы слить раствор гепарина и кровь.

Чтобы продолжить, с помощью канюли проколоть левый желудочек, стабилизированный зажимом. Проводите обильность с постоянной скоростью два миллилитра в минуту с помощью шприцевого насоса. Должно быть заметное побледнение органов.

Через несколько минут кровообращение в полой вене должно освободиться от крови. Затем остановите насос и отсоедините трубку катетера от шприца, но не перемещайте иглу катетера. Теперь разделите раствор контрастного вещества на пять миллилитров аликвот, добавьте отвердитель и хорошо перемешайте.

Затем загрузите пять миллилитров смеси в 10-миллилитровый шприц и напойте животное контрастным веществом со скоростью 2 миллилитра в минуту. Продолжайте настаивать до тех пор, пока не увидишь, как литейный агент выходит из животного. Контрастное вещество затвердевает за 20 минут.

После излечения извлеките интересующие органы и закрепите их в 10% нейтральном буферизованном формалине. Далее образцы не используются для микрокомпьютерной томографии, фиксируют тушу целиком. В противном случае поместите тушу на металлический поднос и поместите ее в холодильник при температуре четыре градуса Цельсия для затвердевания на ночь.

На следующий день получите рентгеновские снимки компьютерной томографии каждой мыши с помощью микрокомпьютерного томографа. Установите параметры сканера следующим образом: Пиковое напряжение рентгеновской трубки составляет 55 киловольт, ток — 150 микроампер, коэффициент увеличения системы — 2,19, а коэффициент объединения пикселей ПЗС-камеры — два. Этот коэффициент биннинга дает эффективный размер пикселя 29 микрон.

Затем проанализируйте изображения, чтобы выявить аневризмы с помощью стандартизированного подхода. Измерьте малый диаметр оси в самой широкой точке из трех мест; дуги аорты, нисходящей грудной аорты и брюшной аорты. В идеале каждое изображение должны анализировать два наблюдателя, один из которых ослеплен

Используя измерения, определите аневризмы как локализованные или диффузные расширения сегментов аорты до диаметров, превышающих 50% от референсного диаметра. 20 взрослых мышей-самцов смешанного происхождения в возрасте от 20 до 30 недель были проанализированы с лечением BAPN или без него. Каждый из них был пропитан рентгеноконтрастным силиконовым каучуком на основе свинца.

Средний диаметр восходящей аорты у мышей, получавших BAPN, был значительно больше, чем у необработанных контрольных мышей соответствующего возраста. Данные мышей с выявленными аневризмами выделены красным цветом. Напротив, ингибирование лизилоксидазы с помощью БАТН не оказывало существенного влияния на среднюю нисходящую грудную клетку, а также это лечение не влияло на диаметр брюшной аорты.

Аневризма была определена как в 1,5 раза превышающая средний диаметр нелеченной группы. Лечение привело к значительному увеличению аневризм по этому определению. Аневризмы у мышей, получавших BAPN, были идентифицированы исключительно в аорте, причем большинство из них было выявлено в грудной аорте.

После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как профузировать сосудистую сеть для рентгенологической визуализации. После того, как вы освоите этот процесс, анализ и анализ изображений могут быть выполнены за два часа, если он выполнен правильно. При попытке выполнить эту процедуру важно помнить, что протоколы компьютерной томографии могут быть скорректированы с помощью радиологического персонала для оптимизации получения изображений для конкретных целей отдельных экспериментов.