Back to chapter

7.12:

ДНК-Транспозоны

JoVE Core
Molecular Biology
This content is Free Access.
JoVE Core Molecular Biology
DNA-only Transposons

Languages

Share

Транспосзоны могут быть найдены у обоих прокариотов и эукариотов, составляя до 5%генома амебы, до 44%генома человека, и до 90%генома кукурузы. Есть много разных типов транспозонов, но они могут быть широко охарактеризованы двумя различными классами 1 и 2 Транспонзоны класса 1, также известные как ретротранспозоны, требовать транскрипцию промежуточной РНК в ДНК перед её установкой в цель. Однако, транспозоны класса 2, или ДНК-транспозоны, п оставаться в форме ДНК в течение всей транспозиции.Они также содержат кодирующий ген многофункциональный фермент называется транспозозой. Ген транспозазы фланкирован концевыми инвертированными повторами, которые являются одноцепочечными, длиной от 9 до 40 пар оснований, и обратно дополняющими друг друга. Во время кат анд паст”транспозиции, ген выражает два мономера фермента транспозазы, которые связываются с концевыми инвертированными повторами.Когда мономеры димеризируются, они собирают по 2 интвертированных повтора вместе. При этом создается стабильный белковый ДНК комплекс, называемый синаптическим комплексом или транспозосомой. Далее, транспозосома расщепляет ДНК цепи на каждом конце транспозона, оставляя позади последовательность, называемую прямые повторы.Это высвобождает транспозон от ДНК-донора, и теперь он свободно транспортируется в произвольную цель. Для вставки, транспозаза выполняет два разреза в шахматном порядке в целевой ДНК путем расщепления фосфодиестных связей. Надрезанные цепи целевой ДНК разведятся в стороны, чтобы создать зазор с одноцепочечным провисанием.Теперь, третий первичных конец OH ДНК-транспозона реагирует с 5-м прайм терминалом целевой ДНК, оставляя зазор между 5 концом праймера транспозона и концом 3-его праймера цели. ДНК-полимераза использует конец 3-го праймера зазора в качестве праймера и восполняет этот пробел в процессе, называемом дублированием целевого сайта. Вновь синтезированные ДНК и транспозон связываются ДНК-лигазой.Такая вставка может иметь значительные последствия. В некоторых случаях она может переключать ген цели из состояния включен”на выключен”путем предоставления новых промотеров или изоляторов, закодированных транспозоном. Кроме того, это также может изменить функцию гена, нарушая нормальный сплайсинг экзона во время генерации мРНК.Например, это может произойти, если транспозон, содержащий новый сайт сращивания, производит скачок в существующий ген и переписывает транскрипционные сигналы, что приводит к созданию аберрантной мРНК.

7.12:

ДНК-Транспозоны

Транспозоны, содержащие только ДНК, называются автономными транспозонами, поскольку они кодируют фермент транспозазу, которая необходима для механизма транспозиции. Вставки транспозонов могут изменять функции генов разными способами. Они могут мутировать ген, изменять экспрессию гена, вводя новую последовательность промотора или инсулятора, вносить новые сайты сплайсинга и изменять образуемые мРНК-транскрипты или ремоделировать структуру хроматина.

Донорский сайт, из которого вырезается транспозон, либо разрушается, либо репарируется. Неточные методы репарации не восстанавливают исходную последовательность донора, часто непреднамеренно изменяя его фенотип.

Неидеальное удаление мобильных элементов приводит к тому, что части геномных последовательностей переносятся транспозоном. Это приводит к явлению, называемому перетасовкой экзонов, когда два неродственных экзона располагаются рядом друг с другом, что приводит к образованию новых генных структур. Таким образом, транспозиция может не только перемещать гены, но и реорганизовывать немобильные генетические элементы.

После вставки в целевой сайт транспозоны могут изменять активность генетических элементов хозяина. Это делает ДНК транспозоны мощным инструментом редактирования генома. В трансгенезе синтетические ДНК транспозоны используются в качестве носителей генов для изучения эффектов чужеродной ДНК в организме хозяина. Широко используемый синтетический ДНК транспозон – это транспозон Спящая красавица, который вставляется в геномы различных видов, от простейших до мелких позвоночных, таких как рыбы, лягушки и мыши, для введения новых признаков или открытия новых генов.

Suggested Reading

  1. Pray, Leslie A. "Transposons: The jumping genes." Nature education 1, no. 1 (2008): 204.
  2. Kazazian, Haig H. "Mobile elements: drivers of genome evolution." science 303, no. 5664 (2004): 1626-1632.
  3. Zeng, Lu, Stephen M. Pederson, R. Daniel Kortschak, and David L. Adelson. "Transposable elements and gene expression during the evolution of amniotes." Mobile DNA 9, no. 1 (2018): 17.
  4. Muñoz-López, Martín, and José L. García-Pérez. "DNA transposons: nature and applications in genomics." Current genomics 11, no. 2 (2010): 115-128.