Back to chapter

8.4:

بوليميراز الحمض النووى الريبوزى البكتيرى و النسخ

JoVE Core
Molecular Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Core Molecular Biology
Bacterial RNA Polymerase

Languages

Share

الجين فى نموذج دى إن إيه يجب أن يكون أولاًمتحولا إلى آر إن إيه رسول في عملية تسمى،النسخ. هذا آر إن أيه الرسول بعد ذلك يترجم بواسطة الريبوسوم لإنتاج البروتينات. 00:00:13.830 00:00:17.070 البروتين الذي ينسخ دى إن إيه إلى آر إن إيه يسمى آر إن إيه بوليميراز.إنزيم آر إن إيه بوليميراز البكتيري يتكون من خمسة وحدات عديدة البيبتيدات الفرعية،وحدتان فرعيتان متماثلتان من ألفا وحدات فرعية بيتا وبيتا أساسية 00:00:30.930 00:00:32.880 ووحدة أوميغا الفرعية. عامل نسخ،يسمى سيجما،يرتبط بلُب الإنزيم لإنتاج الإنزيم الكامل آر إن إيه بوليميراز. لبدء عملية النسخ،الإنزيم الكامل آر إن إيه بوليميراز يرتبط بشكل غير محدد بالدى إن إيه بإنجذاب منخفض.ثم ينزلق على طول دى إن إيه ليحدد موقع تسلسل المُنظم. عندما ينزلق إلى المُنظم على وجه التحديد مناطق 00:00:57.300 00:01:00.720 10-و 35-في الاتجاه الصاعد نحو النهاية 5’لموقع البدء, الوحدة الفرعية سيجما فى آر إن إيه بوليميراز ترتبط بالمُنظم بإحكام ويفك دى إن إيه ليكوّن المركب المنظم المفتوح الإنزيم الكامل آر إن إيه بوليميراز الآن موضوع 00:01:15.930 00:01:18.420 فى موقع بدء عملية النسخ, 00:01:18.420 00:01:21.420 يخلق نسخة آر إن إيه بإضافة النيوكليوتيدات التكميلية إلى قالب دى إن إيه. بمجرد ان تم تخليق سلسلة آر إن إيه بطول 10 نيكلوتيدات يتم إطلاق عامل سيجما لب إنزيم آر إن إيه بوليميراز يستمر في إضافة النيوكليوتيدات 00:01:36.600 00:01:37.830 إلى آر إن إيه المتنامية.النسخة كـلما تحرك البوليميراز للأمام،فإن دى إن إيه يُفك باستمرار أمام الإنزيم و يعيد لفه خلفه. تستمر العملية حتى يتم نسخ الجين و لُب انزيم البوليميراز يواجه إشارة الإنهاء. إشارة الإنهاء الأكثر شيوعاًعبارة عن تكرار متماثل مقلوب لتسلسل غنى ب جى سي متبوع بنهاية عديدة الأدنين عندما ينسخ هذا التسلسل إلى آر إن أيه،تسلسل القواعد ذاتى التكميل يقترن بالقواعد لتكوّن بُنية حلقة دبوس 00:02:12.000 00:02:15.000 الدبوس يزعزع ترابط آر إن أيه الرسول.و قالب الدى إن إيه ويتسبب في أن البوليميراز يتوقف وينفصل ولذلك،فإن فقاعة النسخ تنهار و الدى إن إيه يلتف إلى لولب مزدوج, و يتم إطلاق النسخة الأولى لآر إن ايه الرسول المخلق حديثا.

8.4:

بوليميراز الحمض النووى الريبوزى البكتيرى و النسخ

خلال مسار التطور ، عندما تنتقل الكائنات الحية من جينوم الحمض النووي الريبي إلى جينوم الحمض النووي ، يلزم استيفاء متطلبين فوريين. أولاً ، تركيب الحمض النووي المعتمد على قالب الحمض النووي الريبي ، والذي يشكل الشكل الرئيسي للتكاثر في الفيروسات القهقرية وهو لا يزال يُلاحظ في العناصر القابلة للنقل في البشر. ثانيًا ، تخليق الحمض النووي الريبي المعتمد على قالب الحمض النووي ، والذي يتم تنفيذه بواسطة RNA polymerase (RNAP) في كل من البكتيريا وحقيقيات النوى.

يمكن تقسيم النسخ إلى ثلاث مراحل رئيسية ، تتضمن كل منها تسلسلات DNA مميزة لتوجيه البوليميراز. هؤلاء هم:

  1. البدء ، والذي يتضمن تسلسلين محددين 10 و 35 زوجًا أساسيًا من الجين ، يسمى المحفزات.
  2. الاستطالة ، حيث يستمر البوليميراز على طول قالب الحمض النووي ، ويصنع mRNA في 5 & # 8242 ؛ إلى 3 & # 8242 ؛ الاتجاه.
  3. الإنهاء ، حيث يصادف البوليميراز منطقة غنية بالنيوكليوتيدات C & # 8211 ؛ G ويوقف تخليق الرنا المرسال.

ينفذ البكتيري RNAP جميع الخطوات الثلاث جنبًا إلى جنب مع البروتينات الملحقة الأخرى. في حين أن بعض بوليميرات الحمض النووي الريبي مثل بوليمرات T7 و N4 الفيروسية تتكون من سلسلة بولي ببتيد واحدة ، فإن جميع الكائنات الحية ذات الجينومات الخلوية لها بوليميرات متعددة الوحدات تختلف في الحجم والتعقيد ، اعتمادًا على بنية الجينوم. يساعد الهيكل متعدد الوحدات للـ RNAP البكتيري الإنزيم على الحفاظ على الوظيفة التحفيزية ، وتسهيل التجميع ، والتفاعل مع الحمض النووي والحمض النووي الريبي ، والتنظيم الذاتي لنشاطه. في حين أنه إنزيم فعال تحفيزيًا ، إلا أنه لا يتعرف على تسلسل الحمض النووي على وجه التحديد. لمساعدة RNAP على التعرف على تسلسلات الحمض النووي ذات التقارب العالي ، ترتبط البروتينات المتخصصة التي تسمى عوامل النسخ بمناطق معينة من الحمض النووي لبدء النسخ وإنهائه. من بين جميع البروتينات المتخصصة التي تساعد RNAP ، يتم حفظ واحد فقط في جميع المجالات الثلاثة للحياة – البكتيريا والعتائق وحقيقيات النوى. يسمى عامل النسخ هذا NusG في البكتيريا ، و Spt5 في العتائق و SPT5 في حقيقيات النوى. & # 160 ؛ يرتبط NusG ببوليميراز RNA أثناء البدء بمجرد & # 963 ؛ العامل قد انفصل. ينظم عملية النسخ عن طريق التحكم في توقف البوليميراز مؤقتًا. يشير الحفظ الشامل لـ NusG إلى أن تنظيم نشاط البوليميراز أثناء الاستطالة قد سبق تنظيم بدء النسخ.

Suggested Reading

  1. Werner, Finn, and Dina Grohmann. "Evolution of multisubunit RNA polymerases in the three domains of life." Nature Reviews Microbiology 9, no. 2 (2011): 85.
  2. Burton, Zachary F. Evolution Since Coding: Cradles, Halos, Barrels, and Wings. Academic Press, 2017.
  3. Tomar, Sushil Kumar, and Irina Artsimovitch. "NusG-Spt5 Proteins Universal Tools for Transcription Modification and Communication." Chemical reviews 113, no. 11 (2013): 8604-8619.