Back to chapter

8.4:

Бактериальная РНК-полимераза и транскрипция

JoVE Core
Molecular Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Core Molecular Biology
Bacterial RNA Polymerase

Languages

Share

Ген в форме ДНК должен быть сперва преобразован в РНК-мессенджер в процессе, называемом транскрипция. Затем эта мРНК транслируется рибосомой для производства белков. Белок, который транскрибирует ДНК в РНК, Называется РНК-полимеразой.Фермент бактериальная ядерная РНК-полимераза”состоит из пяти полипептидных субъединиц, двух идентичных альфа-субъединиц бета-и бета-прайм субъединиц, и омега-субъединицы. Транскрипционный фактор, называемый сигма, ассоциируется с ядерным ферментом для получения холофермента РНК полимеразы. Чтобы запустить транскрипцию, холофермент РНК-полимераза неспецифично связывается с ДНК с низким сродством.Затем он скользит по ДНК чтобы найти последовательность промотера. Когда он вдвигается в в промотером, в частности, минус 10 и минус 35 областей вверх по течению от сайта инициации, субъединица сигма РНК-полимеразы связывается с промоутером И разматывает ДНК, формируя открытый промотерный комплекс. РНК-полимераза холофермент-теперь расположена на участке инициации транскрипция, Синтезирует РНК транскрипт путем добавления комплементарных нуклеотидов К шаблону ДНК.Как только цепь РНК длиной в 10 нуклеотидов была синтезирована, высвобождается сигма-фактор. Фермент ядра РНК-полимеразы продолжает добавлять нуклеотиды к растущей РНК. Транскрибируемая по мере того, как полимераза движется вперед, ДНК постоянно разматывается перед ферментом и наматывается позади него.Этот процесс продолжается до сих пор ген не будет транскрибирован и ядро полимеразы столкнётся с сигалом о прекращении действий. Наиболее распространенный сигнал окончания это симметричное инвертированные повторы богатой GC последовательности, за которой следует Хвост Poly A.Если эта последовательность транскрибирована в РНК, самодополняющая последовательность оснований спаривается для создания стабильной структуры петля со шпильками”Шпилька дестабилизирует ассоциацию мРНК и шаблон ДНК и заставляет полимеразу остановиться и диссоциировать. Таким образом, транскрипционный пузырь лопнет и ДНК перемотается в двойную спираль, а транскрипт вновь образовавшейся пре-мРНК расшифровка будет раскрыт.

8.4:

Бактериальная РНК-полимераза и транскрипция

В ходе эволюции, когда организмы переходили от РНК генома к ДНК геному, требовалось выполнить два необходимых условия. Во-первых, синтез ДНК, зависимый от РНК-матрицы, который является основной формой репликации в ретровирусах и все еще наблюдается в ретротранспозируемых элементах у людей. Во-вторых, синтез РНК, зависимый от ДНК-матрицы, который осуществляется РНК-полимеразой (РНКпол) как у бактерий, так и у эукариот.

Транскрипцию можно разделить на три основных этапа, каждый из которых вовлекает отдельные последовательности ДНК, направляющие полимеразу. Это:

  1. Инициация, которая вовлекает две специфические последовательности на 10 и 35 пар оснований выше гена, называемые промоторами.
  2. Элонгация, при которой полимераза движется по матрице ДНК, синтезируя мРНК в направлении от 5′ к 3′.
  3. Терминация, при которой полимераза встречает область, богатую Ц–Г нуклеотидами и останавливает синтез мРНК.

Бактериальная РНКпол выполняет все три этапа вместе с другими вспомогательными белками. Хотя некоторые РНК-полимеразы, такие как вирусные полимеразы T7 и N4, состоят из одной полипептидной цепи, все организмы с клеточными геномами имеют полимеразы из нескольких субъединиц, которые различаются по размеру и сложности в зависимости от структуры генома. Многосубъединичная структура бактериальной РНКпол помогает ферменту поддерживать каталитическую функцию, облегчает сборку, взаимодействует с ДНК и РНК и саморегулирует свою активность. Хотя это каталитически эффективный фермент, он не распознает специфические последовательности ДНК. Чтобы помочь РНКпол распознавать последовательности ДНК с высоким сродством, специализированные белки, называемые факторами транскрипции, связываются с определенными участками ДНК, чтобы инициировать и прекращать транскрипцию. Из всех специализированных белков, которые помогают РНКпол, только один сохраняется во всех трех доменах жизни – бактерии, археи и эукариоты. Этот фактор транскрипции называется NusG у бактерий, Spt5 у архей и SPT5 у эукариот.  NusG связывается с РНК-полимеразой во время инициации, когда σ-фактор диссоциировал. Он регулирует процессивность транскрипции, контролируя паузы полимеразы. Универсальная консервативность NusG указывает на то, что регуляция активности полимеразы во время элонгации предшествовала регуляции инициации транскрипции.

Suggested Reading

  1. Werner, Finn, and Dina Grohmann. "Evolution of multisubunit RNA polymerases in the three domains of life." Nature Reviews Microbiology 9, no. 2 (2011): 85.
  2. Burton, Zachary F. Evolution Since Coding: Cradles, Halos, Barrels, and Wings. Academic Press, 2017.
  3. Tomar, Sushil Kumar, and Irina Artsimovitch. "NusG-Spt5 Proteins Universal Tools for Transcription Modification and Communication." Chemical reviews 113, no. 11 (2013): 8604-8619.