Back to chapter

11.11:

CRISPR ΠΈ crRNA

JoVE Core
Molecular Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Core Molecular Biology
CRISPR and crRNAs

Languages

Share

Π‘Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΈ постоянно ΡΡ‚Π°Π»ΠΊΠΈΠ²Π°ΡŽΡ‚ΡΡ с инфСкциями ΠΎΡ‚ Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΎΡ„Π°Π³ΠΎΠ²-вирусов, ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Π΅ Π·Π°Ρ€Π°ΠΆΠ°ΡŽΡ‚ Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΈ. Для Π·Π°Ρ‰ΠΈΡ‚Ρ‹ ΠΎΡ‚ этой ΡƒΠ³Ρ€ΠΎΠ·Ρ‹, Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΈ Ρ€Π°Π·Π²ΠΈΠ»ΠΈ ΠΈΠ·ΠΎΡ‰Ρ€Π΅Π½Π½ΡƒΡŽ, Π°Π΄Π°ΠΏΡ‚ΠΈΠ²Π½ΡƒΡŽ систСму ΠΈΠΌΠΌΡƒΠ½ΠΈΡ‚Π΅Ρ‚Π°, которая извСста ΠΊΠ°ΠΊ систСма CRISPR-CAS уничтоТСния Π”ΠΠš Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΎΡ„Π°Π³Π° Π² случаС ΠΏΠΎΠ²Ρ‚ΠΎΡ€Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ½Ρ„Π΅ΠΊΡ†ΠΈΠΈ. Π­Ρ‚Π° систСма Π²ΠΊΠ»ΡŽΡ‡Π°Π΅Ρ‚ Π² сСбя Ρ‚Ρ€ΠΈ Ρ€Π°Π·Π»ΠΈΡ‡Π½Ρ‹Ρ… процСсса-инкорпорация сСгмСнта Π”ΠΠš Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΎΡ„Π°Π³Π° Π² Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ°Π»ΡŒΠ½Ρ‹ΠΉ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌ, ΠŸΡ€ΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡ‚Π²ΠΎ РНК CRISPR ΠΈ Cas-Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ ΠΈ CRISPR РНК-Cas-опосрСдованноС расщСплСниС Π”ΠΠš Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΎΡ„Π°Π³Π°.Когда Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΎΡ„Π°Π³ Π½Π°ΠΏΠ°Π΄Π°Π΅Ρ‚, ΠΎΠ½ прикрСпляСтся ΠΊ повСрхности Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠ»Π΅Ρ‚ΠΊΠ΅ ΠΈ Π²Π²ΠΎΠ΄ΠΈΡ‚ свою Π”ΠΠš Π² Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΈ, которая Π·Π°Ρ‚Π΅ΠΌ расщСпляСтся Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠΉ систСмой. ΠšΠΎΡ€ΠΎΡ‚ΠΊΠΈΠΉ сСгмСнт Π”ΠΠš Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΎΡ„Π°Π³Π° Π·Π°Ρ‚Π΅ΠΌ добавляСтся Π² ΡΠΏΠ΅Ρ†ΠΈΡ„ΠΈΡ‡Π΅ΡΠΊΡƒΡŽ ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡ‚ΡŒ Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ°, CRISPR-Π² ΠΏΠ΅Ρ€Π΅Π²ΠΎΠ΄Π΅ Π·Π²ΡƒΡ‡ΠΈΡ‚ ΠΊΠ°ΠΊ ΠšΠ»Π°ΡΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Π½Ρ‹Π΅ ΠšΠΎΡ€ΠΎΡ‚ΠΊΠΈΠ΅ ΠΏΠ°Π»ΠΈΠ½Π΄Ρ€ΠΎΠΌΠ½Ρ‹Π΅ ΠΏΠΎΠ²Ρ‚ΠΎΡ€Ρ‹ с рСгулярными ΠΈΠ½Ρ‚Π΅Ρ€Π²Π°Π»Π°ΠΌΠΈ. Π­Ρ‚ΠΎ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½Ρ‹Π΅ области, Π³Π΄Π΅ Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ°Π»ΡŒΠ½Π°Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ повторяСтся Π² сочСтании с ΠΊΠΎΡ€ΠΎΡ‚ΠΊΠΈΠΌΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡΠΌΠΈ Ρ€Π°Π·Π»ΠΈΡ‡Π½Ρ‹Ρ… спСйсСров ΠΎΡ‚ Ρ€Π°Π·Π»ΠΈΡ‡Π½Ρ‹Ρ… Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΎΡ„Π°Π³ΠΎΠ².Π­Ρ‚ΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΠΈ спСйсСров ΡΠ»ΡƒΠΆΠΈΡ‚ΡŒ ΠΏΠ°ΠΌΡΡ‚ΡŒΡŽ для Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΉ ΠΎ всСх Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΎΡ„Π°Π³Π°Ρ…, ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Π΅ ΡƒΠΆΠ΅ Π½Π°ΠΏΠ°Π΄Π°Π»ΠΈ. Π‘Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΡƒΡŽΡ‚ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ спСйсСров для быстрого выявлСния ΠΈ уничтоТСния Π”ΠΠš ΠΊΠΎΠ½ΠΊΡ€Π΅Ρ‚Π½ΠΎΠ³ΠΎ Ρ‚ΠΈΠΏΠ° Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΎΡ„Π°Π³Π° Ссли ΠΎΠ½ снова Π½Π°ΠΏΠ°Π΄Π΅Ρ‚. Вранскрипты областСй CRISPR ΠΏΠ΅Ρ€Π΅Ρ€Π°Π±Π°Ρ‚Ρ‹Π²Π°ΡŽΡ‚ΡΡ для производства ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡƒΠ»Ρ‹ РНК CRISPR ΠΏΡ€ΠΈΠΌΠ΅Ρ€Π½ΠΎ 30 Π½ΡƒΠΊΠ»Π΅ΠΎΡ‚ΠΈΠ΄ΠΎΠ² Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ, которая ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ‚ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ€Π½ΡƒΡŽ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ, ΠΈ рядом ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΠ²Ρ‚ΠΎΡ€Π°.БвязанныС с CRISPR, ΠΈΠ»ΠΈ систСмы CAS, ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡ€ΡƒΡŽΡ‚ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ CAS. Π—Π°Ρ‚Π΅ΠΌ этот Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ Cas ассоциируСтся Π‘ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡƒΠ»ΠΎΠΉ РНК CRISPR для формирования Ρ€ΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡƒΠΊΠ»Π΅ΠΎΠΏΡ€ΠΎΡ‚Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²Ρ‹ΠΉ комплСкса. Если вновь Π°Ρ‚Π°ΠΊΡƒΠ΅Ρ‚ Ρ‚ΠΎΡ‚ ΠΆΠ΅ Ρ‚ΠΈΠΏ Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΎΡ„Π°Π³ΠΎΠ², Π•Π³ΠΎ Π”ΠΠš признаётся ΡΠΏΠ΅Ρ†ΠΈΠ°Π»ΡŒΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒΡŽ спСйсСров, ΠΏΡ€ΠΈΡΡƒΡ‚ΡΡ‚Π²ΡƒΡŽΡ‰ΠΈΡ… Π² РНК CRISPR.Π’ΠΎΠ³Π΄Π° ассоциированный Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ CAS, Π»ΠΈΠ±ΠΎ Π²ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ΠΎΡ‡ΠΊΡƒ, Π»ΠΈΠ±ΠΎ с ΠΏΠΎΠΌΠΎΡ‰ΡŒΡŽ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡŒΠΊΠΈΡ… Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ², Π²Ρ‹Ρ€Π΅Π·Π°Π΅Ρ‚ ΠΎΠ±Π΅ Ρ†Π΅ΠΏΠΈ Π”ΠΠš Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΎΡ„Π°Π³Π°. ΠŸΡ€ΠΈΠ½Ρ†ΠΈΠΏΡ‹ CRISPR БистСмы CAS ΠΈ Π΅Π΅ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½Ρ‚ΠΎΠ² ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ для выбивания ΠΈΠ»ΠΈ модифицирования любого Π³Π΅Π½Π° Π² ΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ΅, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΡƒΡŽΡ Π΄ΠΎΠΏΠΎΠ»Π½ΡΡŽΡ‰ΡƒΡŽ Π΅Π³ΠΎ Π½Π°ΠΏΡ€Π°Π²Π»ΡΡŽΡ‰ΡƒΡŽ РНК. Π Π°Π·Π»ΠΈΡ‡Π½Ρ‹Π΅ Ρ‚ΠΈΠΏΡ‹ систСма CRISPR CAS ΠΏΡ€ΠΈΡΡƒΡ‚ΡΡ‚Π²ΡƒΡŽΡ‚ ΠΈ Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΉ ΠΈ Π°Ρ€Ρ…Π΅ΠΉ.Π’ ΠΈΡ… числС БистСма CRISPR Cas9, ΠΎΠ΄Π½Π° ΠΈΠ· самых Ρ…ΠΎΡ€ΠΎΡˆΠΎ ΠΈΠ·ΡƒΡ‡Π΅Π½Π½Ρ‹Ρ… ΠΈ ΡˆΠΈΡ€ΠΎΠΊΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΡƒΠ΅ΠΌΡ‹Ρ… для Π΄Ρ€ΡƒΠ³ΠΈΡ… практичСских ΠΏΡ€ΠΈΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠΉ ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡŒΠΊΡƒ ΠΎΠ½Π° ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ‚ Π±Ρ‹Ρ‚ΡŒ Π»Π΅Π³ΠΊΠΎ ΠΈ эффСктивно ΠΏΠ΅Ρ€Π΅ΠΏΡ€ΠΎΠ³Ρ€Π°ΠΌΠΌΠΈΡ€ΠΎΠ²Π°Π½Π° для Ρ‚ΠΎΠ³ΠΎ, Ρ‡Ρ‚ΠΎΠ±Ρ‹ Ρ†Π΅Π»ΠΈΡ‚ΡŒΡΡ Π² Ρ€Π°Π·Π½Ρ‹Π΅ Π³Π΅Π½Ρ‹.

11.11:

CRISPR ΠΈ crRNA

Π‘Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΈ ΠΈ Π°Ρ€Ρ…Π΅ΠΈ, ΠΊΠ°ΠΊ ΠΈ эукариоты, восприимчивы ΠΊ вирусным инфСкциям, поэтому ΠΎΠ½ΠΈ Ρ€Π°Π·Ρ€Π°Π±ΠΎΡ‚Π°Π»ΠΈ ΡƒΠ½ΠΈΠΊΠ°Π»ΡŒΠ½ΡƒΡŽ Π°Π΄Π°ΠΏΡ‚ΠΈΠ²Π½ΡƒΡŽ ΠΈΠΌΠΌΡƒΠ½Π½ΡƒΡŽ систСму для самозащиты. ΠšΠΎΡ€ΠΎΡ‚ΠΊΠΈΠ΅ ΠΏΠ°Π»ΠΈΠ½Π΄Ρ€ΠΎΠΌΠ½Ρ‹Π΅ ΠΏΠΎΠ²Ρ‚ΠΎΡ€Ρ‹, располоТСнныС Π³Ρ€ΡƒΠΏΠΏΠ°ΠΌΠΈ, рСгулярно ΠΏΠ΅Ρ€Π΅ΠΌΠ΅ΠΆΠ°ΡŽΡ‰ΠΈΠ΅ΡΡ спСйсСрами, (CRISPR) ΠΈ CRISPR-связанныС Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ (CRISPR-Cas) ΠΏΡ€ΠΈΡΡƒΡ‚ΡΡ‚Π²ΡƒΡŽΡ‚ Ρƒ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Ρ‡Π΅ΠΌ 45% извСстных Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΉ ΠΈ 90% извСстных Π°Ρ€Ρ…Π΅ΠΉ.

БистСма CRISPR-Cas Ρ…Ρ€Π°Π½ΠΈΡ‚ копию Ρ‡ΡƒΠΆΠ΅Ρ€ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ Π”ΠΠš Π² Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ΅ хозяина ΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΡƒΠ΅Ρ‚ Π΅Π΅ для ΠΈΠ΄Π΅Π½Ρ‚ΠΈΡ„ΠΈΠΊΠ°Ρ†ΠΈΠΈ Ρ‡ΡƒΠΆΠ΅Ρ€ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ Π”ΠΠš ΠΏΡ€ΠΈ ΠΏΠΎΠ²Ρ‚ΠΎΡ€Π½ΠΎΠΌ Π·Π°Ρ€Π°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΠΈ. CRISPR-Cas состоит ΠΈΠ· Ρ‚Ρ€Π΅Ρ… этапов для Π°Ρ‚Π°ΠΊΠΈ Π½Π° ΠΏΠΎΠ²Ρ‚ΠΎΡ€Π½ΠΎ Π·Π°Ρ€Π°ΠΆΠ°ΡŽΡ‰ΠΈΠΉ вирус. На стадии приобрСтСния протоспСйсСрная ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡ‚ΡŒ вирусной Π”ΠΠš расщСпляСтся систСмами CRISPR. БпСцифичСская ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡ‚ΡŒ протоспСйсСра идСнтифицируСтся для расщСплСния с ΠΏΠΎΠΌΠΎΡ‰ΡŒΡŽ смСТного ΠΌΠΎΡ‚ΠΈΠ²Π° протоспСйсСра (PAM), ΠΏΡ€ΠΈΡΡƒΡ‚ΡΡ‚Π²ΡƒΡŽΡ‰Π΅Π³ΠΎ Π² Ρ†Π΅Π»Π΅Π²ΠΎΠΉ вирусной Π”ΠΠš. Π—Π°Ρ‚Π΅ΠΌ ΠΎΡ‚Ρ‰Π΅ΠΏΠ»Π΅Π½Π½ΡƒΡŽ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΡŒ протоспСйсСра Π²ΠΊΠ»ΡŽΡ‡Π°ΡŽΡ‚ Π² Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ°Π»ΡŒΠ½Ρ‹ΠΉ локус CRISPR.  На стадии экспрСссии Π³Π΅Π½Ρ‹ CRISPR ΠΈ CAS Ρ‚Ρ€Π°Π½ΡΠΊΡ€ΠΈΠ±ΠΈΡ€ΡƒΡŽΡ‚ΡΡ с ΠΎΠ±Ρ€Π°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΏΡ€Π΅-CRISPR РНК (crРНК) ΠΈ Cas-мРНК. Π—Π°Ρ‚Π΅ΠΌ ΠΏΡ€Π΅-crРНК процСссируСтся для получСния Π·Ρ€Π΅Π»ΠΎΠΉ crРНК. На стадии ΠΈΠ½Ρ‚Π΅Ρ€Ρ„Π΅Ρ€Π΅Π½Ρ†ΠΈΠΈ crРНК ΠΈ транслированный Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ Cas ΠΎΠ±Ρ€Π°Π·ΡƒΡŽΡ‚ Ρ€ΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡƒΠΊΠ»Π΅ΠΎΠΏΡ€ΠΎΡ‚Π΅ΠΈΠ΄Π½Ρ‹ΠΉ комплСкс, ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹ΠΉ Π½Π°Ρ†Π΅Π»Π΅Π½ Π½Π° Π²ΠΈΡ€ΡƒΡΠ½ΡƒΡŽ Π”ΠΠš ΠΈ расщСпляСт Π΅Π΅ спСцифично ΠΎΡ‚Π½ΠΎΡΠΈΡ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Ρ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎΡΡ‚ΠΈ.

БистСмы CRISPR-Cas ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Ρ€Π°Π·Π΄Π΅Π»ΠΈΡ‚ΡŒ Π½Π° Ρ‚Ρ€ΠΈ Ρ€Π°Π·Π»ΠΈΡ‡Π½Ρ‹Ρ… Ρ‚ΠΈΠΏΠ°, ΠΊΠΎΡ‚ΠΎΡ€Ρ‹Π΅ Ρ…Π°Ρ€Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠ·ΡƒΡŽΡ‚ΡΡ Ρ‚ΠΈΠΏΠ°ΠΌΠΈ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² Cas. Π’ систСмах Ρ‚ΠΈΠΏΠ° I Cas3 ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°Π΅Ρ‚ Π³Π΅Π»ΠΈΠΊΠ°Π·Π½ΠΎΠΉ, Π° Ρ‚Π°ΠΊΠΆΠ΅ Π½ΡƒΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½ΠΎΠΉ Π°ΠΊΡ‚ΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡ‚ΡŒΡŽ. ΠœΠ½ΠΎΠΆΠ΅ΡΡ‚Π²ΠΎ Π΄ΠΎΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΡ‚Π΅Π»ΡŒΠ½Ρ‹Ρ… Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ² Cas ΡΠΎΠ·Π΄Π°ΡŽΡ‚ Π΄Π²ΡƒΠ½ΠΈΡ‚Π΅Π²ΠΎΠΉ Ρ€Π°Π·Ρ€Ρ‹Π² Π² вирусной Π”ΠΠš. Π’ систСмах Ρ‚ΠΈΠΏΠ° II Π½ΡƒΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π° Cas9 дСйствуСт ΡΠ°ΠΌΠΎΡΡ‚ΠΎΡΡ‚Π΅Π»ΡŒΠ½ΠΎ, расщСпляя Π”ΠΠš. Помимо crРНК, систСмы Ρ‚ΠΈΠΏΠ° II Ρ‚Π°ΠΊΠΆΠ΅ содСрТат Ρ‚Ρ€Π°Π½ΡΠ°ΠΊΡ‚ΠΈΠ²ΠΈΡ€ΡƒΡŽΡ‰ΡƒΡŽ CRISPR РНК (tracrРНК), которая Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ…ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠ° для созрСвания crРНК. Π’ систСмах Ρ‚ΠΈΠΏΠ° III Cas10 выполняСт Π½Π΅ΠΈΠ·Π²Π΅ΡΡ‚Π½ΡƒΡŽ Ρ„ΡƒΠ½ΠΊΡ†ΠΈΡŽ, Π½ΠΎ, ΠΊΠ°ΠΊ ΠΈ Π² систСмС Ρ‚ΠΈΠΏΠ° I, для расщСплСния Π”ΠΠš трСбуСтся нСсколько Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ². БистСма Ρ‚ΠΈΠΏΠ° III Ρ‚Π°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ‚ Π½Π°Ρ†Π΅Π»ΠΈΠ²Π°Ρ‚ΡŒΡΡ Π½Π° РНК для расщСплСния. Π’ΠΈΠΏΡ‹ I ΠΈ III ΠΎΠ±Π½Π°Ρ€ΡƒΠΆΠ΅Π½Ρ‹ ΠΊΠ°ΠΊ Ρƒ Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΉ, Ρ‚Π°ΠΊ ΠΈ Ρƒ Π°Ρ€Ρ…Π΅ΠΉ, Π² Ρ‚ΠΎ врСмя ΠΊΠ°ΠΊ Π½Π° сСгодняшний дСнь Ρ‚ΠΈΠΏ II ΠΎΠ±Π½Π°Ρ€ΡƒΠΆΠ΅Π½ Ρ‚ΠΎΠ»ΡŒΠΊΠΎ Ρƒ Π±Π°ΠΊΡ‚Π΅Ρ€ΠΈΠΉ. По ΡΡ€Π°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡŽ с ΠΎΠ±Ρ‹Ρ‡Π½Ρ‹ΠΌΠΈ ΠΌΠ΅Ρ‚ΠΎΠ΄Π°ΠΌΠΈ рСдактирования Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ°, Ρ‚Π°ΠΊΠΈΠΌΠΈ ΠΊΠ°ΠΊ рСстрикционныС Ρ„Π΅Ρ€ΠΌΠ΅Π½Ρ‚Ρ‹, систСма CRISPR-Cas ΠΏΡ€ΠΎΡ‰Π΅ Π² использовании, ΠΎΠ½Π° ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ‚ Π²ΠΎΠ·Π΄Π΅ΠΉΡΡ‚Π²ΠΎΠ²Π°Ρ‚ΡŒ Π½Π° нСсколько Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Π² ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΌ экспСримСнтС; поэтому ΠΎΠ½Π° ΠΏΡ€Π΅Π²Ρ€Π°Ρ‚ΠΈΠ»Π°ΡΡŒ Π² ΠΌΠΎΡ‰Π½Ρ‹ΠΉ инструмСнт Π³Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ½ΠΆΠ΅Π½Π΅Ρ€ΠΈΠΈ ΠΈ ΡˆΠΈΡ€ΠΎΠΊΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡŒΠ·ΡƒΠ΅Ρ‚ΡΡ для ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡ„ΠΈΠΊΠ°Ρ†ΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ° ΠΊΠ°ΠΊ прокариотичСских, Ρ‚Π°ΠΊ ΠΈ эукариотичСских ΠΎΡ€Π³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ².

Suggested Reading

  1. Thurtle‐Schmidt, Deborah M., and Te‐Wen Lo. "Molecular biology at the cutting edge: a review on CRISPR/CAS9 gene editing for undergraduates." Biochemistry and Molecular Biology Education 46, no. 2 (2018): 195-205.
  2. Rath, Devashish, Lina Amlinger, Archana Rath, and Magnus Lundgren. "The CRISPR-Cas immune system: biology, mechanisms and applications." Biochimie 117 (2015): 119-128.
  3. Wang, Haifeng, Marie La Russa, and Lei S. Qi. "CRISPR/Cas9 in genome editing and beyond." Annual Review of Biochemistry 85 (2016): 227-264.
  4. Adli, Mazhar. "The CRISPR tool kit for genome editing and beyond." Nature Communications 9, no. 1 (2018): 1-13.