器官型培养的成年兔视网膜
Summary
本文演示兔眼视网膜和颗粒介导的基因转染质粒编码绿色荧光蛋白或为视网膜神经节细胞的亚细胞标记的各种的解剖和孵化。
Abstract
功能的神经组织器官型培养系统在神经生物学研究的重要工具。理想的情况下，这种成像技术，遗传操作，电生理记录系统应兼容。在这里，我们提出了一个简单，无需专门的设备和很少的维护成年兔视网膜相间组织文化系统。我们展示了兔眼视网膜和颗粒介导的基因转染质粒编码绿色荧光蛋白或为视网膜神经节细胞的亚细胞标记的各种的解剖和孵化。培养兔视网膜至6天的整体解剖结构很少变化或个别的形态神经节和无长突细胞，这样，才能保持活力。
Protocol
基因枪子弹（金） 100X的PVP（0.5mg/ml的），100％乙醇。 称取30毫克和BioRad公司1.6微米的微载体的黄金放入1.5 mL Eppendorf管。 计算所需的质粒浓度0.5-3微克/毫克质粒黄金，并放入管与黄金微载体的质粒。如果需要组合几个质粒。 携带质粒100μL，用蒸馏水量。 添加到管100μL0.05M亚精胺。涡管30秒。 涡旋1分钟全速。超声为3-5分钟.. 干TEFZEL管BIORAD PDS-1000/He仪?…
Discussion
1。用这种方法，我能做些什么？
- 见细胞形态清晰。
- 标记细胞记录。
- 过度表达的蛋白质，像PSD95，而且其他蛋白质，调节细胞的反应，如离子通道，受体。
- 表达抑制RNA的。
2。成人视网膜，我可以保持多久？
- 4天是没有问题的成年兔。经过6天的细胞看“病”，即轴突回缩，你看到的树突和对光反应的记录肿胀变得不可靠（只〜50％的细胞被发现后，当时的光响应?…
References
- Landreth, . B. W., Agranoff, N. R., Smalheiser, S. M., Crain, M. B., Bornstein, R., Adler, P. J., Magistretti, A. G., Hyndman, W. J., Shoemaker, H., Rehm, T., Schafer, H., Betz, S. U., Kim, H., Takahashi, A. R., Caffe, A., Soderpalm, T., van Veen, H. C., Wong, S., Thompson, D. Y., Yu, S. J., Cringle, V. A., Alder, S. J., Taylor, G. M., Seigel, A. R., Caffe, P., Ahuja, B., Holmqvist, S., Azadi, J., Forsell, I., Holmqvist, J., Hatakeyama, R., Kageyama, S. S., Zhang, X. Y., Fu, C. J., Barnstable, S. W., Wang, X., Mu, W. J., Bowers, W. H., Klein, T., Inoue, M., Hojo, Y., Bessho, Y., Tano, J., Lee, R., Kageyama, A., Kretz, S. H., Hermening , S., Isenmann , I., Liljekvist-Larsson, K., Johansson, B., Reidel, W., Orisme, T., Goldmann, W. C., Smith, U., Wolfrum, H., Xin, J. A., Yannazzo, R. S., Duncan, E. V., Gregg, M., Singh, P., Koulen, S. A., Johnston, D. C., Tang, D. C., Lo, A. K., McAllister, K. a. t. z., LC, L. E., Rajagopalan, J. S., Malter, A. K., McAllister, W. -. B., Gan, J., Grutzendler, W., Wong, R., Wong, J., Lichtman, H., Sato, S., Hattori, S., Kawamoto, I., Kudoh, A., Hayashi, I., Yamamoto, G., Zhang, M. E., Selzer, R. L., Sohn, M. T., Murray, K., Schwarz, J., Nyitray, P., Purray, A. P., Franko, J. A., O’Brien, M., Holt, G., Whiteside, S. C., Lummis, M. H., Hastings, L., Klimaschewski, W., Nindl, M., Pimpl, P., Waltinger, K., Pfaller, P., Kettunen, J., Demas, C., Lohmann, N., Kasthuri, Y., Gong, R. O., Wong, N., Gamper, M. S., Shapiro, M. J., Wirth, P., Wahle, J., O’Brien, S. C., Lummis, A. M., Benediktsson, S. J., Schachtele, S. H., Green, M. E., Dailey, L., Chow, E. M., Levine, T. A., Reh, R. L., Rockhill, F. J., Daly, M. A., MacNeil, S. P., Brown, R. H., Masland, W., Sun, N., Li, S., He, W., Sun, N., Li, S., He, R. C., Stacy, R. O., Wong, E., Strettoi, V., Pignatelli, C., Rossi, V., Porciatti, B., Falsini, V., Pignatelli, E., Strettoi, V. P., Connaughton, D., Graham, R., Nelson, P. H., Edqvist, F., Hallbook, T. C., Jakobs, R. T., Libby, Y., Ben, S. W., John, R. H., Masland, Y., Qin, G., Xu, W., Wang, R., Roizenblatt, J. D., Weiland, S., Carcieri, G., Qiu, M., Behrend, M. S., Humayun, A., Koizumi, G., Zeck, Y., Ben, R. H., Masland, T. C., Jakobs, Explant culture of adult goldfish retina: a model for the study of CNS regeneration. Brain Res. 161, 39-55 (1979).
Cite This Article
Lye, M. H., Jakobs, T. C., Masland, R. H., Koizumi, A. Organotypic Culture of Adult Rabbit Retina. J. Vis. Exp. (3), e190, doi:10.3791/190 (2007).