Summary

In vivo de imagens de parasitas Leishmania transgênicas em um host ao vivo

Published: July 27, 2010
doi:

Summary

Um<em> In vivo</em> Sistema de imagem é usado para gerar medições quantitativas de infecção murina com o protozoário tripanossomatídeos<em> Leishmania</em>. Este é um método não-invasivo e não-letais para a detecção de parasitas expressar luciferase dentro de muitos tecidos ao longo da crônica<em> Leishmania</em> Spp. infecção.

Abstract

Espécies distintas de<em> Leishmania,</em> Parasita um protozoário da família<em> Trypanosomatidae</em>, Normalmente causam diferentes manifestações da doença humana. As formas mais comuns da doença são a leishmaniose visceral (LV) e leishmaniose tegumentar (LT). Modelos de mouse da leishmaniose são amplamente utilizados, mas a quantificação dos encargos parasita durante a doença requer murino ratos para ser sacrificado em vários momentos após a infecção. Cargas do parasita são, então, medido quer através de microscopia, limitando ensaio de diluição, ou amplificação de DNA do parasito qPCR. O<em> In vivo</em> Imagem do sistema (IVIS) tem um pacote de software integrado que permite a detecção de um sinal bioluminescente associado com as células de organismos vivos. Tanto para minimizar o uso de animais e de seguir longitudinalmente infecção em indivíduos, em modelos in vivo para imagens<em> Leishmania</em> Spp. VL causando ou CL foram estabelecidas. Parasitas foram projetadas para expressar luciferase, e estes foram introduzidas em ratos ou por via intradérmica ou por via intravenosa. Medições quantitativas da bioluminescência condução luciferase dos transgênicos<em> Leishmania</em> Parasitas dentro do rato foram feitas usando IVIS. Camundongos individuais podem ser fotografada várias vezes durante estudos longitudinais, permitindo-nos avaliar a variação inter-animal na inóculos parasita inicial experimental, e avaliar a multiplicação dos parasitas em tecidos de camundongos. Parasitas sejam detectados com alta sensibilidade em locais cutâneas. Embora seja muito provável que o sinal (fótons / segundo / parasita) é mais baixa em mais órgãos viscerais que a pele, mas as comparações quantitativas de sinais em superficial contra sites de profunda não ter sido feito. É possível que os números do parasita entre os sites corpo não podem ser diretamente comparados, apesar de cargas do parasita nos mesmos tecidos podem ser comparados entre ratos. Exemplos de uma espécie visceralizing (<em> L. infantum chagasi</em>) E uma espécie causando a leishmaniose cutânea (<em> L. mexicana</em>) São mostradas. O procedimento IVIS pode ser usado para monitoramento e análise de modelos animais de pequeno porte de uma grande variedade de<em> Leishmania</em> Espécies que causam as diferentes formas de leishmaniose humana.

Protocol

1. Infecção de pequenos animais transgênicos com Leishmania 1. Linhas parasita Transgênicas Leishmania spp. parasitas expressar luciferase são gerados usando um epissomal ou um vetor de integração, quando relatada. 1 2 linhas clonais são os preferidos. Dois pontos importantes são: (A) luciferase integrado é preferível a luciferase epissomal, uma vez que, em teoria, estas linhas devem parasita melhor …

Discussion

O sistema de imagem in vivo (IVIS) fornece um método para geração de imagens animal inteiro ou in vivo de imagens modelos de infecção experimental de diferentes formas de leishmaniose. 18,16 A spp Leishmania. parasitas podem ser projetados para expressar luciferase firefly a um nível que é detectado in vivo com a tecnologia de imagem IVIS. Uma das grandes vantagens deste método é que permite visualização não invasiva de Leishmania spp. dentro do animal …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Este trabalho foi financiado em parte por uma concessão comentário Mérito do Department of Veterans Affairs, pelo NIH concede AI045540, AI067874, AI076233-01 e AI080801 (MEW), e por AI29646 (SMB). O trabalho foi realizado em parte durante o financiamento de CT e JG pelo NIH T32 AI07511.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
D-Luciferin Potassium Salt Reagent Caliper LifeSciences (Formerly Xenogen) 122796  
IVIS Imaging System 200 Series Equipment Caliper LifeSciences   Other IVIS models that can be used include: Lumina II, Lumina XR, Kinetic, and Spectrum.

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Cite This Article
Thalhofer, C. J., Graff, J. W., Love-Homan, L., Hickerson, S. M., Craft, N., Beverley, S. M., Wilson, M. E. In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host. J. Vis. Exp. (41), e1980, doi:10.3791/1980 (2010).

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