Эта статья даст метод выделения и культивирования перепелиных или куриных HH14<sup> -</sup> Клапан эндокарда клеток и HH25 клапан подушки мезенхимальных клеток.
Abstract
Правильное формирование и функции эмбриональных сердечных клапанов имеет решающее значение для развития прогрессии. Раннем эмбриональном сердце U-образной формы из эндокарда окружении миокарда. Миокарда выделяет сердечного желе, гиалуронана богатых желатиновой матрице, в атриовентрикулярного (АВ) соединения и выходного тракта (OFT) просвета. На этапе HH14 valvulogenesis начинается тогда, когда подмножество эндокарда клетки получают сигналы из миокарда, эндокарда, чтобы пройти мезенхимальные трансформации (EMT), и вторгаться в сердечной желе. На этапе HH25 клапанной подушки полностью mesenchymalized, и именно это мезенхимы, что со временем формы клапанного аппарата и перегородки сердца. Понимание механизмов, которые инициируют и модулировать процесс дифференциации EMT и клеточной важны, потому что их связи с серьезными врожденными пороками сердца. В этом исследовании мы представляем методы, чтобы изолировать предварительно ЕМТ эндокарда и пост-EMT мезенхимальные клетки, которые являются двумя различными фенотипами ячейки prevalvular подушке. Предварительно ЕМТ эндокарда клетки можно культивировать с или без миокарда. После ЕМТ А. В. подушке мезенхимальных клеток можно выращивать внутри механически ограничены, или без стресса гели коллагена. Эти 3D-модели в пробирке имитировать ключевых событий клапанной морфогенный и полезны для деконструкции механизмы ранней и поздней стадии valvulogenesis.
Protocol
1. Подготовка Инкубируйте плодородной перепелиные или куриные яйца на стадии 14 – (около 2 дней) или 25 (около 4,5 дней) при 60% влажности и 37 ° C. Подготовка сбалансированный солевой раствор стерильной Графа (EBSS) Добавить 100 мл 10X EBSS до 600 мл воды 18 МОм Добавить 2,2 г бикар…
Discussion
Метод выделения эндокарда клетки из стадии HH14 – сердца, первоначально разработанная Раньян и Markwald обеспечивает контролируемое, в пробирке условия для изучения факторов, которые инициируют и модулируют эмбриональных ЕМТ 2. HH14 – эндокарда эксплантов культурный без…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Это исследование проводится при поддержке Фонда Хартвелл, Американской ассоциации сердца (ученый развития грант № 0830384N) и Фондом Leducq: митрального 07CVD04.
Mahler, G., Gould, R., Butcher, J. Isolation and Culture of Avian Embryonic Valvular Progenitor Cells. J. Vis. Exp. (44), e2159, doi:10.3791/2159 (2010).