Summary

Microinjection d'embryons aegypti a. Pour obtenir les moustiques transgéniques

Published: July 04, 2007
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Summary

Dans cette vidéo, Nijole Jasinskiene démontre la méthodologie employée pour générer transgéniques moustiques Aedes aegypti, vecteurs de la dengue. Les techniques pour la préparation correcte des aiguilles de microinjection, desséchants embryons, et effectuant la microinjection sont démontrés.

Abstract

Dans cette vidéo, Nijole Jasinskiene démontre la méthodologie employée pour générer transgéniques moustiques Aedes aegypti, vecteurs de la dengue. Les techniques pour la préparation correcte des aiguilles de microinjection, desséchants embryons, et effectuant la microinjection sont démontrés.

Protocol

Préparation à l'avance de la microinjection Moustiques nourrissent de sang: pour l'injection du lundi au vendredi femelles se nourrissent sur le jeudi précédent. Préparer des aiguilles de verre en utilisant le programme 3 ou 2 (voir matériaux). Pose du tube pour le flacon de culture des embryons est la drosophile. Coton humide dans le fond, avec un disque de papier filtre humide qui la recouvre. Préparer lamelle en plastique en collant double-face de la cassette à…

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
1x Injection solution Buffer     5mM KCl, 0.1mM sodium phosphate, ph 6. 8
Construct plasmid DNA     0.5 mg/ml.
Helper plasmid DNA     0.3 mg/ml
EndoFree Plasmid kit Kit Qiagen    
Millex-GV column     SLGV RO4 NL To clean DNA.
Glass puller Instrument Sutter Instrument Co Model P-87 Heat-815, Pull-10, Vel-10, Time-100. Heat-700, Pull-30, Vel-36, Time-50
Quartz puller Instrument Sutter Instrument Co Model P-2000 Heat-275, Fil-3, Vel-38, Del-250, Pull-141
Injection glass needles       Prepared by drawing capillary tubing into a fine 3-8 um with a shaft of approximately 100-300 um micropipette puller. When the needle is new, the tip is sealed and usually breaks in the first or second injection or the glass needle tip can be beveled using a Brown type micro-pipette beveller (Sutter Instrument).
Aedes aegypti Animal     Male and female mosquitos, to obtain embryos.
Drosophila culture vial       For mosquito egg-laying.
Halocarbon oil Reagent     Oil for desiccation: Halocarbon oil 700:Halocarbon oil 27(1:1)
Forceps No5 Tool      
Fine paintbrush   Sable No. 0000  
Whatman paper Tool      
Microloader Tool Eppendorf 5242 956.003  
Transjector Tool Eppendorf    
Microscope   Leica   With moving stage and micromanipulator.
3MM Whatman paper        
double sided tape        

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Cite This Article
Jasinskiene, N., Juhn, J., James, A. A. Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes. J. Vis. Exp. (5), e219, doi:10.3791/219 (2007).

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