Summary

Microinjeção de embriões A. aegypti obter mosquitos transgênicos

Published: July 04, 2007
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Summary

Neste vídeo, Nijole Jasinskiene demonstra a metodologia utilizada para gerar transgênicos mosquitos Aedes aegypti, que são vetores da dengue. As técnicas para preparar corretamente agulhas microinjeção, os embriões desidratantes, e realizando microinjeção são demonstradas.

Abstract

Neste vídeo, Nijole Jasinskiene demonstra a metodologia utilizada para gerar transgênicos mosquitos Aedes aegypti, que são vetores da dengue. As técnicas para preparar corretamente agulhas microinjeção, os embriões desidratantes, e realizando microinjeção são demonstradas.

Protocol

Preparação antes da microinjeção Mosquitos alimentam de sangue: para injeção de segunda a sexta-feira fêmeas alimentam na quinta-feira anterior. Prepare agulhas de vidro usando o programa de 3 ou 2 (ver Materiais). Deitado de tubos para os embriões é Drosophila frasco de cultura. Algodão molhado no fundo, com um disco de papel de filtro molhado cobrindo-o. Prepare lamínula de plástico furando a fita dupla face a um fim. Fita guarnição para cobrir deslizamento de mod…

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
1x Injection solution Buffer     5mM KCl, 0.1mM sodium phosphate, ph 6. 8
Construct plasmid DNA     0.5 mg/ml.
Helper plasmid DNA     0.3 mg/ml
EndoFree Plasmid kit Kit Qiagen    
Millex-GV column     SLGV RO4 NL To clean DNA.
Glass puller Instrument Sutter Instrument Co Model P-87 Heat-815, Pull-10, Vel-10, Time-100. Heat-700, Pull-30, Vel-36, Time-50
Quartz puller Instrument Sutter Instrument Co Model P-2000 Heat-275, Fil-3, Vel-38, Del-250, Pull-141
Injection glass needles       Prepared by drawing capillary tubing into a fine 3-8 um with a shaft of approximately 100-300 um micropipette puller. When the needle is new, the tip is sealed and usually breaks in the first or second injection or the glass needle tip can be beveled using a Brown type micro-pipette beveller (Sutter Instrument).
Aedes aegypti Animal     Male and female mosquitos, to obtain embryos.
Drosophila culture vial       For mosquito egg-laying.
Halocarbon oil Reagent     Oil for desiccation: Halocarbon oil 700:Halocarbon oil 27(1:1)
Forceps No5 Tool      
Fine paintbrush   Sable No. 0000  
Whatman paper Tool      
Microloader Tool Eppendorf 5242 956.003  
Transjector Tool Eppendorf    
Microscope   Leica   With moving stage and micromanipulator.
3MM Whatman paper        
double sided tape        

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Cite This Article
Jasinskiene, N., Juhn, J., James, A. A. Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes. J. Vis. Exp. (5), e219, doi:10.3791/219 (2007).

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