Il LookOut Mycoplasma Detection Kit PCR sfrutta la reazione a catena della polimerasi (PCR), che è stabilito come metodo di scelta per la massima sensibilità nella rilevazione di contaminazione Mycoplasma, Acholeplasma e Ureaplasma in colture cellulari e di colture cellulari di altri derivati biologici.
Il mantenimento di contaminazione senza linee di cellule è indispensabile per cellulari basati su ricerche. Tra le maggiori preoccupazioni dei contaminanti sono la contaminazione da micoplasma. Anche se micoplasma di solito non uccidono le cellule contaminate, sono difficili da rilevare e possono causare una serie di effetti sulle cellule in coltura, tra cui alterato metabolismo, rallentato proliferazione e aberrazioni cromosomiche. In breve, la contaminazione da micoplasma compromette il valore di tali linee cellulari nel fornire dati accurati per la ricerca delle scienze della vita.
Le fonti di contaminazione da micoplasma in laboratorio sono molto difficili da controllare completamente. Come alcune specie di micoplasmi sono presenti sulla cute umana, possono essere introdotte attraverso povero tecnica asettica. Inoltre, possono venire dagli integratori contaminati come siero fetale bovino e, soprattutto, dalle altre colture di cellule contaminate. Una volta micoplasma contamina una cultura, può rapidamente diffondersi di contaminare altre aree del laboratorio. Rispetto rigoroso di buone pratiche di laboratorio, come buona tecnica asettica sono fondamentali, e di routine per il micoplasma è altamente consigliato per un controllo adeguato della contaminazione da micoplasma.
Basati sulla PCR rilevazione di micoplasmi è diventato un metodo molto popolare per la manutenzione ordinaria linea cellulare. Basati sulla PCR metodi di rilevamento sono altamente sensibili e in grado di fornire risultati rapidi, che permette ai ricercatori di rispondere rapidamente ad isolare ed eliminare la contaminazione una volta che viene rilevato in confronto al tempo necessario utilizzando tecniche microbiologiche. Il LookOut Mycoplasma Detection Kit PCR è molto sensibile, con un limite di rilevazione di soli 2 genomi per microlitri. Approfittando della DNA polimerasi altamente specifici JumpStart Taq e un design fondo di proprietà, i falsi positivi sono notevolmente ridotte. Il comodo formato 8-tubo, strisce pre-rivestiti con dNTPs e primers associati aiuta ad aumentare la produttività per soddisfare le esigenze dei clienti con i più grandi collezioni di linee cellulari.
Data l'estrema sensibilità del kit, grande cura deve essere presa per evitare la contaminazione accidentale di campioni e reagenti. Il passo-passo protocollo dimostriamo mette in evidenza le precauzioni e le pratiche necessarie per il rilevamento affidabile micoplasma. Abbiamo anche mostrare e discutere i risultati tipici e la loro interpretazione. Il nostro obiettivo è quello di garantire il successo di ricercatori che utilizzano il LookOut Mycoplasma Detection Kit PCR.
A causa della estrema sensibilità del kit, se eseguita correttamente il kit devono fornire risultati precisi che indicano se il campione è la contaminazione da micoplasma. Il kit è stato ottimizzato per l'utilizzo con JumpStart Taq DNA polimerasi. Taqs altri possono essere utilizzati nella preparazione dei campioni, ma la banda di controllo interno a 481 bp dovrebbe essere presente per indicare la sensibilità corretta l'alternativa Taq. E 'possibile per le bande positivo ad esporre densità diverse a seconda del livello di contaminazione. E 'possibile osservare l'assenza della banda di controllo interno su campioni fortemente contaminati. Usando cautela e tecnica adeguata per la preparazione dei campioni per evitare la contaminazione sono cruciali per il corretto. quando si utilizza il rilevamento LookOut Mycoplasma Detection Kit PCR.
The authors have nothing to disclose.
Finanziato dalla Sigma-Aldrich
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
---|---|---|---|
LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit | Sigma-Aldrich | MP0035 | |
JumpStart Taq DNA Polymerase | Sigma-Aldrich | D9307 | |
GenElute Blood Genomic DNA kit | Sigma-Aldrich | MP0030 | |
Nunc amplification tubes | Sigma-Aldrich | T0447 |