Jakt Mycoplasma PCR Detection Kit utnyttjar polymeraskedjereaktion (PCR), som är etablerat som metod i valet för högsta känslighet för att upptäcka Mycoplasma, Acholeplasma och ureaplasma föroreningar i cellkulturer och andra cellodling härrör biologiska läkemedel.
Underhållet av smitta utan cellinjer är avgörande för cell-baserad forskning. Bland de största främmande oro är mykoplasma kontamination. Även om mykoplasma brukar inte dödar förorenade celler, de är svåra att upptäcka och kan orsaka en rad effekter på odlade celler, inklusive förändrad metabolism, saktade spridning och kromosomavvikelser. Kort sagt, kompromisser mykoplasma föroreningar värdet av dessa cellinjer för att ge tillförlitliga uppgifter för biovetenskaplig forskning.
Källorna av mykoplasma föroreningar i laboratoriet är väldigt utmanande att helt styra. Eftersom vissa mykoplasma arter finns på mänsklig hud, de kan införas genom dålig aseptisk teknik. Dessutom kan de komma från förorenade kosttillskott såsom fetalt bovinserum, och viktigast av andra förorenade cellkulturer. När mykoplasma förorenar en kultur, kan det spridas snabbt kan infektera andra delar av labbet. Strikt efterlevnad av god laboratoriesed såsom god aseptisk teknik är viktiga, och rutinprovning för mykoplasma rekommenderas starkt för framgångsrik kontroll av mykoplasma kontamination.
PCR-baserad detektion av mykoplasma har blivit en mycket populär metod för rutinmässigt cellinje underhåll. PCR-baserade metoder för upptäckt är mycket känsliga och kan ge snabba resultat, vilket ger forskare möjlighet att reagera snabbt att isolera och eliminera förorening när den upptäcks i jämförelse med den tid som krävs med hjälp av mikrobiologiska tekniker. Jakt Mycoplasma PCR Detection Kit är mycket känslig, med en detektionsgräns på endast 2 genomet per mikroliter. Med utnyttjande av de mycket speciella JumpStart Taq DNA-polymeras och en egen primer design, är falsklarm minskas kraftigt. Den bekväma 8-tube-formatet, hjälper band pre-belagda med dNTPs och tillhörande primer öka genomströmningen för att möta behoven hos kunder med större samlingar av cellinjer.
Med tanke på den extrema känslighet kit, måste stor försiktighet vidtas för att förhindra oavsiktlig kontaminering av prover och reagenser. Steg-för-steg-protokollet vi visar belyser försiktighetsåtgärder och praxis krävs för en tillförlitlig mykoplasma upptäckt. Vi visar också och diskuterar typiska resultat och deras tolkning. Vårt mål är att säkerställa framgång för forskare som använder LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit.
På grund av den extrema känslighet kit, när det utförs korrekt kitet ska ge exakta resultat som visar om ditt prov har mykoplasma kontamination. Satsen har optimerats för användning med JumpStart Taq DNA-polymeras. Andra taqs kan användas vid upprättandet av prover, men den interna kontrollen bandet på 481 bp bör vara närvarande och anger korrekt känslighet alternativa Taq. Det är möjligt för den positiva banden att ställa ut olika densiteter beroende på graden av förorening. Det är möjligt att observera avsaknaden av den interna kontrollen bandet på kraftigt förorenade prover. Använda försiktighet och god teknik vid beredning av de prover för att förhindra kontaminering är avgörande för korrekt. upptäckt när man använder LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit.
The authors have nothing to disclose.
Finansieras av Sigma-Aldrich
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
---|---|---|---|
LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit | Sigma-Aldrich | MP0035 | |
JumpStart Taq DNA Polymerase | Sigma-Aldrich | D9307 | |
GenElute Blood Genomic DNA kit | Sigma-Aldrich | MP0030 | |
Nunc amplification tubes | Sigma-Aldrich | T0447 |