Le kit de détection par PCR LookOut Mycoplasma utilise la réaction en chaîne polymérase (PCR), qui est établi que la méthode de choix pour plus de sensibilité dans la détection de la contamination par Mycoplasma, Acholeplasma et Ureaplasma dans des cultures cellulaires et de culture de cellules dérivées d'autres produits biologiques.
L'entretien de lignées de cellules sans contamination est essentiel à la cellule de base de la recherche. Parmi les préoccupations les plus importantes de contaminants sont contamination par des mycoplasmes. Bien que les mycoplasmes ne sont généralement pas tuer les cellules contaminées, elles sont difficiles à détecter et peuvent causer une variété d'effets sur les cellules cultivées, y compris le métabolisme modifié, a ralenti la prolifération et des aberrations chromosomiques. En bref, contamination par des mycoplasmes compromet la valeur de ces lignées cellulaires en fournissant des données précises pour la recherche en sciences de vie.
Les sources de contamination par des mycoplasmes dans le laboratoire sont très difficiles à contrôler complètement. Comme certaines espèces de mycoplasmes sont trouvés sur la peau humaine, ils peuvent être introduits par une technique aseptique pauvres. En outre, ils peuvent provenir de compléments contaminés tels que le sérum de veau foetal, et surtout à partir d'autres cultures de cellules contaminées. Une fois que les mycoplasmes contamine une culture, il peut se propager rapidement à contaminer d'autres régions du laboratoire. Le strict respect bonnes pratiques de laboratoire telles que de bonnes techniques d'asepsie sont la clé, et les tests de routine pour le mycoplasme est fortement recommandé pour le contrôle réussie de contamination par des mycoplasmes.
Basées sur la PCR de détection des mycoplasmes est devenue une méthode très populaire pour l'entretien de lignée cellulaire de routine. Méthodes de détection basées sur la PCR sont très sensibles et peuvent fournir des résultats rapides, ce qui permet aux chercheurs de répondre rapidement à isoler et à éliminer la contamination une fois qu'il est détecté par rapport à la durée nécessaire en utilisant des techniques microbiologiques. Le kit de détection par PCR LookOut Mycoplasma est très sensible, avec une limite de détection de seulement 2 génomes par ul. Profitant de la polymérase très spécifiques JumpStart Taq ADN et une conception d'amorce de propriété, les faux positifs sont considérablement réduits. La pratique de 8 tubes de format, des bandes pré-enduites de dNTP et amorces associé contribue à augmenter le débit pour répondre aux besoins des clients avec de plus grandes collections de lignées cellulaires.
Compte tenu de l'extrême sensibilité de la trousse, le plus grand soin doit être pris pour prévenir la contamination accidentelle des échantillons et des réactifs. Le protocole étape par étape, nous démontrons souligne les précautions et les pratiques nécessaires pour la détection de mycoplasmes fiable. Nous montrons aussi et discuter des résultats typiques et leur interprétation. Notre objectif est d'assurer la réussite des chercheurs utilisant le kit de détection de Mycoplasma LookOut PCR.
En raison de l'extrême sensibilité de la trousse, lorsqu'il est effectué correctement le kit devrait donner des résultats précis indiquant si oui ou non votre échantillon a contamination par des mycoplasmes. Le kit a été optimisé pour une utilisation avec la polymérase Taq ADN JumpStart. Taqs autres peuvent être utilisés lors de la préparation des échantillons, mais la bande de contrôle interne à 481 pb devrait être présent pour indiquer la sensibilité propre de l'alternative Taq. Il est possible pour les bandes positives pour exposer différentes densités en fonction du niveau de contamination. Il est possible d'observer l'absence de la bande de contrôle interne sur des échantillons fortement contaminés. En utilisant la prudence et la bonne technique pour préparer les échantillons pour prévenir la contamination sont cruciales pour bon. de détection en utilisant le kit de détection de Mycoplasma LookOut PCR.
The authors have nothing to disclose.
Financé par Sigma-Aldrich
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
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LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit | Sigma-Aldrich | MP0035 | |
JumpStart Taq DNA Polymerase | Sigma-Aldrich | D9307 | |
GenElute Blood Genomic DNA kit | Sigma-Aldrich | MP0030 | |
Nunc amplification tubes | Sigma-Aldrich | T0447 |