O LookOut Mycoplasma Kit de Detecção de PCR utiliza a reação em cadeia da polimerase (PCR), que é estabelecido como o método de escolha para maior sensibilidade na detecção de contaminação por Mycoplasma, Acholeplasma e Ureaplasma em culturas de células e cultura de células derivadas outros produtos biológicos.
A manutenção de linhas livres de contaminação de células é essencial para a célula-base da pesquisa. Entre as maiores preocupações são a contaminação por micoplasma contaminante. Apesar de micoplasma geralmente não matar células contaminadas, elas são difíceis de detectar e pode causar uma variedade de efeitos sobre as células cultivadas, incluindo o metabolismo alterado, diminuiu a proliferação e aberrações cromossômicas. Em suma, a contaminação por micoplasma compromete o valor dessas linhas celulares em fornecer dados precisos para pesquisa de ciências biológicas.
As fontes de contaminação por micoplasma em laboratório são muito difíceis de controlar completamente. Como certas espécies de micoplasmas são encontradas na pele humana, eles podem ser introduzidas através de uma técnica asséptica pobres. Além disso, eles podem vir de suplementos contaminados, tais como soro fetal bovino, e mais importante de outras culturas de células contaminadas. Uma vez por micoplasma contamina uma cultura, ela pode se espalhar rapidamente para contaminar outras áreas do laboratório. Estrita adesão às práticas de laboratório, tais como a boa técnica asséptica são a chave, e testes de rotina para micoplasma é altamente recomendado para o sucesso do controle de contaminação por micoplasma.
PCR baseada em detecção de micoplasma tornou-se um método muito popular para manutenção de rotina de linha celular. Métodos baseados em PCR de detecção são muito sensíveis e pode fornecer resultados rápidos, o que permite aos pesquisadores responder rapidamente para isolar e eliminar a contaminação, uma vez que é detectada em comparação com o tempo necessário utilizando técnicas microbiológicas. O LookOut Mycoplasma Kit de Detecção de PCR é altamente sensível, com um limite de detecção de apenas 2 genomas por microlitro. Aproveitando-se da Polimerase DNA altamente específicas JumpStart Taq e um desenho de primers proprietário, falsos positivos são muito reduzidas. O formato de 8-tubo conveniente, tiras pré-revestida com dNTPs, primers e associado ajuda a aumentar o rendimento para satisfazer as necessidades dos clientes com maiores coleções de linhagens celulares.
Dada a extrema sensibilidade do kit, muito cuidado deve ser tomado para evitar a contaminação acidental das amostras e reagentes. O protocolo passo a passo, demonstramos destaca as precauções e práticas necessárias para a detecção de micoplasma confiável. Nós também mostrar e discutir os resultados típicos e sua interpretação. Nosso objetivo é garantir o sucesso de pesquisadores utilizando o Kit de Detecção de Mycoplasma LookOut PCR.
Devido à extrema sensibilidade do kit, quando realizada corretamente o kit devem produzir resultados precisos indicando se ou não a sua amostra tem contaminação por micoplasma. O kit foi otimizado para uso com JumpStart Taq DNA polimerase. Taqs outros podem ser usados quando preparar as amostras, mas a banda de controlo interno a 481 bp deve estar presente para indicar a sensibilidade adequada do taq alternativa. É possível para as bandas positivas para expor várias densidades, dependendo do nível de contaminação. É possível observar a ausência da banda de controlo interno em amostras contaminadas. Usando cautela e boa técnica ao preparar as amostras para evitar a contaminação são cruciais para a adequada. detecção ao usar o Kit de Detecção de Mycoplasma LookOut PCR.
The authors have nothing to disclose.
Financiado pela Sigma-Aldrich
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
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LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit | Sigma-Aldrich | MP0035 | |
JumpStart Taq DNA Polymerase | Sigma-Aldrich | D9307 | |
GenElute Blood Genomic DNA kit | Sigma-Aldrich | MP0030 | |
Nunc amplification tubes | Sigma-Aldrich | T0447 |