El kit de detección de Mycoplasma LookOut PCR utiliza la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), que se ha establecido como el método de elección para la mayor sensibilidad en la detección de contaminación por Mycoplasma, Acholeplasma y Ureaplasma en cultivos celulares y cultivo celular otros derivados biológicos.
El mantenimiento de líneas celulares libres de contaminación es esencial para la investigación celular. Entre las mayores preocupaciones de los contaminantes son la contaminación por micoplasma. A pesar de micoplasma no suelen matar a las células contaminadas, son difíciles de detectar y pueden causar una variedad de efectos sobre las células cultivadas, incluyendo la alteración del metabolismo, se redujo la proliferación y aberraciones cromosómicas. En resumen, la contaminación por micoplasma compromete el valor de las líneas celulares de proporcionar información rigurosa para la investigación en ciencias biológicas.
Las fuentes de contaminación por micoplasma en el laboratorio son muy difíciles de controlar por completo. Como ciertas especies de micoplasmas se encuentran en la piel humana, pueden ser introducidos a través de una técnica aséptica pobres. Además, pueden provenir de los suplementos contaminados, tales como el suero bovino fetal, y lo más importante de otros cultivos de células contaminadas. Una vez micoplasmas contaminantes de una cultura, que pueden propagarse rápidamente a contaminar otras áreas del laboratorio. Estricto cumplimiento de buenas prácticas de laboratorio, tales como una buena técnica aséptica son fundamentales, y las pruebas de rutina para micoplasma es muy recomendable para el éxito del control de la contaminación por micoplasma.
PCR basado en la detección de micoplasma se ha convertido en un método muy popular para el mantenimiento rutinario línea celular. Métodos basados en PCR de detección son muy sensibles y pueden dar resultados rápidos, lo que permite a los investigadores para responder rápidamente a aislar y eliminar la contaminación una vez que se detecta en comparación con el tiempo necesario utilizar las técnicas microbiológicas. El kit de detección de Mycoplasma LookOut PCR es muy sensible, con un límite de detección de sólo dos genomas por microlitro. Tomando ventaja de la polimerasa de ADN altamente específicas JumpStart Taq y un primer diseño patentado, los falsos positivos se reducen considerablemente. El práctico formato de 8 tubos, tiras pre-recubiertos con dNTPs, primers y asociados ayuda a aumentar el rendimiento para satisfacer las necesidades de los clientes con grandes colecciones de líneas celulares.
Dada la extrema sensibilidad del kit, el gran cuidado se debe tomar para prevenir la contaminación accidental de las muestras y reactivos. El protocolo de paso a paso se demuestra destaca las precauciones y prácticas necesarias para la detección de micoplasma fiable. También mostrar y discutir los resultados típicos y su interpretación. Nuestro objetivo es asegurar el éxito de los investigadores que utilizan el kit de detección de Mycoplasma LookOut PCR.
Debido a la extrema sensibilidad de los kit, cuando se realiza correctamente el equipo debe dar resultados precisos que indica si la muestra tiene la contaminación por micoplasma. El kit ha sido optimizado para su uso con la polimerasa de ADN Taq JumpStart. Taqs se pueden usar otros en la preparación de las muestras, pero la banda de control interno en 481 pb, deben estar presentes para indicar la sensibilidad de la alternativa correcta taq. Es posible que las bandas positivas para exponer diferentes densidades en función del nivel de contaminación. Es posible observar la ausencia de la banda de control interno en muestras muy contaminadas. Precaución y utilizando la técnica adecuada en la preparación de las muestras para evitar la contaminación son fundamentales para la correcta. detección cuando se utiliza el kit de detección de Mycoplasma LookOut PCR.
The authors have nothing to disclose.
Financiado por Sigma-Aldrich
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
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LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit | Sigma-Aldrich | MP0035 | |
JumpStart Taq DNA Polymerase | Sigma-Aldrich | D9307 | |
GenElute Blood Genomic DNA kit | Sigma-Aldrich | MP0030 | |
Nunc amplification tubes | Sigma-Aldrich | T0447 |