自我管理的方法,以确定在老鼠的大脑中乙醇浓度的时间过程,在操作性乙醇。用火焰离子化检测器的气相色谱分析是用来量化乙醇的透析样品中,因为它具有所需的所生成的小卷的灵敏度。
操作性自我管理常用的方法有许多药物的滥用,包括乙醇的行为和药理作用的研究。然而,乙醇是典型的自我,而不是像许多其他药物的滥用静脉注射口服。口服药物的药代动力学静脉注射的药物要复杂得多。由于理解的药理和乙醇中的行为的影响之间的关系,需要知识乙醇到达大脑期间和饮酒后的时间过程中,我们在体内微透析和气相色谱法中使用,用氢火焰离子化检测监测脑透析液中的乙醇浓度随着时间的推移。
结合微透析行为实验涉及使用多种技术。在本文中,立体定位手术,行为训练和微透析,可适于测试大量的自我管理和神经包括rochemical中心的假设,只是为了说明他们是如何涉及到的样品采集和分析透析液中乙醇的后续阶段。透析液乙醇浓度通过气相色谱法分析,用火焰离子化检测器,这是特定的乙醇研究,进行详细说明。通过这些方法生产的数据揭示了图案乙醇期间自我管理程序到达大脑,神经化学相同的透析液样品的分析配对时,允许关于药理和乙醇中的行为的影响作出结论。
应用程序和限制
在啮齿类动物模型药物成瘾的药物自我管理。许多药物的滥用,以这种方式建模,可静脉给药,其中的药物被直接传送到车厢中部。这允许剂量的自我管理会话进行密切监测。由于乙醇通常是口服自我的管理,它是更难监测血药浓度,由于吸收和代谢的个体差异。通过使用微透析样品的大脑区域的利益,我们不仅能够监控模式到达该地区的乙醇,但我们还可以在同一区域同时监测神经递质的变化随着时间的推移,在每一个自我管理阶段。
大脑中的神经化学改变及药物引起的反应与药物滥用和依赖,因此,能够同时测量确保神经化学和药物浓度在特定的自我管理阶段提供了一个非常强大而独特的工具。记住相关的透析液浓度被测物的行为是一个问题的微透析管道的物理特性。具体而言,所花费的时间从微透析探针的内腔的流体被转移到收集管中是至关重要的,和更短的时间是更好的。在我们的实验室中,我们构建了探头,这样的时间是90秒左右的。使用这些条件下,我们已经发现在起始的乙醇消耗,饮料和饮料后的期间,作为透析液的乙醇浓度的增加而降低的过程,有一个增加accumbal多巴胺。2,3,8,9这些实验,当与药理学研究中的数据相结合,使我们能够解析出严格的药理作用乙醇和自我管理相关的环境因素通道法兰神经递质的浓度。
应该指出的是,这个特殊的联合行为的微透析技术的应用是适合我们的实验室目前的研究兴趣。它的目的是评估的时空格局乙醇,达到大脑中的神经递质的变化在同一区域的模式相比,这样我们就可以同步的自我管理行为与这些措施。派生的透析液中的乙醇浓度在体内探针恢复不纠正,只有一小部分的大脑乙醇的组织浓度。如果需要定量微量渗析乙醇,乙醇提取馏分,探头从细胞外空间分成扩散应通过实验确定。从我们的实验室方法,并进一步讨论,请参阅以前的出版物。10,11,12
虽然这个协议说明了如何使用的气体通道romatography随着固相微萃取乙醇从微透析样品的顶空,可以使用其他的方法进行分析的微透析样品的乙醇含量。然而,替代方法可能会遭受一些缺点。较不敏感的分析方法,例如,可能需要更大的采样次数大于在这里示出的5-7分钟的样品体积,有必要。这里讨论的系统的类型使用固相微萃取,浓缩乙醇在汽相中在密封的样品瓶中,通过使吸收的纤维放置在小瓶中的顶空。这提高了检测限相比,它通常允许50-100微升的蒸气注入直接顶空取样。顶空法的另一个主要优点是,用于分析的样品注入是非常干净,无盐。也可使用具有较高SENSIT液体微透析样品直接注射的ivity,但是这将需要更多的仪器停机时间,由于要经常进行保养清洁的注射盐。
故障排除和其他注意事项
The authors have nothing to disclose.
这项研究是由美国国立卫生研究院/ NIAAA(AA11852和AA007471)的补助金。
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
95% Ethanol | AAPER Alcohol and Chemical Co., Shelbyville, KY | E190, 111000190 |
Ultra-Pure Sucrose | MP Biomedicals, LLC, Solon, OH | 821721 |
Ultra High Purity Helium | Air Gas | HE UHP300 |
Air | Air Gas | AIZ300 |
Hydrogen | Air Gas | AIZ300 |
GC 2 ml vials | Agilent | #8010-0015 |
GC vial caps with PTFE/silicone septa | Agilent | #8010-0084 |
Table 1. Specific reagents