Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

جيل من صنع الإنسان من الخلايا الجذعية المحفزة الدموية المحيطية باستخدام Lentiviral STEMCCA المتجهات

Published: October 31, 2012 doi: 10.3791/4327
Automatic Translation
1, 1, 2, 3, 1, 1, 1, 3, 1, 3, 1, 1
1Center for Regenerative Medicine (CReM), Boston University School of Medicine, 2Department of Hematology, Children's Hospital of Philadelphia, 3Center for Cellular and Molecular Therapeutics, Children's Hospital of Philadelphia

Summary

هنا نعرض بروتوكول بسيطة وفعالة لتوليد iPSCs الإنسان من مل 3-4 من الدم المحيطي واحد باستخدام ناقلات lentiviral إعادة برمجة. إعادة برمجة خلايا الدم متاحة بسهولة وعود لتسريع استخدام تكنولوجيا التوجيهية من خلال جعلها في متناول مجتمع بحثي واسع النطاق.

Abstract

من خلال التعبير خارج الرحم من عوامل النسخ الأربعة، Oct4، Klf4، وSox2 cMyc، يمكن تحويل الخلايا الجسدية الإنسان إلى حالة المحفزة، وتوليد ما يسمى الخلايا الجذعية المحفزة التي يسببها (iPSCs) 1-4. المريض محددة iPSCs تفتقر إلى المخاوف الأخلاقية التي تحيط الخلايا الجذعية الجنينية (المجالس الاقتصادية والاجتماعية)، وسوف تجاوز الرفض المناعي ممكن. وهكذا، وقد اجتذبت اهتماما كبيرا لiPSCs دراسات النمذجة المرض، وفحص المركبات الدوائية، والعلاج التجديدي 5.

لقد أظهرنا توليد التحوير خالية iPSCs الإنسان من المرضى الذين يعانون من أمراض الرئة المختلفة باستخدام واحد excisable الجذعية lentiviral متعدد المقارين راديو كاسيت الخليوي (STEMCCA) ترميز العوامل ياماناكا 6. وقد تم توليد هذه الخطوط التوجيهية من الخلايا الليفية الجلد، ونوع من الخلايا الأكثر شيوعا التي تستخدم لإعادة البرمجة. عادة، والحصول على الخلايا الليفية الجلد يتطلب كمة خزعة تليها التوسع في الخليةق في الثقافة لبضع فقرات و. الأهم من ذلك، فقد أفاد عدد من المجموعات إعادة برمجة خلايا الدم المحيطي في iPSCs 7-9. في دراسة واحدة، كان يعمل على إصدار محرض تيت من ناقلات STEMCCA 9، الأمر الذي يتطلب أن تكون خلايا الدم المصابة في وقت واحد مع الفيروسة البطيئة بالموقع جوهري ترميز العكس التتراسيكلين transactivator. وعلى النقيض من الخلايا الليفية، يمكن جمعها عن طريق الخلايا الدموية المحيطية والإجراءات مينيملي، والحد بشكل كبير من الانزعاج والضيق للمريض. ويجوز للبروتوكول بسيطة وفعالة لإعادة برمجة خلايا الدم باستخدام ناقلات التأسيسي excisable واحدة الإسراع في تطبيق التكنولوجيا التوجيهية من خلال جعلها في متناول مجتمع بحثي واسع النطاق. وعلاوة على ذلك، إعادة برمجة الخلايا الدموية المحيطية ويسمح لتوليد iPSCs من الأفراد التي ينبغي تجنبها خزعات الجلد (أي. الشاذة تندب) أو بسبب ظروف المرض موجود مسبقا preventiنانوغرام الحصول على الخزعات لكمة.

هنا علينا أن نبرهن على بروتوكول لتوليد iPSCs الإنسان من الخلايا الدموية المحيطية وحيدات النوى (PBMCs) باستخدام واحد floxed-excisable ناقلات lentiviral معربا عن العوامل جوهري 4. يتم توسيع PBMCs جمعها طازجة أو إذابة لمدة 9 أيام كما هو موضح في المتوسط ​​10،11 المحتوية على حمض الاسكوربيك، SCF، IGF-1، IL-3 و EPO قبل transduced مع الفيروسة البطيئة STEMCCA. ومطلي الخلايا ثم على MEFs وESC مثل المستعمرات يمكن تصور أسبوعين بعد الإصابة. وأخيرا، يتم توسيع استنساخ مختارة واختبار للتعبير عن علامات تعدد القدرات SSEA-4، ترا-1-60 و ترا-1 81. هذا البروتوكول بسيطة وقوية ومتسقة للغاية، وتوفير منهجية موثوقة لتوليد iPSCs الإنسان من الوصول إليها بسهولة ML 4 من الدم.

Protocol

1. العزلة والتوسع في خلايا الدم المحيطية وحيدات النوى (PBMCs)

اليوم 0

  1. رسم 4 مل من الدم المحيطي في أنبوب BD CPT Vacutainer إعداد الخليوي مع سترات الصوديوم. قلب الأنبوب 8 إلى 10 مرات وأجهزة الطرد المركزي عند 1،800 x ج لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. من الناحية المثالية، ينبغي أن يتم هذه الخطوة ضمن 2 ساعة من جمعها.
  2. جمع الخلايا وحيدات النوى (MCS) من قبل pipetting معطف الشهباء (طبقة الخلايا حاجز بين جل والبلازما) إلى أنبوب العقيمة 15 مل المخروطية الطرد المركزي. تحقيق إجمالي حجم 10 مل مع لالفوسفات مخزنة المالحة عقيمة (PBS)، عكس عدة مرات وأجهزة الطرد المركزي في 300 x ج لمدة 15 دقيقة.
  3. إعادة تعليق الخلايا في 10 مل من برنامج تلفزيوني العقيمة وتنفيذ عدد خلايا. نقل 2X10 1 إلى 6 خلايا في أنبوب 15 مل العقيمة الطرد المركزي وأجهزة الطرد المركزي المخروطية في 300 x ج لمدة 10 دقيقة.
  4. إعادة تعليق الخلايا في 2 مل من التوسع المتوسطة (EM) (QBSF-60 متوسطة الخلايا الجذعية التي تحتوي على 50 ميكروغرام / مل أسكوحمض rbic، 50 نانوغرام / مل SCF، 10 نانوغرام / مل IL-3، 2 U / مل EPO، 40 نانوغرام / مل IGF-1، 1 ميكرومتر و 100 ديكساميتازون ميكروغرام / مل أو 1٪ primocin القلم / بكتيريا) ونقلها إلى بئر واحد من لوحة 12-أيضا. احتضان الخلايا في C ° 37، 5٪ CO 2 الحاضنة.
  5. أجهزة الطرد المركزي في الخلايا المتبقية 300 × ز لمدة 10 دقيقة وتجميد ~ 2X10 6 خلايا / قارورة تحتوي على FBS DMSO في 10٪.
  6. لبدء باستخدام بروتوكول PBMCs المجمدة، ذوبان الجليد 1 فيال من الخلايا في 10 مل من المتوسط ​​QBSF وأجهزة الطرد المركزي في 300 x ج لمدة 10 دقيقة. إعادة تعليق الخلايا في 2 مل من EM ونقل إلى إحدى جيدا لوحة 12-أيضا. احتضان الخلايا في C ° 37، 5٪ CO 2 الحاضنة.

DAY 3 و DAY 6

  1. نقل الخلايا إلى أنبوب 15 مل المخروطية العقيمة ويغسل مرة واحدة مع البئر 1 مل من QBSF-60 خلية الجذعية متوسطة لجمع الخلايا الملتصقة.
  2. أجهزة الطرد المركزي الخلايا في 300 x ج لمدة 10 دقيقة.
  3. إعادة تعليق الخلايا في 2 مل من EM ونقل إلى إحدى جيدا لمدة 12جيدا لوحة. احتضان الخلايا في C ° 37، 5٪ CO 2 الحاضنة.

2. تنبيغ من PBMCs مع الفيروسة البطيئة STEMCCA

يوم 9

  1. نقل الخلايا إلى أنبوب 15 مل المخروطية العقيمة ويغسل مرة واحدة مع البئر 1 مل من QBSF-60 خلية الجذعية متوسطة لجمع الخلايا الملتصقة.
  2. أجهزة الطرد المركزي الخلايا في 300 x ج لمدة 10 دقيقة.
  3. إعادة تعليق الخلايا في 1 مل من EM الطازجة تحتوي على 5 ميكروغرام / مل من polybrene والفيروسة البطيئة STEMCCA (MOI = 1 إلى 10) ونقل إلى إحدى جيدا لوحة 12-أيضا. (يمكن الاطلاع على وصف بروتوكول انتاج جسيمات lentiviral في http://www.bumc.bu.edu/stemcells/protocols/ )
  4. تدور في لوحة 2250 دورة في الدقيقة في C ° 25 لمدة 90 دقيقة.
  5. بعد زيادة ونقصان، إضافة إضافية 1 مل من EM جديدة تحتوي على 5 ميكروغرام / مل من polybrene لما مجموعه 2 مل من المتوسط ​​واحتضان لوحة في C ° 37،5٪ CO 2 الحاضنة.

يوم 10

  1. نقل الخلايا إلى أنبوب 15 مل المخروطية العقيمة ويغسل مرة واحدة مع البئر 1 مل من QBSF-60 خلية الجذعية متوسطة لجمع الخلايا الملتصقة.
  2. أجهزة الطرد المركزي الخلايا في 300 x ج لمدة 10 دقيقة.
  3. إعادة تعليق الخلايا في 2 مل من EM ونقل إلى 1 من لوحة جيدا 12-أيضا. احتضان الخلايا في C ° 37، 5٪ CO 2 الحاضنة.

3. Transduced الطلاء على خلايا MEFs

اليوم 11

  1. معطف من الآبار لوحة 6 جيدا مع الجيلاتين 0.1٪ والخلايا الليفية الماوس لوحة المعطل الجنينية (MEFs) في الخلايا 5 2X10 / بشكل جيد في المتوسط ​​MEF (IMDM تحتوي على 10٪ FBS، 1٪ غير الأحماض الأمينية الأساسية، و 100 ميكرومتر β- المركابتويثانول، 2 مم L-الجلوتامين، 100 ميكروغرام / مل primocin أو 1٪ القلم / بكتيريا). 3 آبار في إعداد العدوى.

اليوم 12

  1. نقل الخلايا إلى أنبوب 15 مل المخروطية العقيمة ويغسل مرة واحدة مع البئر 1 مل من QBSF-60 خلية الجذعية متوسطة لجمع الخلايا الملتصقة.
  2. إعادة تعليق الخلايا في 3 مل من المتوسط ​​MEF تحتوي على 10 نانوغرام / مل bFGF، وحمض الاسكوربيك وعوامل النمو في تركيزات نفس المستخدمة في EM المتوسطة (50 حمض الاسكوربيك ميكروغرام / مل، 50 نانوغرام / مل SCF، 10 نانوغرام / مل IL -3، 2 U / مل EPO، 40 نانوغرام / مل IGF-1، 1 ميكرومتر ديكساميتازون).
  3. لوحة 1 مل من الخلايا لكل بئر من لوحة 6 جيدا تحتوي على MEFs. إضافة 1.5 مل من وسائل الإعلام MEF مع bFGF، حمض الأسكوربيك، وعوامل النمو ليصبح المجموع 2.5 مل من وسائل الإعلام / أيضا.
  4. تدور لوحة في 500 دورة في الدقيقة عند 25 لمدة 30 دقيقة C °. احتضان لوحة في 37 ° C، 5٪ CO 2 حاضنة.

اليوم 14

  1. الخلايا تغذية كل يوم مع 2.5 مل من وسائل الإعلام MEF تحتوي على 10 نانوغرام / مل و 50 bFGF حمض الأسكوربيك ميكروغرام / مل (أي عوامل النمو). وتجاهل الخلايا نضح العائمة مع كل رضعة.
  2. إضافة MEFs إضافية حسب الحاجة (عادة مرة واحدة في الأسبوع).
ع "> يوم 20 ~

  1. مرة واحدة مستعمرات صغيرة تظهر، وخلايا تغذية يومية مع 2 مل من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESC) متوسطة (DMEM/F12 تحتوي على استبدال 20٪ مصل خروج المغلوب، 1٪ غير الأحماض الأمينية الأساسية، و 100 ميكرومتر β-المركابتويثانول، 2 مم L-الجلوتامين ، 100 ميكروغرام / مل primocin أو 1٪ القلم / بكتيريا و 10 نانوغرام / مل bFGF).

4. قطف والتوسع في النسخ اللجنة التوجيهية

~ DAY 30 حتي 40

  1. اختيار كل مستعمرة في الآبار الفردية من لوحة 12-جيدا مسبقا مع المصنف MEFs المعطل يحتوي على 1 مل / بئر المتوسطة بالإضافة إلى 10 ميكرومتر hESC من Stemolecule Y27632 (ROCK المانع).
  2. تغذية الخلايا بعد ذلك يوميا مع 1 مل من المتوسط ​​hESC فقط (لا مانع ROCK).

5. تلوين المناعي للعلامات تعدد القدرات

  1. تم إجراء تلطيخ استخدام عدة "خلية ES ماركر كيت عينة" من ميليبور وبعد بروتوكول الشركة المصنعة.

6. استئصال INTEGتصنيف STEMCCA المتجهات

  1. ويتحقق استئصال إعادة برمجة كاسيت الاستفادة من لجنة المساواة العرقية، IRES-بورو ترنسفكأيشن ناقلات معربا عن بعد وجيزة اختيار بوروميسين كما هو موضح 6.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

علينا أن نبرهن على بروتوكول بسيطة وفعالة لتوليد iPSCs الإنسان من PBMCs باستخدام ناقلات lentiviral واحد. الشكل 1A يظهر التمثيل التخطيطي للبروتوكول. يتم جمع الدم في أنبوب BD CPT Vacutainer إعداد الخليوي مع سترات الصوديوم، وبعد الطرد المركزي، ويمكن جمع النوى من الخلايا واجهة بين هلام البوليستر والبلازما (الغلالة الشهباء) (1B الشكل). يتم توسيع ثم PBMCs المعزولة في الثقافة لمدة 9 أيام. الشكل 2 يقارن PBMCs في اليوم 0 ويوم 9، والتي تبين أن الخلايا يتم تقسيم ملحوظ. حوالي 10-15 يوما بعد تنبيغ مع الفيروسة البطيئة STEMCCA، ويلاحظ ظهور مستعمرات صغيرة مشرقة، مع مورفولوجيا مستعمرة غير معروف حتى الآن. بعد إضافة hESC المتوسطة، يمكن hESC مثل المستعمرات يكون التعرف عليها بسهولة (الشكل 2D). يتم انتقاؤها ميكانيكيا بعض هذه المستعمرات، وسعت، وتميزتللتعبير عن علامات تعدد القدرات مثل SSEA-4، ترا-1 60 وترا-1 81 (الشكل 3). باستخدام مجموعة بوروميسين موجز النهج 6، ونحن قادرون على الحصول على التحوير على الدوام خالية من الحيوانات المستنسخة اللجنة التوجيهية كما هو مبين في الشكل 4.

الشكل 1
الشكل 1. جيل من iPSCs الإنسان من الدم المحيطي. A) تمثيل تخطيطي للبروتوكول يستخدم لتوليد iPSCs الإنسان من الخلايا الدموية المحيطية وحيدات النوى (PBMCs) باستخدام ناقلات STEMCCA. EM: متوسطة التوسع؛ GF: عوامل النمو؛ RBC: خلايا الدم الحمراء؛ MEF: الفأر الجنينية الخلايا الليفية؛ hESC: الخلايا الجذعية الجنينية البشرية B) BD خلية CPT Vacutainer أنبوب التحضير مع سترات الصوديوم المستخدمة لجمع الدم الكامل والانفصال و. من الخلايا وحيدات النوى. فصل يحدث أثناء الطرد المركزي عند حاجز يفصل هلام رانه الخلايا وحيدات النوى والبلازما من مكونات الدم أكثر كثافة. بعد الطرد المركزي، يمكن عزل الخلايا وحيدات النوى والصفائح الدموية من طبقة بيضاء (معطف الشهباء) فقط تحت طبقة البلازما. اضغط هنا لمشاهدتها بشكل اكبر شخصية .

الشكل 2
الشكل 2. ممثل الصور من التغيرات المورفولوجية للخلايا في جميع أنحاء البروتوكول. A) يوم 0: يتم عزل الخلايا وحيدات النوى من الدم المحيطي ومثقف في وسط التوسع. . 20X التكبير B) يوم 9: بعد التوسع في الثقافة لمدة 9 أيام، ويلاحظ مجموعات 'حفنة من العنب مثل' من الخلايا (الأسهم) مما يدل على أن الخلايا المتكاثرة في صحة جيدة وقبل أن transduced. ويلاحظ تشكيل مستعمرة بعد أسبوع من م: 20X التكبير C) DAY 20.ومطلي LLS على MEFs. التكبير 10x D) DAY 30: hESC مثل المستعمرات اللجنة التوجيهية تظهر التشكل نموذجية وتكون جاهزة للقطف والتوسع. 4X التكبير.

الشكل 3
الشكل 3. توصيف iPSCs الإنسان المتولدة من الدم. التحليل المناعي للiPSCs المتولدة من PBMCs يظهر التعبير عن علامات تعدد القدرات SSEA-4، ترا-1-60 و ترا-1 81. وصمة عار iPSCs أيضا إيجابية للالفوسفاتيز القلوية (الخرة فوس).

الشكل 4
الشكل 4. وتقاس جيل من التحوير خالية iPSCs. iPSCs مع البلازميدcoexpressing لجنة المساواة العرقية recombinase والجينات المقاومة بوروميسين، كما هو موضح في سومرز وآخرون، 2010. iPSCs A) قبل ترنسفكأيشن. B) لوحظ موت الخلايا بعد يومين من اختيار بوروميسين C) مستعمرات جديدة على الخروج من خلايا مقاومة حوالي 10 يوما بعد ترنسفكأيشن . D) يتم اختيار بعض المستعمرات وتوسيعها، ويتم تنفيذ الجنوبية وصمة عار لتأكيد استئصال التحوير. 1 و 3 و 5 و 7: استنساخ اللجنة التوجيهية قبل الختان، 2، 4 و 6 و 8: استنساخ اللجنة التوجيهية بعد الختان. جميع الصور النقيض مرحلة التكبير 4X في.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

نحن هنا تصف استخدام ناقلات lentiviral STEMCCA لتوليد iPSCs من خلايا وحيدات النوى الإنسان عزله من ملليلتر قليلة من الدم المحيطي جمعها طازجة. ويمكن أيضا أن تستخدم بروتوكول لإعادة برمجة PBMCs المجمدة (التي تم الحصول عليها مباشرة من معطف الشهباء)، والتفاصيل من آثار عملية كبيرة عند استخدام الخلايا المانحة الحصول عليها من مكان بعيد. قبل تحريض إعادة برمجة، ويجب الخضوع لعزلة PBMCs الخطوة الحاسمة التي تجعل التوسع على صحة السكان من الخلايا المتكاثرة أكثر استعدادا لإعادة برمجة النووية. ويلاحظ بسهولة عن طريق وجود "حفنة من العنب مثل" مجموعات من الخلايا على التوسع في الظروف الثقافة المكونة للدم. عندما يتم transduced أقل من 5 خلايا 5x10، قد يكون مطلي الخلايا على واحد أو اثنين من الآبار لوحة 6 جيدا تحتوي على MEFs. لقد عانينا بعض التباين في الوقت اللازم لمراقبة hESC مثل المستعمرات، وفي بعض الحالات تصل إلى 25 يوما بعد تنبيغ.استخدام مثبطات ROCK أمر بالغ الأهمية لتعزيز بقاء وكفاءة الاستنساخ على اختيار المستعمرات اللجنة التوجيهية الناشئة. وبشكل ملحوظ على عكس ما شاهدناه عند اختيار المستعمرات من الخلايا الليفية برمجتها، تقريبا 100٪ من المستعمرات التقطت من PBMCs برمجة تضع اللجنة التوجيهية استنساخ المستقرة التي يمكن توسيعها وcryopreserved. وأخيرا، فإننا نعتقد أن بساطة جمع العينات جنبا إلى جنب مع النهج كفاءة عالية ومتسقة إعادة برمجة الموصوفة هنا، تمثل منصة لتطبيقات حسن النية التي أعداد كبيرة من الحيوانات المستنسخة اللجنة التوجيهية تحتاج إلى أن تتولد.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgments

وقد تم تمويل هذه الدراسات في جزء من جائزة UO1HL107443 NIH-01 لGJM وجنرال موتورز.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
BD Vacutainer CPT Cell Preparation Tube with sodium citrate BD Biosciences 362760
QBSF-60 Stem Cell Medium Quality Biological 160-204-101
IMDM Invitrogen 12440
DMEM/F12 Invitrogen 11330
FBS Atlanta Biologicals S10250
Knockout Serum Replacement Invitrogen 10828
Primocin Invivogen ant-pm-2
Pen/Strep Invitrogen 15140
L-Glutamine Invitrogen 25030
Non-Essential Amino Acids Invitrogen 11140
β-mercapt–thanol MP Biomedicals 190242
Ascorbic Acid Sigma A4544
IGF-1 R&D Systems 291-G1
IL-3 R&D Systems 203-IL
SCF R&D Systems 255-SC
EPO R&D Systems 286-EP
Dexamethasone Sigma D4902
Polybrene Sigma H-9268
bFGF R&D Systems 233-FB
Stemolecule Y27632 Stemgent 04-0012
ES Cell Marker Sample Kit Millipore SCR002

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Lowry, W. E., Richter, L., Yachechko, R., et al. Generation of human induced pluripotent stem cells from dermal fibroblasts. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 2883-2888 (2008).
  2. Park, I. H., Zhao, R., West, J. A., et al. Reprogramming of human somatic cells to pluripotency with defined factors. Nature. 451, 141-146 (2008).
  3. Takahashi, K., Tanabe, K., Ohnuki, M., et al. Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors. Cell. 131, 861-872 (2007).
  4. Yu, J., Vodyanik, M. A., Smuga-Otto, K., et al. Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells. Science. 318, 1917-1920 (2007).
  5. Stadtfeld, M., Hochedlinger, K., et al. Induced pluripotency: history, mechanisms, and applications. Genes Dev. 24, 2239-2263 (2010).
  6. Somers, A., Jean, J. C., Sommer, C. A., et al. Generation of transgene-free lung disease-specific human induced pluripotent stem cells using a single excisable lentiviral stem cell cassette. Stem Cells. 28, 1728-1740 (2010).
  7. Loh, Y. H., Hartung, O., Li, H., et al. Reprogramming of T cells from human peripheral blood. Cell Stem Cell. 7, 15-19 (2010).
  8. Seki, T., Yuasa, S., Oda, M., et al. Generation of induced pluripotent stem cells from human terminally differentiated circulating T cells. Cell Stem Cell. 7, 11-14 (2010).
  9. Staerk, J., Dawlaty, M. M., Gao, Q., et al. Reprogramming of human peripheral blood cells to induced pluripotent stem cells. Cell Stem Cell. 7, 20-24 (2010).
  10. Chou, B. K., Mali, P., Huang, X., et al. Efficient human iPS cell derivation by a non-integrating plasmid from blood cells with unique epigenetic and gene expression signatures. Cell Res. 21, 518-529 (2011).
  11. vanden Akker, E., Satchwell, T. J., Pellegrin, S., Daniels, G., Toye, A. M. The majority of the in vitro erythroid expansion potential resides in CD34(-) cells, outweighing the contribution of CD34(+) cells and significantly increasing the erythroblast yield from peripheral blood samples. Haematologica. 95, 1594-1598 (2010).

Tags

بيولوجيا الخلايا الجذعية، العدد 68، المستحثة الخلايا الجذعية المحفزة (iPSCs)، وخلايا الدم المحيطية وحيدات النوى (PBMCs)، إعادة برمجة واحدة ناقلات lentiviral excisable، STEMCCA
جيل من صنع الإنسان من الخلايا الجذعية المحفزة الدموية المحيطية باستخدام Lentiviral STEMCCA المتجهات
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Sommer, A. G., Rozelle, S. S.,… More

Sommer, A. G., Rozelle, S. S., Sullivan, S., Mills, J. A., Park, S. M., Smith, B. W., Iyer, A. M., French, D. L., Kotton, D. N., Gadue, P., Murphy, G. J., Mostoslavsky, G. Generation of Human Induced Pluripotent Stem Cells from Peripheral Blood Using the STEMCCA Lentiviral Vector. J. Vis. Exp. (68), e4327, doi:10.3791/4327 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter