Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Davranış Tahliller için Boyama Böcekler: anestezi ve Çiftleşme Davranışı doi: 10.3791/52645 Published: April 22, 2015

Abstract

Drosophila kullanarak Çiftleşme deneyleri cinsel seçimi ve davranış anlaşılmasına büyük katkıda bulunmuştur. Deneyler genellikle deneme bireyler arasında ayrım basit, kolay ve ucuz yöntemler gerektirir. Bunun için standart bir yöntem, her sinek kırpma CO 2 anestezi ve ardından etiketleyerek veya kanat. Bununla birlikte, bu invaziv ve davranışını etkilemek için gösterilmiştir. Diğer teknikler sinekleri tanımlamak için renklenme kullandık. Bu makalede, gıda boyası kullanarak, onları ayrı ayrı deneylerde içinde tespit edilmesini sağlar etiketleme Drosophila için basit ve non-invaziv bir yöntem sunar. Bu yöntem, iki erkek bir kadın çiftleşmek için rekabet çalışmalarda kullanılmaktadır. Boyama hızlı ve kolay tanımlanmasını sağladı. Test edilen üç tür arasında renk mukavemetinde bir fark ise, oldu. Veri boya gösteren sunulmuştur Drosophila Melano CO 2 den çiftleşme davranışı üzerinde bir alt etkiye sahiptirgaster. CO2 anestezi etkisi D ile, Drosophila türleri bağlıdır gösterilmiştir pseudoobscura ve D subobscura, D. ise hiçbir etkisi gösteren melanogaster erkek çiftleşme başarısını düşürmüştü. sunulan boya yöntemi deney tasarımları geniş bir aralığına uygulanabilirdir.

Introduction

Son birkaç yıldır orada evrim 1,2 tarihinde nasıl cinsel seçimi ve rekabet erkekler arasındaki etkisi ilgi artmaktadır. Çiftleşme davranışı üzerinde deneyler geliştirilmesi ve cinsel seçimi 3,4 teorileri test önemli bir rol oynamıştır. Cinsi Drosophila özellikle, araştırma kullanarak türlerde, cinsel seçimi ve davranış anlaşılmasına büyük katkıda bulunmuştur. Ancak, yaygın olarak kullanılan teknikler standart çiftleşme deneyler 5,6 sonuçlarını yapay önyargı olup olmadığını araştırmak önemlidir.

Anestezi genellikle deneylerde 7 kullanım ve tanımlanması için kullanılır. Örneğin, sinekler genellikle çiftleşme öncesi toplanır, ya da (CO 2) anestezik karbondioksit kullanarak genotipleri veya deneysel tedaviler halinde sıralanır. Çoğunlukla, ayırt edilmesi gereken deneylerde, fl anastetize yaygın bir uygulamadırler ve kanat off klip parçası, her birey ya da tedavi grubunu 5,8 tanımlamak için. Ancak, CO 2 tedavi davranışını nasıl etkilediğini anlamak için, hayati önem taşımaktadır. CO 2 anestezi etkisi Drosophila melanogaster incelenmiştir edildiği 2 çiftleşmek için uzun anlamlı aldı ve genel olmayan anestezi erkek veya erkeklerden daha düşük çiftleşme başarı vardı, soğuk 5 maruz kullanılarak anestezi CO maruz erkek çocukların. Bu etki gözlenmiştir uygun anestezi deney gününde uygulanır ve zaman sinekler kurtarmak için bir gün verildiğinde. Ancak, bu çalışma bir tek erkek, her kadın 5 sunuldu yalnızca inceleyen çalışmalarda sınırlı kalmıştır. Bir kadın yüzünden anestezi erkek uygunluk daha ince kayıpların tespitine olanak olabilecek erkekler arasındaki rekabeti sağlayan, birden fazla erkek 9,10 karşılaşmaya için daha gerçekçi bir senaryo. CO 2 anestezi kullanımı da olacak ettitr yetişkin D. doğurganlığını ve uzun ömürlü azaltmak bulundu Onlar eclosion kısa bir süre sonra maruz kaldığında bakire toplama 11 uçar zaman yaygın olarak, melanogasterin.

2 anestezi CO bir alternatif onları boya 4,6,10,12,13 ile renkli gıda beslenerek sinekler işaretlemek için. Bu boya renkli sinekler renksiz sinekler, ya da farklı bir renk ile etiketlenmiş sinekler ayırt edilmesi için izin, sineğin bağırsak girer ve karın içinden görünür. Boyalı ek maya hamur 6 üzerinden, ya da yeni bir boyalı gıda alt tabakaya 13 maruziyeti üzerinden, gıda 12 doğrudan eklenen: Yöntem nasıl bu uygulanabilir farklıdır. Bu işaretleme teknikleri çiftleşme performansı 4,6 üzerinde hiçbir etkisi göstermeye görünür. Ancak, kağıt doğrudan yetişkin D aynı gıda boyası etkilerini inceleyen melanogaster ömrü 14 güçlü azalma bulundu. Önceki çalışmalar da alm odaklanmıştırost tamamen D. üzerinde melanogaster, hem CO 2 anestezi 5,11 ve gıda boyası 14 yöntemleri etkileri ile ilgili. Şu anda, CO 2 anestezi veya bağırsak boyama kullanımı diğer Drosophila çiftleşme davranışı nasıl etkilediğini çok az bilgi vardır.

Aşağıdaki inceleme, Drosophila üç türün (D. melanogaster, D. pseudoobscura ve D subobscura) çiftleşme davranışı üzerinde CO2 anestezi etkisi değerlendirilmektedir. CO 2 sinekler toplama etkisi tek ve iki erkek çiftleşme denemeleri hem de incelenmiştir. CO2 etkisi de D. değişir bulunmuştur melanogaster 5 ve CO 2 maruz kalma ve çiftleşme arasındaki çok farklı gecikme süreleri test edildi. Anestezi ve kanat kırpma yöntemi işaretleme alternatif: sinekler leke gıda boyaların kullanımı da değerlendirilir.

Protocol

Gıda Boyama ile Fly Gıda 1. Hazırlık

  1. Alt gıda yaklaşık 20 ml (Şekil 1) ile standart bir Drosophila şişeyi al. Kaynar su 1 L kullanan gıda karışımı aşağıdaki tarifi kullanın: agar, 10 g dekstroz, 85 g mısır unu 60 g, maya, 40 g ve kaynayan 5 dakika boyunca karıştırın. Karışım, 75 ° C'ye soğuduktan sonra% 10 nipagen 25 ml ilave edilir.
  2. Gıda soğutuldu ve iki damla katılaşmasından sonra, - yiyecek en mavi gıda boyası (yaklaşık 0.5 ila 1 mi) ve şişenin bütün yüzeyi üzerine yayılmış olan (Şekil 1). Tercih eğer farklı bir renk boya kullanın.
  3. Boya gıda üst tabakası tarafından emilir, böylece buzdolabında iki gün süre ile gıda boş; Bu olgunlaşma döneminde sinekler zarar aşırı nemi önler. Aşırı nem hala o sonradan ekstra nem ve yukarı örtecek bir sorun olup olmadığını kağıt mendil küçük bir parça ekleonu kaldır.
  4. Transferi tek tek veya gruplar halinde gıda üzerine uçar.
    Not: Sinekler gıda konuyor 1 gün içinde bağırsak boyama kazanacaktır. Alternatif olarak, tamamen önceden deney (gıda boyasına maruz kalma gözlenmemiştir olgunlaşma döneminde artmış mortalite) ile boyanmış gıda sinekler olgun.
  5. Boyalı sinekler olmayan boyalı sinekler kolayca ayırt edilebilir olmadığını kontrol edin. Boyanın yüksek bir konsantrasyonda ya da farklı boya kullanılarak 1.4 - bunlar ayırt edilemez ise, tekrar 1.1 yineleyin.

Gıda Boyama kullanma 2. İki Erkek Çiftleşme Denemeler

  1. Döl üreten için, kadın ve erkek sineklerin çiftleri içeren çoklu şişeleri (erkek ve kadın küçük gruplar larva kalabalığı önlemek için özen rağmen, aynı zamanda uygundur) kurdu. 7 gün - kadın yumurtalarını ve her 5 yeni şişelere sinekler taşımak için izin verin. Sahip türler için uygun bir sıcaklıkta muhafaza edin şişeler (22 ° C, fveya D pseudoobscura ve D subobscura ve D 25 ° C melanogaster).
  2. Pseudoobscura 25 ° C, D 6 saat - - toplama deneysel sinekler erkek ve kadın toplamak önce belirli bir süre toplama şişeleri tüm sinekler çıkarmadan önce onlar bakireler (D. melanogaster olacak sağlamak için 18 saat 22 ° C'de ve D. subobscura - 22 ° C 'de 24 saat).
    Not: Sinekler bakire değilse bu irade önyargı çiftleşme çalışmalarda 15 davranışları.
    1. Mağaza ve bireysel standart 75 x 20 mm plastik şişelerde olgun erkek (gıda ~ 20 ml içeren). Erkek gruplarında 16 tutulur Bu erkek çiftleşme davranışı ve bazı türlerde görülen fitness olumsuz etkileri önler.
    2. İstediğiniz tedaviye erkeklerin yarısı Açığa (CO Bu durumda 2 anestezi). CO 2 mat kullanın veya gerekli süre sinekler ortaya çıkarmak için dokunun. Mal Mağaza yarısıes çiftleşme kadar renkli gıda her bir işlem yer alır. Bu çiftleşme denemeleri sırasında onları görsel olarak ayırt yapacaktır.
    3. Transfer için sinekler bir aspiratör 17 kullanın. Tedavi ve erkek renk durumunu hem tanımlamak için her şişeyi etiketleyin. Burada, dört tedaviler kullanmak (anestezi, olmayan renkli = G-NC, anestezi, renkli = GC, hiçbir anestezi, renkli olmayan, NG-NC, ve hiçbir anestezi, renkli, NG-C).
  3. 10 grupları olarak olgun taze gıda şişeleri içine yeni ortaya kadın aktarın.
  4. 3 gün, D. pseudoobscura - - 5 gün, D subobscura -. D (örneğin, 22 ° C üzerinde çalışılan 18 mağazası türler için uygun bir sıcaklıkta uçan 7 gün sinekler eş yaşı (Drosophila melanogaster olgun izin ver . pseudoobscura ve D subobscura ve 25 ° C Drosophila melanogaster için).
  5. Devamı (tek tek vialler için kadın taşıGıda ~ 20 ml) çiftleşme flakon alışmaları için çiftleşme deneme 1 gün önce, geri kalan. Şişeler ayırt edilebilir, böylece, bu şişeleri etiketleyin. Nötr etiketleme kullanarak deney kör dikkatli olun (yani, 1-150) bu yüzden herhangi bir şişe içinde sinekler kimliğini tahmin etmek mümkün değildir.
    Not: Her şişenin içine sinekler yerleştirir kişi, lekeli hangi tedavinin not gibi her şişeye yerleştirilir sinekler kimliğini bilmeniz gerekir. Ancak, çiftleşme saatler gözlemci kimliklerini bilmek gerekir. Bu en az iki deneyci gerekli olacak kurmak ve biri gözlemlemek için yapmak.
  6. 10 arasında çiftleşme denemeleri başlayın - 12:00, ya da hafif sinekler (sinekler için "şafak") maruz kalan ışık / karanlık döngüsünde geliyor çakışan bir anda. Bir aspiratör kullanarak (bir tek kadın sinek içeren) her çiftleşme şişesine iki erkek sinekler ekleyin. İki erkek (farklı tedaviler anestezi olduğundan emin olun veyakontrol) ve bu bir mümkün birbirinden ayırt bunları yapmak, ve lekeli hangi erkek not bağırsak boyama vardır.
  7. (- Renkli renkli veya non) çiftleşme oluşursa, arkadaşları erkek durumunu kaydedin. 2 saat boyunca son çalışmalar, kabul edersek kadın arkadaşı olmaz.
    2 saat bu türler için uygun olmakla birlikte, diğer Drosophila fazla ya da daha az süre gerekebilir: edin.

3. Tek Erkek Çiftleşme Denemeler

  1. Tek erkek denemeler için, iki değişikliklerle Protokolü 2 tekrarlayın:
    1. Adım 2.3 renkli gıda erkek tutmayın.
    2. Aşama 2.7, her şişe için, yalnızca tek bir erkek ekleyin.
  2. Adım 2.8, sinek flakon, çiftleşme bitmiş çiftleşme başlar ve zaman kayıt altına alınmalıdır zaman eklenir zamanı kaydetmek. Bu değerlerden, başarı, gecikme ve süresini çiftleşme hesaplamak.

4. Veri Analizi

  1. Ana için uygun istatistik paket kullanınlisis. Veri normal ve sadece iki tedaviler t-testleri veya eşdeğer Genelleştirilmiş Lineer Model (GLM) kullanın. İki erkek deneyler için, binom testler veya herhangi bir temel istatistik paketinde mevcut bir binom GLM kullanın.
    Not: Örnek verileri için tüm analizler, R, sürüm 3.0.3 19 içinde gerçekleştirilmiştir.
  2. Her tedavi 20 gecikme ve süresi frekans histogramlar komplo, ve Shapiro-Wilk normallik gibi bir testi kullanılarak, normallik için çiftleşme gecikme ve çiftleşme süresi verilerini kontrol edin. Normal değilse, onu dönüştürmek, ya da parametrik olmayan eşdeğer istatistiklerini 20 kullanın.
    Not: Tek erkek deneyler örnek verileri log için dönüşüm normallik ve eşit sapmaların gereksinimlerini bir araya geldi.
  3. Veri normalize olabilir Eğer iki tedaviler 21 kullanırken, kullanım t-testi, tek erkek çiftleşme çalışmalarda çiftleşme gecikmesi ve süresi arasındaki farklılıkları incelemek için. Birden tedaviler kullanılırsa,Varyans Analizi Bir ​​(ANOVA) 20 deneyin. Veri normalize mümkün değilse, eşdeğer parametrik olmayan testler 21 deneyin.
  4. Rekabet erkeklerde 20 birleşme başarı gıda boyası veya CO2 anestezi ya da bir etkisini test etmek için binom testleri kullanın. Örnek veriler ile olduğu gibi çoklu tedaviler, kullanıldığı takdirde, binom hata yapısı 21 olan bir GLM kullanın.
  5. Örnek verileri iki erkek denemeler için, binom hata yapıları ile GLMS kullanın. Bir GLM bir yanıt değişkeni (0 = gazlı ve-gassed değil CO 2 incelendiğinde açıklayıcı variables.One GLM olarak takılmış bir yanıt değişkeni (renkli = 0 ve renkli olmayan = 1) türler ile, gaz durumu, ve gaz tedavisi gibi renk muayene = 1) monte türler, renkli durum ve gaz tedavisi ile. Her durumda, maksimal modeli üretmek ve AIC 20 dayalı bir model basitleştirilmesi gerçekleştirin.

Representative Results

İki erkek çiftleşme denemeleri - 2 anestezi çiftleşme davranışı CO etkisi

CO 2 anestezi etkisi varyasyonu açıklamak için bulunan en iyi modeli bir faktör olarak (D. pseudoobscura ve D. subobscura birbirlerine arasında hiçbir farklılık gösterdi kaynaşmış olan) türlerin içeriyordu. D. pseudoobscura ve D subobscura iki erkek çalışmalarda (Z 1.589 = 0.087, p = 0,931) çiftleşme başarısı CO 2 anestezi anlamlı etkisi yoktu. D. için melanogaster, 2 anestezi CO maruz erkek önemli ölçüde daha düşük birleşme başarı (Z1,589 = 2.467, p = 0.014) vardı. Daha büyük bir etkiye sahip türler ve tedavi (χ 2 = 1.589 6.83 = 0.009 P) arasında anlamlı bir etkileşim D. zaman görülüyor oldu melanogaster koleksiyonu gaza maruz veya 1 günlük deneme (Tablo 1) önce bulundu. Ancak buradaner, D. melanogaster erkek CO 2 bir etkisi görülmemiştir 2 iki gün deneysel duruşmadan önce CO maruz.

İki erkek çiftleşme denemeleri - çiftleşme davranışı üzerinde bağırsak boyama etkisi

Model basitleştirme gıda boyası anlamlı etkisi üç türün (> 0.1 P) herhangi bulundu varlık gösterdi. Tedavi veya gaz durum analizine dahil edildiğinde bu (P> 0.1) da anlamlı değildi. tedavilerde renkli sinekler başarılı eşleştirmesi oranlan Tablo 2'de gösterilmiştir. sinekler arasında renk farkı renkli ve renksiz gıda Şekil 1 'de görülebilir. bağırsak gıda boyası yoğunluğu D daha fazla idi tutulur pseudoobscura ve D D. daha subobscura melanogaster.

Tek çiftleşme denemeleri - CO m 2 anestezi etkisiating davranış

CO 2 anestezi son zamanlarda toplamak yetişkin ortaya için kullanıldığında, üç türün herhangi çiftleşme gecikme fark yoktu. Bir etki D. geçme süresi için bulunmuştur subobscura 2 iki gün çiftleşme denemeleri (; Tablo 2 Şekil 2 ve 3) öncesinde CO maruz zaman.

Şekil 1,
Şekil 1. RENKLİ ve Non Renkli Fly Gıda (A) küçük şişeler gösteren Fotoğraf ve Erkek D. Bağırsak boyamada Gücü Subobscura (B).

Şekil 2,
Erkeklerde Anesteziyoloji olsaydı, Tek Erkek Denemeler İncelenen üç Türlerinin için Çiftleşme Gecikme için Şekil 2. ortalama ve% 95 güven aralıklarıd (ışık çubukları) ya da değil Anestezi (koyu çubuklar) olduğunda Cinsel Olgunluk önce Bakireler olarak Toplanan.

Şekil 3,
Cinsel Olgunluk önce Bakireler olarak Toplanan zaman Erkekler (koyu çubuklar) Anestezi (ışık çubukları) Anestezi ya da değil edildi Şekil 3. ortalama ve Tek Erkek Denemeler İncelenen üç Türlerinin için Çiftleşme Süresi% 95 Güven Aralıkları.

Tedavi Tür Hayır denemeleri Hayır sinekler renkli evlendirilen ki p değeri Hayır sinekler gassed evlendirilen ki p değeri
CO 2 üzerinde Koleksiyonu D. Mel 73 36 1 27 0,0344
D. pse 79 41 0,8221 44 0,3682
D. alt 71 40 0,3425 33 0,6353
2 18 saat CO Exposed önce D. Mel 57 28 1 19 0,0163
D. pse 65 32 1 31 0,8043
D. alt 68 38 0,3961 35 0,9036
2 2days CO Exposed. D. Mel 56 19 0,0222 32 0,3497
D. pse 70 32 0,5504 33 0,7202
D. alt 56 29 0,8939 26 0,6889 </ Td>

Tablo İncelendiğinde Tüm Türlerin ve Tedaviler karşısında iki erkek Choice Experiments 1. Sonuçları.

Tür Özellik df t değeri p değeri
D. melanogaster Gecikme 58 1,379 0.174
Süre 58 1.243 0.221
D. pseudoobscura Gecikme 109 0.419 0.676
Süre 109 0.436 0.664
D. subobscura Gecikme 83 0.098 0.922
Süre 83 1,767 0.081

Tek Çiftleşme Çiftleşme Gecikme CO 2 Anestezi Toplanması Etkisini incelenmesi Deney ve Süre gelen Tablo 2. Bulgular. Testler Drosophila üç türün (D. melanogaster, D. pseudoobscura ve D. subobscura) üzerinde gerçekleştirilmiştir.

Discussion

Bu veriler, CO2 anestezi etkisinin az etkisini gösteren iki ya da üç türe, türler arasında tutarlı olduğunu göstermektedir. Bizim sonuçlar gıda boyası ile etiketleme 2 anestezi D için CO daha erkek çiftleşme başarısı daha düşük etkiye sahip önermek melanogaster. Bu deneyler, gıda boyaları, kolayca ve ucuz bir şekilde birden çok erkek içeren birleşme deneyleri için etiket sinekleri için kullanılabileceğini göstermektedir.

Üç modeli Drosophila türlerinin yalnızca D., incelenen melanogaster, rekabetçi bir durumda birleşme performansına CO2 anestezi etkisi göstermiştir. Bunun aksine, türlerin yok D için önceki sonuçlara aksine birleşme gecikme bakımından tek birleşme deneylerinde gaz toplama bir etki gösterdi melanogaster 5. rekabetin etkisi bu nedenle sadece saptanabilir CO 2 anestezi daha ince spor etkileri, vurgulama olabilirdurumlar altında erkek-erkek rekabet olduğu yerde. Erken toplama ve bir gün Pozlama deneme öncesinde D. erkeklerin yeteneği üzerinde olumsuz bir etkisi var Bir çiftleşme kazanmak için melanogasterin. İki gün önce deneme maruz kalma, ancak herhangi bir etkisi görülmemiştir. D. Hem pseudoobscura ve D subobscura çalışmaların hiçbirinde gazına maruz herhangi bir etki göstermemiştir. Bir açıklama olduğunu D. erkek bakire olmasını sağlamak için diğer türlere göre daha - (6 saat eski 0) daha önce hayatında toplanan gerekir, çünkü melanogaster CO 2 erken maruz savunmasız oldu. Dolayısıyla erkek D. sineğin manikür hala sertleşmesine kendi manikür için uzun oldu, diğer türlere oranla, sertleşme gibi bu çağın melanogaster daha duyarlı olabilir. Genel olarak, bu CO 2 anestezi etkileri belirli türleri ve uygun hedef türlerin etkisini test etmelidir araştırmacılar olduğu fikrini desteklemektedir. Currently CO2 anestezinin etkisi üzerinde çalışma çoğunluğu diğer ilgili türlerin uygulamak için uygun olmayabilir, bu nedenle Drosophila melanogaster 5,11,22 ile yapılmıştır edilmiştir.

sinekler ayırt etmek için sunulan alternatif non-invaziv bir yöntem gıda boyası olduğunu. Sonuçlar Bu tedavi tüm türler incelendiğinde genelinde hiçbir etkisi yoktu öneririz. Kullanımı bireyler arasında ayrım yapmak için, ucuz ve kolay bir şekilde görünür bir marker sağlaması başarılı oldu Bununla birlikte, bu boya D. ayırt kolay olduğu unutulmamalıdır pseudoobscura ve D D. daha subobscura melanogaster. Önceki yazarlar 4,6 (yeşil ve mavi kırmızı) birkaç renk kullandık. Biz, D. bütün türlerde ayırt etmek kolay, özellikle olmaya mavi boyama bulundu pseudoobscura ve D subobscura. Potansiyel birçok bireysel işaretlenmiş Flie ile daha karmaşık deneyler sağlayacak birkaç renk kullanmas. Bazı gıda boyaları tüketildiği zaman muhtemelen sindirilmiş olan, sinekler renk başarısız Ancak, farklı boyaların ön testler, esastır. Diğer boyalar) toksik etkilere sahip ve sineklerin yaşam azaltmak ve 14 kaçınılmalıdır olabilir. Daha pahalı boyalar kullanılarak alternatif gıda boyası yöntemleri de D. bağırsak bütünlüğünü incelenmesi için kullanılmıştır 23 melanogaster. Bunlar bir alternatif sağlayabilir, her ne kadar daha pahalı, boyama yöntemi 23.

sinekler koleksiyonundan boyalı gıda saklanabilir gibi boya yöntemi CO 2 kanat kırpma gibi hızlı. Gıda alımı, (~ 3 saat), hızlı, yani diğer çalışmalar 6 da kullanılan renkli gıda depolama O / N da sinekler işaretlemek için yeterli olacaktır. (- 12 gün 10) 24 işaretleme kanat (daimi) kırpma veya floresan tozu ile karşılaştırıldığında - (5 saat ~ 4) Bununla beraber, boyama süresi oldukça kısadır. Drosophila türlerinin olarakgörünümü değişir, farklı boyalar daha az ya da farklı türler için geçerli olacaktır, ve bazı suşlar olarak (örneğin, knock-out mutantlar) diyet değişikliklerine savunmasız olabilir, boyanın herhangi bir şekilde kullanılması etkinliğinin bir ön test, özellikle uzun eğer gerektirir boyalara süreli maruz kalma 14 toksik olabilir. Kalaw ve diğ., 14 çalışmasının tersine olarak, D, renkli gıdalar birden fazla gün depolandıktan sonra belirgin bir ölüm oranı olduğunu bulmuştur melanogaster (3 gün), D. pseudoobscura (5 gün) veya D subobscura (7 gün), muhtemelen boyada farkı için kullanılır.

boya tekniği başarılı kullanımı için kritik adım seçilen boya türleri ve gerilme kullanılan iyi çalıştığını doğrulayarak, adım 1.5 olduğunu. Alternatif bir teknik alan deneyleri 24 kullanımdan önce sinek dışında renkli toz uygulanmasını kapsar. Bu yöntem alan nedeniyle t bireyleri izlemek için kullanılır olmuşturo işaretleme süresi ve işaretleme kitle kolaylığı 24 uçar. Biz açıkça çiftleşme çalışmalarda bu yöntemi test olmasına rağmen, bu toz, özellikle Drosophila 25, 26, çiftleşme önemli duyulara sahip olabilir, herhangi etkilerini incelemek için önemli olacaktır. Türler ise, bağırsak boyama mümkün olmadığı durumlarda, Bu yöntemler, uygun olabilir.

Sonuç olarak test edilen üç türün (D. pseudoobscura ve D. subobscura) iki CO 2 anestezi veya erkeklerin çiftleşme yeteneği gıda boyası ya bulunamadı etkisi olduğunu öğrendim. D. için tespit edildi CO 2 anestezi olumsuz bir etkisi melanogaster, ancak gıda boyası, bu türün başarılı çiftleşme etkilemedi. Genel olarak, boya yöntemi eşdeğer veya CO 2 anestezi gerektiren yöntemlere göre daha iyi olduğunu tek tek Drosophila belirlenmesi için basit ve ucuz bir non-invaziv bir yöntem sağlar. Obüyük olasılıkla bu yöntem türlerinin aralığında çalışacak olan.

Disclosures

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını olduğunu beyan ederim.

Acknowledgments

Biz çiftleşme denemeleri ile yardım için Alex Hitchen ve Meg Booth teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma TP H015604 / 1 / Merkezi tarafından hibe KD tarafından desteklenmiştir.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Plastic tubing Fisher Scientific TWT-200-061G Other tubing may be suitable however it must fit within a 1ml pipette tip.
Fine mesh Any haberdashery - Fine curtain mesh is suitable
1 ml pipette tips VWR 83007-376 Various brands of pipette tips would be suitable
Plastic Vials Sarstedt 58.49 Larger vials or bottles could also be used.
Cotton Balls Lewis Medical Solutions 28170 The size of cotton will vary depending on the size of vials used
Blue Food colouring Thesugarcraftcompany - Other dye colours and brands can have variable results.
CO2 Tank BOC BOC 40VK
Sharpie Markers Steadtler Lumocolor 313 S Various colours can be used, but Lumocolor S give an excellent combination of durability and fineness
Stopwatch Salter SL3920 Any stopwatch with a good digital display would be fine

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Parker, G. A. Sperm competition and its consequences in insects. Biological Reviews. 45, 525-567 (1970).
  2. Hosken, D. J., Stockley, P., Tregenza, T., Wedell, N. Monogamy and the battle of the sexes. Annual Review of Entomology. 54, 361-378 (2009).
  3. Chapman, T., Liddle, L., John, K., Wolfner, M., Partridge, L. Female cost of mating caused by males accessory gland fluids. Nature. 373, 241-244 (1995).
  4. Avent, T. D., Price, T. A. R., Wedell, N. Age-based female preference in the fruit fly Drosophila pseudoobscura. Animal Behaviour. 75, 1413-1421 (2008).
  5. Barron, A. Anaesthetising Drosophila. for behavioural studies. Journal of Insect Physiology. 46, 439-442 (2000).
  6. Moeers, A. O., Rundle, H. D., Whitlock, M. C. The effects of selection and bottlenecks on male mating success in peripheral isolates. The American Naturalist. 153, 437-444 (1999).
  7. Ashburner, M., Thompson, J. N. The laboratory culture of Drosophila. The Genetics and Biology of Drosophila. Ashburner, M., Wright, T. R. F. 2a, Academic Press. London. 1-109 (1978).
  8. Powell, J. Progress and Prospects in Evolutionary Biology: The Drosophila Model. Oxford University Press. Oxford. (1997).
  9. Moore, A. J., Moore, P. J. Balancing sexual selection through opposing mate choice and male competition. Proceedings of the Royal Society of London, series B-Biological Sciences. 266, 711-716 (1999).
  10. Hollocher, H., Ting, C., Pollack, F., Wu, C. Incipient speciation by sexual isolation in Drosophila melanogaster.: Variation in Mating preference and Correlation between sexes. Evolution. 51, 1175-1181 (1997).
  11. Perron, J. M., Huot, L., Corrivault, G. W., Chawla, S. S. Effects of carbon dioxide anaesthesia on Drosophila melanogaster. Journal of Insect Physiology. 18, 1869-1874 (1972).
  12. Wu, C. I., et al. Sexual isolation in Drosophila melanogaster : A possible case of incipient speciation. Proceedings of the National academy of sciences. 92, 2519-2523 (1995).
  13. Melcher, C., Pankratz, M. J. Candidate gustatory interneurons modulating feeding behaviour in the Drosophila brain. PLoS Biology. 3, e305 (2005).
  14. Kalaw, V., Drapeau, M. D., Long, A. D. Effects of food coloring on longevity and viability of Drosophila melanogaster. Dros. Inf. Serv. 85, 128-129 (2002).
  15. Friberg, U. Male perception of female mating status: its effect on copulation duration, sperm defence and female fitness. Animal Behaviour. 72, 1259-1268 (2006).
  16. Lizé, A., Price, T. A. R., Heys, C., Lewis, Z., Hurst, G. D. D. Extreme cost of rivalry in a monandrous species male − male interactions result in failure to acquire mates and reduced longevity. Proceedings of the Royal Society of London, series B-Biological Sciences. 281, 20140631 (2014).
  17. Yeh, S. -D., Chan, C., Ranz, J. M. Assessing differences in sperm competitive ability in Drosophila. Journal of Visualized Experiments. (78), e50547 (2013).
  18. Holman, L., Freckleton, R. P., Snook, R. R. What use is an infertile sperm? A comparative study of sperm-heteromorphic Drosophila. Evolution. 62, 374-385 (2008).
  19. R: A Language and Environment for Statistical Computing. R Foundation for Statistical Computing. (2011).
  20. Crawley, M. J. Statistics: An introduction using R. Wiley-Blackwell. Oxford, UK. (2005).
  21. Dytham, C. Choosing and Using Statistics: A Biologist's Guide. Wiley-Blackwell, Oxford, UK. (2010).
  22. Kaiser, M. Influence of anaesthesia by carbon dioxide on hatching time and weight at eclosion in Drosophila melanogaster. Drosophila Information Service. 76, 92-93 (1995).
  23. Rera, M., et al. Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila. PGC-1 homolog. Cell Metabolism. 14, 623-634 (2011).
  24. Crumpacker, D. W. The use of micronized fluorescent dusts to mark adult Drosophila pseudoobscura. American Midland Naturalist. 91, 118-129 (1974).
  25. Jallon, J. M. A few chemical words exchanged by Drosophila during courtship and mating. Behaviour genetics. 14, 441-478 (1984).
  26. Liimatainen, J. O., Jallon, J. M. Genetic analysis of cuticular hydrocarbons and their effect on courtship in Drosophila virilis and D. lummei. Behaviour Genetics. 37, 713-725 (2007).
Davranış Tahliller için Boyama Böcekler: anestezi ve Çiftleşme Davranışı<em&gt; Drosophila</em
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Verspoor, R. L., Heys, C., Price, T. A. R. Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila. J. Vis. Exp. (98), e52645, doi:10.3791/52645 (2015).More

Verspoor, R. L., Heys, C., Price, T. A. R. Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila. J. Vis. Exp. (98), e52645, doi:10.3791/52645 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter