An assay in mice to track cell migration from skin to draining lymph node is described which enables the characterization of skin Dendritic cells mobilized to the lymph node after footpad infection with Bacille Calmette-Guérin.
वृक्ष के समान कोशिकाओं (डीसी) शटल प्रतिजन उनकी हासिल करने की क्षमता और draining लिम्फ नोड (DLN) के माध्यम से प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की शुरुआत, भाग में के लिए महत्वपूर्ण हैं। DLN करने के लिए डीसी की लामबंदी जटिल है और पूरी तरह से संक्रमण के दौरान स्पष्ट किया जाना है। यहाँ बताया कि एक अभिनव, सरल परख है कि C57BL में माइकोबैक्टीरियम बोविस Bacille Calmette-Guérin (बीसीजी) के साथ लुटेरा संक्रमण के दौरान डीसी के पलायन को ट्रैक करने के fluorochrome 5 और 6-Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl एस्टर (CFSE) पर निर्भर करता है का उपयोग है / 6 चूहों। इस परख त्वचा डीसी उप आबादी कि सक्रिय रूप से बीसीजी के जवाब में निकासी, घुटने की चक्की एल.एन. के लिए स्थानांतरित के लक्षण वर्णन के लिए सक्षम बनाता है। इस प्रोटोकॉल एक बीसीजी मॉडल जहां प्रवासी त्वचा डीसी प्रवाह cytometry द्वारा की पहचान की गई से निकलती है। परख अध्ययन और DCS या अन्य कोशिकाओं की पहचान करने के लिए मिलनसार है कि घर घुटने की चक्की एल.एन. के लिए रोगाणुओं, उनके चयापचयों या अन्य भड़काऊ का टीका के बादलुटेरा में उत्तेजनाओं, और फलस्वरूप कारक है कि इन कोशिकाओं के प्रवास को विनियमित अध्ययन करने के लिए।
शरीर सतहों में स्थानीय डीसी रोगाणुओं या अपने उत्पादों भावना है, और ऐसा करने में निकासी एल.एन. (DLN) 1,2 के लिए लसीका वाहिकाओं के माध्यम से लामबंद। इस स्थानांतरण DLN और हमलावर सूक्ष्म जीव के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के फलस्वरूप भड़काना करने के लिए माइक्रोबियल प्रतिजन के परिवहन के लिए आवश्यक है। दरअसल, नाकाबंदी या डीसी की विफलता के संक्रमित ऊतक से विस्थापित करने के लिए DLN टी सेल प्रतिक्रिया 3-5 म्यूट करता है। तदनुसार, एकल कोशिका के स्तर पर पलायन को ट्रैक करने के लिए डिज़ाइन किया गया assays एक दिया डीसी सबसेट को मानो प्रवासी समारोह में मदद करने के लिए उपयोगी होते हैं।
वहाँ DLN करने के लिए त्वचा डीसी की लामबंदी पर डेटा की एक बड़ी संस्था है। सूजन या संक्रमित साइटों 2 से डीसी प्रवास पर ज्ञान के अधिक के लिए बाद खातों। यह आश्चर्य की बात के बाद से त्वचा डीसी की एक बड़ी आबादी के घरों और प्रयोगशाला माउस में प्रयोग के लिए एक अत्यधिक सुलभ सतह नहीं है। कई तकनीकों इस प्रकार का आकलन करने के लिए विकसित किया गया हैDLN 2 के लिए त्वचा से murine डीसी के पलायन। FITC त्वचा चित्रकला अब तक का सबसे अधिक इस्तेमाल किया दृष्टिकोण से है। इस परख में fluorochrome fluorescein-5-आइसोथियोसाइनेट (FITC) एसीटोन और एक संपर्क अड़चन के साथ एक मिश्रण तैयार किया जाता है। इस कॉकटेल depilated या मुंडा त्वचा के लिए लागू किया जाता है और FITC लेबल कोशिकाओं के संचय DLN में विश्लेषण बारी में है। प्रवासन भी fluorochrome टैग नैनो या microparticles, जो phagocytic कोशिकाओं है कि त्वचा में फ्लोरोसेंट कणों भाँति की ट्रैकिंग सक्षम बनाता है के साथ त्वचा इंजेक्शन लगाने के द्वारा अध्ययन किया जा सकता है। लसीका वाहिकाओं को भी सीधे लसीका से पलायन DCs निकालने के लिए cannulated जा सकता है। हालांकि यह तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है, विशेष रूप से चूहों में। बाद के विश्लेषण के लिए प्राप्त डीसी की संख्या भी एक सीमित कारक है।
त्वचा डीसी प्रवास पर पिछले कई अध्ययनों के बावजूद, वहाँ DLN निम्नलिखित vacci करने के लिए त्वचा डीसी लामबंदी के बारे में जानकारी की कमी बनी हुई हैBacille Calmette-Guérin (बीसीजी), लाइव माइकोबैक्टीरियम बोविस की तनु तनाव के साथ राष्ट्र एम के खिलाफ टीका करने के लिए इस्तेमाल तपेदिक। बीसीजी टीका त्वचा में है, एक सीमित संक्रमण है कि एक टी सहायक सेल प्रकार 1 प्रतिक्रिया से चलाता है के कारण। दोनों डीसी उप आबादी कि बीसीजी संक्रमित त्वचा से DLN को जुटाने और कारक है कि इस प्रक्रिया के दौरान उनके पलायन को विनियमित पूरी तरह से समझ नहीं रहे हैं। ऊपर के प्रकाश में, एक सरल लेकिन उपन्यास विधि विकसित किया गया था, जहां fluorochrome 5 और 6-Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl एस्टर (CFSE) DLN 3 में डीसी के पलायन को ट्रैक करने के बगल में इंजेक्ट किया जाता है। C57BL / 6 चूहों बीसीजी का एक inoculum और बलिदान से पहले दिन के साथ हिंद लुटेरा में इंजेक्ट कर रहे हैं, जानवरों CFSE के एक उच्च एकाग्रता के साथ एक ही लुटेरा में इंजेक्ट किया जाता है। चौबीस घंटे बाद जानवरों की बलि दी जाती है और draining घुटने की चक्की एल.एन. (PLN) हटा दिया है और प्रवाह cytometry के लिए तैयार किया। इस परख आईडीई सक्षम बनाता हैकोशिकाओं है कि DLN को लुटेरा त्वचा से रातोंरात पलायन (चित्रा 1) के ntification।
इसके अलावा, जीन-लक्षित चूहों DLN को लामबंद करने के लिए कोशिकाओं के लिए आवश्यक कारकों की पहचान में मदद करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। इस परख का उपयोग करना, इस रिपोर्ट के लेखकों में पहले से पाया है कि EpCAM कम CD11b उच्च प्रवासी त्वचा डीसी परिवहन DLN को इंटरल्युकिन -1 रिसेप्टर और intracellular एडाप्टर अणु MyD88 3 द्वारा विनियमित एक प्रक्रिया में बीसीजी। इस CFSE आधारित प्रवास परख जो Bollampalli एट अल। 3, जहां से फ्लो प्रवासी त्वचा डीसी का पता लगाने और विश्लेषण करने के लिए इस्तेमाल किया गया था द्वारा उपरोक्त रिपोर्ट से निकलती लिए प्रोटोकॉल, इस के साथ साथ वर्णित है। फायदे और इस परख के नुकसान पर चर्चा कर रहे हैं।
noDCs विशेष प्रतिजन कोशिकाओं पेश कि माइक्रोबियल प्रतिजन प्राप्त करने और lymphatics के माध्यम से DLN की ओर पलायन करने से शरीर सतहों पर माइक्रोबियल चुनौती का जवाब कर सकते हैं। वहाँ, डीसी एक तरह से है कि प्राथमिक टी-सेल प्रतिक्रिया ड्राइव में टी कोशिकाओं को यह प्रतिजन प्रस्तुत करते हैं। DLN के लिए ऊतक से डीसी प्रवास की प्रक्रिया को समझने के लिए कैसे एक उत्पादक टी सेल प्रतिक्रिया के लिए शुरू की है इसलिए अत्यधिक महत्वपूर्ण है। डीसी प्रवास को मापने के लिए तरीके फलस्वरूप उपरोक्त खुलासा करने में बहुत उपयोगी होते हैं।
एक माउस मॉडल बीसीजी, एक जीवित टीका है कि त्वचा में चिकित्सकीय इंजेक्ट किया जाता है साथ संक्रमण के बाद DLN करने के लिए त्वचा डीसी प्रवास का अध्ययन करने के लिए नियुक्त किया गया था। लाइन में, बीसीजी टीकाकरण के इस त्वचीय मार्ग नकल करने के लिए हिंद लुटेरा में इंजेक्ट किया जाता है। एक साधारण परख विकसित किया गया था और इसके परिणामस्वरूप निकासी PLN को लुटेरा त्वचा में बीसीजी टीका साइट से त्वचा डीसी उप आबादी के पलायन की जांच करने के लिए इस मॉडल को शामिल किया। इस प्रोटोकॉल धर्मएक ही लुटेरा है कि पहले बीसीजी प्राप्त में fluorochrome CFSE इंजेक्शन लगाने और फिर बाद में draining PLN 24 घंटा अलग-थलग प्रवाह cytometry द्वारा CFSE लेबल कोशिकाओं की उपस्थिति का विश्लेषण करने पर es। हालांकि प्रोटोकॉल में वर्णित नहीं, तो इस सेटअप से LNS भी इस तरह के एल.एन. 3 में प्रवासी कोशिकाओं की स्थिति के रूप में confocal माइक्रोस्कोपी द्वारा विश्लेषण के लिए तैयार किया जा सकता, प्रवास प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए। इसके अलावा, बीसीजी ट्रिगर त्वचा डीसी प्रवास पर इसी तरह के परिणाम दोनों बीसीजी पाश्चर 1173P2 3 और बीसीजी एसएसआई 1331 14 का उपयोग कर प्राप्त किया गया है।
CFSE आमतौर पर इन विट्रो में कोशिकाओं लेबल और सेल स्थानान्तरण के बाद 15 विवो में इस तरह के लेबल की कोशिकाओं को ट्रैक करने के लिए प्रयोग किया जाता है। वर्तमान प्रोटोकॉल हालांकि, यह सीधे बगल में त्वचा कोशिकाओं लेबल करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। CFSE लेबलिंग के आणविक आधार FITC, जो भी एक एमाइन प्रतिक्रियाशील फ्लोरोसेंट रंजक है के समान है। CFSE हालांकि विकार के लिए FITC भर में पसंद किया जाता है क्योंकि यह रचनात्मकAtes बहुत स्थिर carboxamide बांड 16। इसके अलावा, CFSE अत्यधिक झिल्ली पारगम्य है और निष्क्रिय कोशिकाओं में diffuses। एक बार अंदर, यह intracellular अमाइन (फ्लोरोसेंट) conjugates कि लेबल सेल 15 में रखा जाता है रूपों।
CFSE आधारित प्रवास लेखकों द्वारा विकसित परख बीसीजी के जवाब में एक 24 घंटे की अवधि के भीतर त्वचा से DLN को स्थानांतरित करने कोशिकाओं की पहचान में सक्षम बनाता है। इस प्रकार यह एक निर्धारित समय सीमा के दौरान तीव्र पलायन के उपाय और एक अलग करने की क्षमता की जांच करने की अनुमति देता है, इंजेक्शन उत्तेजनाओं प्रवास को गति प्रदान करने के लिए। इस परख FITC त्वचा पेंटिंग की शास्त्रीय तकनीक है, जो एक संपर्क संवेदनशील एजेंट की त्वचीय, सामयिक आवेदन से शुरू हो रहा एक संचयी पलायन घटना उपायों से अलग है। इस प्रकार, CFSE आधारित प्रवास परख प्रवासी त्वचा डीसी या अन्य कोशिकाओं है कि एफ में रोगाणुओं, माइक्रोबियल उत्पादों या अन्य भड़काऊ उत्तेजनाओं के इंजेक्शन के बाद PLN के लिए घर की पहचान करने के लिए नियोजित किया जा सकताootpad। दरअसल, दोनों न्यूट्रोफिल और γ: δ टी कोशिकाओं बीसीजी 17,18 के जवाब में DLN को त्वचा से स्थानांतरित करने के लिए दिखाया गया है। वास्तव में, परख हाल ही में पता चलता है कि एक आंत स्थानीय निमेटोड संक्रमण DLN से 14 बीसीजी ट्रिगर त्वचा डीसी प्रवास मूक सकता है एक सह-संक्रमण की स्थापना में इस्तेमाल किया गया था।
डीसी प्रवास अक्सर के बाद से FITC लेबल 24 से 72 FITC त्वचा पेंटिंग में मानव संसाधन के बीच मूल्यांकन किया है DCs 19 चित्रकला के बाद 4 से 5 दिनों का पता लगाने के लिए मुश्किल हैं। लेबल DCs पर CFSE संकेत के नुकसान यहाँ प्रस्तुत परख में एक मुद्दे के बाद से पलायन का विश्लेषण 24 घंटा के लिए प्रतिबंधित कर दिया गया था नहीं है, पीछे यह जा रहा है कि लेखकों को विशेष रूप से अध्ययन करना चाहता था "रात" प्रवास घटनाओं कारण। इस परख में रुचि रखते हैं दूसरों हालांकि CFSE आधारित ट्रैकिंग के लिए पहले या बाद में भी समय बिंदुओं की जांच करने के लिए प्रोत्साहित किया जाता है। इसके अलावा, के बाद से CFSE इंजेक्शन द्वारा शुरू की है यह किसी भी निर्धारित समय पर दिया जा सकता है। यह लचीलापन एक की अनुमति दीuthors दिन 5 और 6 बीसीजी संक्रमण (चित्रा -2) 3 के बाद के बीच डीसी प्रवास का आकलन करने के लिए। इंजेक्शन CFSE संभावित प्रकार की कोशिकाओं लेबलिंग प्रतिक्रिया करने के लिए बगल में सुलभ सीमा सकता है। उदाहरण के Langerhans कोशिकाओं (एलसी), जो DCs है कि त्वचा के ऊपर परत में रहते हैं के लिए, एपिडर्मिस, खराब CFSE आधारित प्रवास परख में बीसीजी के जवाब में (चित्रा 3) 3 पलायन। हालांकि, FITC त्वचा चित्रकला, डर्मिस में तैनात डीसी के दौरान, एपिडर्मिस परत के नीचे, आसानी से लेबल और तेजी से साख पत्र 20,21 से DLN की ओर पलायन कर रहे हैं। यह पता चलता है कोशिकाओं fluorochrome लेबल बनने के लिए जरूरी है त्वचा जहां लेबलिंग समाधान लागू किया जाता है की परत करने के लिए स्थानीय स्तर पर प्रसिद्धि की जरूरत के बिना सकते हैं।
बीसीजी के संक्रमण के लिए एक मॉडल के रूप में, माउस कान टीका के एक सदाशयी अंतर्त्वचीय मार्ग है कि एक तपेदिक वैक्सीन के रूप में बीसीजी के नैदानिक प्रशासन के साथ लाइन में और अधिक प्रदान करता है। एफओदूसरी तरफ Otpad इंजेक्शन, संभावना अंतर्त्वचीय और चमड़े के नीचे मार्गों का एक संयोजन है। उस ने कहा, यह कौशल और प्रशिक्षण की आवश्यकता को सही ढंग से और reproducibly, डर्मिस 22 को बीसीजी देने के लिए इतनी नैदानिक व्यवहार में यह हमेशा सच अंतर्त्वचीय नहीं दी जा सकती है बल्कि चमड़े के नीचे या दोनों के संयोजन। एक टीका साइट के रूप में लुटेरा कान कि उल्लेख मेरिट पर दो बहुत ही स्पष्ट लाभ होता है। सबसे पहले, प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया निकासी PLN एक लुटेरा इंजेक्शन के बाद के लिए केंद्रित है और इस प्रतिक्रियाओं की परीक्षा की सुविधा। इस रिपोर्ट के लेखकों में पाया PLN लुटेरा 3 draining पहली और मुख्य एल.एन. होने के लिए। दूसरों के इवान नीले 23 के इंजेक्शन के बाद घुटने की चक्की और subiliac LNS के बीच विभाजन जल निकासी का सुझाव दिया है। फिर भी, कान के संबंध में, वहाँ एक से अधिक कान DLN चूहों में है और इन नियमित रूप से उपस्थित या 24 का पता लगाने के लिए आसान नहीं हो सकता है। उत्तरार्द्ध स्पष्ट रूप से एक LIAB का परिचयDLN में प्रतिक्रियाओं की जांच करने की मांग की पढ़ाई में बड़प्पन। (- 50 μl 10) कान की तुलना में दूसरा, बड़ी मात्रा लुटेरा में टीका जा सकता है। यह बदले में दोनों लसीका प्रवाह में प्रमुख परिवर्तन शुरू करने और बहुत छोटे इंजेक्शन की मात्रा, जो अपने आप में एक मुद्दा है, जब यह माइक्रोबैक्टीरिया की एक बड़ी मात्रा inoculating के लिए आता है के साथ काम करने के लिए होने के दायित्व को कम करता है। कान जहां इंजेक्शन की मात्रा छोटे (1-10 μl) होना है, यहां तक कि 5 μl लसीका प्रवाह को बदलने और संभवतः एक अनियंत्रित ढंग से सीधे DLN में इंजेक्शन सामग्री की एक बड़ी राशि के लिए मजबूर कर सकता है। यह इंजेक्शन की मात्रा के लिए खाते में करने के लिए इसलिए महत्वपूर्ण है। इस एल.एन. के लिए बैक्टीरिया को ढोने वाली में कोशिकाओं के योगदान को संबोधित कर रहे प्रयोगों में विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। बीसीजी लुटेरा मॉडल में, कुछ बीसीजी सेलुलर परिवहन के अभाव में DLN तक पहुँच हो सकती। इस अवलोकन है कि एक अभी भी बीसीजी चूहों के DLN में जहां सेल प्रवास पैर से पता लगा सकते हैं पर आधारित हैपैड पूरी तरह से काली खांसी विष 3 के स्थानीय इंजेक्शन द्वारा ablated गया था। क्या यह एक संकेत है कि बीसीजी सीधे lymphatics पहुँच सकते हैं और वास्तव में एक सेल मुक्त ढंग से DLN तक पहुंच सकता है निर्धारित किया जा करने के बाद से यह शामिल नहीं किया जा सकता है कि इस मामले में जहां इंजेक्शन की मात्रा के बल द्वारा lymphatics तक पहुँच दी में माइक्रोबैक्टीरिया।
कान या लुटेरा में टीकाकरण के लिए एक व्यावहारिक विचार है कि पशुओं को पर्याप्त रूप से स्थिर किया जा करने के लिए की है इंजेक्शन सही ढंग से और एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तरीके से किया जा रहा है। Isoflurane गैस लुटेरा इंजेक्शन के लिए तैयार करने में जानवरों को नियंत्रित करने के लिए एक विधि के रूप में मौजूदा प्रोटोकॉल में वर्णित है। Isoflurane की मध्यस्थता संज्ञाहरण के लिए अपेक्षाकृत तेजी से प्रेरण और वसूली बार यह एक लोकप्रिय तरीका बना है, लेकिन अन्य संवेदनाहारी एजेंट के समान है, यह शरीर क्रिया विज्ञान, जो प्रयोगात्मक परिणाम 25 के साथ हस्तक्षेप कर सकते हैं प्रभावित करता है। दरअसल, दोनों अस्थिर और इंजेक्शन anesthetics खत्म करके लसीका प्रवाह में कमीस्वैच्छिक मांसपेशी आंदोलनों, मांसपेशियों टोन को कम करने, और lymphangion संकुचन 26 कम। इसके अलावा, डीसी के DLN के लिए प्रवास में 5 गुना कमी adoptively लुटेरा में स्थानांतरित anesthetized जानवरों 27 में सूचना दी गई है। उपरोक्त को देखते हुए, और संज्ञाहरण से पहले हैंडलिंग प्रक्रियाओं के बाद इंजेक्शन ही है, जो प्रशासन के लिए दोनों तेजी से और एक कदम वसूली की आवश्यकता नहीं है की तुलना में पशुओं के लिए और अधिक तनाव पैदा होने की संभावना हैं, संभावना पर्याप्त रूप से anesthetics बिना जानवर को नियंत्रित करने के लिए करना चाहिए विचार किया जाए। एक माउस restrainer लुटेरा इंजेक्शन, जहां जानवर तेजी से 30 से 40 सेकंड के भीतर एक स्थिर स्थिति के लिए लाया जा सकता है और टीका लुटेरा में लिए अनुकूलित प्रक्रिया में अपनी शरीर क्रिया विज्ञान के अन्य पहलुओं को बदलने के बिना हिंद लुटेरा में माउस इंजेक्षन करने के लिए आदर्श होगा और lymphatics के माध्यम से सेल प्रवास को संबोधित अध्ययन में अत्यंत उपयोगी होगा।
अंत में, इस रिपोर्टDLN करने के लिए उनकी लामबंदी के दौरान त्वचा डीसी नजर रखने वाले एक परख है कि एक निर्धारित 24 घंटे की खिड़की के दौरान पलायन मॉनिटर का उपयोग कर के लिए एक उपन्यास प्रोटोकॉल पर प्रकाश डाला गया। इस CFSE आधारित प्रवास परख प्रवाह cytometry, के रूप में यहाँ विस्तृत है, साथ ही confocal माइक्रोस्कोपी द्वारा 3 से पता लगाने और प्रवासी कोशिकाओं के विश्लेषण की अनुमति देता है। यह इंजेक्शन उत्तेजनाओं की एक किस्म है और उनके डीसी प्रवास को गति प्रदान करने की क्षमता का अध्ययन करने के लिए एक लचीला मंच प्रदान करता है, और महत्वपूर्ण बात, न केवल DCs बल्कि अन्य आबादी विभिन्न प्रयोगात्मक सेटिंग दौरान DLN को त्वचा से चलती ट्रैक करने के लिए नियोजित किया जा सकता है।
The authors have nothing to disclose.
This work was supported by Karolinska Institutet, a project grant from the Swedish Research Council VR (Dnr 2014-2794) and a KID Doctoral Grant from Karolinska Institutet (All to A.G.R). The funders had no role in study design, data collection and analysis, decision to publish, or preparation of the manuscript.
Isoflurane | Baxter | 1001936060 | |
5- and 6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) |
Invitrogen | C1157 | |
Dimethyl sulphoxide (DMSO) | Sigma | D2650 | |
Fetal bovine serum (FBS) | Sigma | F7524 | |
Bacille Calmette-Guérin (BCG) | strain Pasteur, in house | ||
Trypan blue solution | Sigma | T8154 | |
EDTA | In house | ||
Sodium azide | Sigma | S2002 | |
PBS | In house | ||
Filtered water | In house | ||
BD Plastipak 3 ml syringe | BD Medical Surgical Systems | 309658 | alternative: 5 ml syringe |
6 well plates | TPP | 92006 | |
15 ml centrifuge tubes | TPP | 91015 | Polypropylene |
5 ml round bottom tubes | BD Falcon | 3272948 | Polystyrene |
Univentor 400 anaesthesia unit | Univentor | 8323001 | |
Monojet 3/10ml syringe | Medicarrier | 8881511144 | 29 G x 1/2 in. |
Sterile filter unit | TPP | 99500 | PES membrane |
EPPI-Pistill homogenizer | Schuett biotech | 3.200 512 | Polypropylene |
Allegra X-30R centrifuge | Beckman Coulter | B01145 | |
Bürker counting chamber | VWR | 631-0920 | |
0.5 ml screw cap microtube | Sarstedt | 72.730 | Polypropylene |
1.5 ml Eppendorf microcentrifuge tube | VWR | 700-5239 | Polypropylene |
70 micron cell strainers | VWR | 734-0003 | |
BD LSR-II flow cytometer, operated with FACSDiva software | BD Biosciences | Discontinued. Other Flow cytometers available, minimum detection of 6 fluorochromes needed | |
FlowJo cell analysis software | Tree Star | ||
Antibody | Clone | Company | |
Antibodies | |||
MHC-II I-A/I-E | M5/114.15.2 | BD Biosciences | |
CD11b | M1/70 | BD Biosciences | |
CD11c | HL3 | BD Biosciences | |
CD16/CD32 (Fc-block) | 2.4G2 | BD Biosciences | |
CD326/EpCAM | G8.8 | Biolegend | |
CD103 | 2E7 | Biolegend | |
CD80 | 16-10A1 | Biolegend | |
CD86 | GL-1 | Biolegend |