Summary

大量庞廷出血通过双注射自体血

Published: May 29, 2021
doi:

Summary

我们提出了一个协议,通过双注射自体血液,在老鼠中建立一个巨大的庞然大河出血模型。

Abstract

我们提供一个协议,在老鼠中建立一个巨大的庞然大河出血模型。这项研究使用了重约250克的老鼠。一百微升的自体血从尾静脉中取出,立体有毒地注射到庞斯中。注射过程分为两个步骤:首先,将10μL的血液注射到特定位置,前柱位置(AP)-9.0毫米:横向(拉特) 0 毫米:垂直(垂直)-9.2毫米,然后第二次注射位于AP-9.0毫米的残余血液;拉特 0 毫米;垂直 -9.0 毫米,间隔 20 分钟。平衡束测试、肢体放置测试和修改后的 Voestch 神经分数用于评估神经功能。磁共振成像 (MRI) 用于评估体内出血量。这种模型的症状与大量庞汀出血患者一致。

Introduction

脑内出血占中风患者的五分之一。脑内出血的预后取决于出血的速度、体积和位置与前脑出血相比,脑干出血具有较高的死亡率和发病率3。大约40%的脑部出血发生在第4个庞氏中。庞汀出血的病因学和病理生理学与前脑出血5大出血有很大不同,研究较少。

有两种庞丁出血动物模型。一种是自发出血模型,由注入细菌拼贴酶在庞6,7,8诱发。这种模式的最大优点是出血是自发的。然而,拼贴酶只能诱发少量的庞丁出血。此外,拼贴酶可能会导致大脑的其他伤害。另一种模型是由自体血液的立体定向注射引起的。这种模式的优点是,它很容易掌握与高成功率。从理论上讲,研究人员可以将任何血量注入庞然大雅的任何位置。但是,由于通过针线的回漏,注射量有限。最近,双注法已推广,以减少回漏9。这种方法注射两次自体血,注射间隔为20分钟。双注射法用于诱发轻度 (30 μL) 和中度 (60 μL) 庞廷出血,但不诱发大规模庞然大意出血。在诊所里,大多数预后不佳的庞廷出血患者有大出血(超过10毫升)。

在以前的研究中,我们提供了一个协议,以建立一个庞廷缺血中风模型大鼠10。在这项研究中,我们修改了现有的双注射方法,并提供了一个详细的协议,通过在庞氏两个不同位置的100μL自体血的双重注射,诱导大鼠大量庞然大物出血。

Protocol

该议定书经广州医科大学第二附属医院动物护理与使用委员会审查批准。老鼠是由南方医科大学动物中心提供的。实验设计见图1。 1. 动物和仪器 使用8周大的雄性斯普拉格-道利大鼠,体重250±10克。 在环境温度为 25 °C、相对湿度为 65% 和 12/12h 的光暗循环下,在受控环境条件下将大鼠安置至少 7 天。 无限制地提供食物和水。 <…

Representative Results

共使用25只动物,3只用于控制,6只用于30μL,6只用于60μL,10只用于100μL血液注射。一只接受100μL注射自体血(1/10)的老鼠在手术后24小时内死亡。 手术后在第1天、第3天、第7天和第14天进行行为测试。手术后不同时间点对照组和注射血组的分数在表2中显示。庞丁出血导致神经缺陷,如角膜反射和盘旋(<strong class…

Discussion

在本研究中,我们提供了一个协议,以产生一个巨大的庞然大海大鼠模型。该模型可用于研究大庞丁出血的病理生理机理和预后。

在整个实验中,使用了25只老鼠,其中只有一只死亡。对MRI、毛解剖和 HE 染色的验证表明,该方法的死亡率非常低,成功率很高。要建立大规模的庞然大物出血模型,必须解决两个问题,注射的自体血液往往泄漏到亚拉氏体空间,并沿着针道流回?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

本研究由中国国家自然科学基金委员会(81471181和81870933)和广州医科大学(0506308)向叶江开放实验室项目,以及中国国家科学基金会(81701471)和广州市卫生委员会科学项目(20191A011083)向邱先生提供资助,中国国家科学基金会(81501009)向吴先生提供资助。

Materials

100ml Saline solution Guangdong yixiang 191222201 C1 Preparing heparin diluent
100μl Microinjector Shanghai Gaoge Injection of autologous blood
1ml Syringe Jiangsu Zhiyu 20191014 Withdraw autologous blood from the tail vein
75% Alcohol Shandong Lierkang Disinfection of rat tail
Adhesive tape Shanghai Jinzhong Surgicl instruments
Animal anesthesia system RWD R510-31S-6 Inducing and maintaining anesthesia
Balance beam Jiangsu Saiangsi For neurological deficit scores
Blades Shanghai Feiying 74-C For gross anatomy
Bone cement Shanghai Xinshiji 20180306 Surgicl instruments
Brain tank Shenzhen LEIYEA For gross anatomy
Butorphanol tartrate Jiangsu Hengrui For pain management
Electric cranial drill Nanjing  Darwin biotechnology 20180090018 Making a burr hole on the skull
EP tube Nantong Surui Transfer autologous blood
Erythromycin eye cream Yunnan pharmacy Eyes protection
HE dye liquor Solarbio G1120 For HE staining
Heating pad Dangerous Jungle JR01 Keeping warm
Heparin sodium injection Chengdu Haitong Pharmacal Company 190701 Preparing heparin diluent
IndoPhors Guoyao of China Sterilization
Isoflurane RWD 20080701 Inducing and maintaining anesthesia
Light dark box Jiangsu Saiangsi For neurological deficit scores
Micro-injection pump Baoding Leifu TFD03-01-C Injection of autologous blood
MRI system Philips Confirmation of infarction in vivo
Needle holder Shanghai Jinzhong J32020 Surgicl instruments
Penicilin Guoyao of China Infection Prevention
Q-tips Jiangxi Songhe Surgicl instruments
Scalp heedle Jiangxi Hongda 20200313 Withdraw autologous blood from the tail vein
Scalpel Shanghai Kaiyuan 170902 Surgicl instruments
Shearing scissors Shanghai Jinzhong Y00040 Surgicl instruments
Stereotaxic apparatus RWD 900-00001-00 for surgical positioning
Surgical towel Xinxiang Huakangweicai 20070601 Surgicl instruments
Suture needle Shanghai Jinzhong Surgicl instruments
Suture scissors Shanghai Jinzhong J25041 Surgicl instruments
Tissue holding forcepts Shanghai Jinzhong J31080 Surgicl instruments

References

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Cite This Article
Tang, X., Wu, L., Luo, M., Qiu, Z., Jiang, Y. Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood. J. Vis. Exp. (171), e62089, doi:10.3791/62089 (2021).

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