Hemorragia pontina maciça por dupla injeção de sangue autólogo

Summary

Apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo maciço de hemorragia pontina em um rato através de dupla injeção de sangue autólogo.

Abstract

Nós fornecemos um protocolo para estabelecer um modelo maciço de hemorragia pontina em um rato. Foram utilizados neste estudo ratos com cerca de 250 gramas. Cem microliters de sangue autólogo foram retirados da veia da cauda e estereotipados injetados nos pons. O processo de injeção foi dividido em 2 etapas: Primeiro, 10 μL de sangue foi injetado em um local específico, posição anteroposterior (AP) -9,0 mm; lateral (Lat) 0 mm; vertical (Vert) -9,2 mm, seguida de uma segunda injeção do sangue residual localizado em AP -9,0 mm; Lat 0 mm; Vert -9,0 mm com um intervalo de 20 minutos. O teste do feixe de equilíbrio, o teste de colocação dos membros e o neuroscore Voestch modificado foram utilizados para avaliar a função neurológica. A Ressonância Magnética (RM) foi utilizada para avaliar o volume de hemorragia in vivo. Os sintomas deste modelo estavam em consonância com pacientes com hemorragia pontina maciça.

Introduction

Hemorragia intracerebral é responsável por um quinto dos pacientes com AVC. O prognóstico da hemorragia intracerebral depende da velocidade, volume e localização do sangramento^1,2. Em comparação com a hemorragia do cérebro, a hemorragia cerebral tem maior mortalidade e morbidade³. Cerca de 40% da hemorragia cerebral ocorre nos pons⁴. A etiologia e a fisiopatologia da hemorragia pontina são bem diferentes e menos estudadas do que a hemorragia do antebraína⁵.

Há dois tipos de modelos animais de hemorragia pontina. Um deles é o modelo de hemorragia espontânea induzido pela infusão de colagem bacteriana nos pons^6,7,8. A maior vantagem deste modelo é que o sangramento é espontâneo. No entanto, a colagemnase só pode induzir um pequeno volume de hemorragia pontina. Além disso, a colagem pode causar outras lesões no cérebro. O outro modelo é induzido pela injeção estereotática de sangue autólogo no pons⁹. A vantagem deste modelo é que é fácil dominar com uma alta taxa de sucesso. Teoricamente, os pesquisadores poderiam injetar qualquer volume de sangue em qualquer local de pons. No entanto, devido ao vazamento de volta através da rota da agulha, o volume injetado é limitado. Recentemente, o método de dupla injeção foi promovido para reduzir o vazamento de volta⁹. Este método injeta sangue autólogo duas vezes com um intervalo de 20 minutos entre as injeções. O método de dupla injeção é aplicado para induzir hemorragia pontina leve (30 μL) e moderada (60 μL), mas não hemorragia pontina maciça. Na clínica, a maioria dos pacientes com hemorragia pontina com prognóstico ruim tem hemorragia maciça (mais de 10 mL).

No estudo anterior, fornecemos um protocolo para estabelecer um modelo de derrame isquêmico pontino no rato¹⁰. Neste estudo, modificamos o método de dupla injeção existente, e fornecemos um protocolo detalhado para induzir hemorragia pontina maciça em um rato por injeção dupla de 100 μL de sangue autólogo em dois locais diferentes nos pons.

Protocol

O protocolo foi revisado e aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais do Segundo Hospital Afiliado da Universidade Médica de Guangzhou. Os ratos foram fornecidos pelo Centro Animal da Universidade Médica do Sul. O design experimental é mostrado na Figura 1. 1. Animais e instrumentos Use ratos sprague-dawley machos de 8 semanas pesando 250 ± 10 g. Abrigar os ratos por pelo menos 7 dias antes da cirurgia sob condições …

Representative Results

Foram utilizados 25 animais, 3 para controle, 6 para 30 μL, 6 para 60 μL e 10 para injeções de sangue de 100 μL. Um rato que recebeu uma injeção de 100 μL de sangue autólogo (1/10) morreu dentro de 24 horas após a cirurgia. Os exames comportamentais foram realizados no dia 1º, dia 3, dia 7 e dia 14 após a cirurgia. As pontuações para o grupo controle e grupos de injeção de sangue em diferentes pontos de tempo ap?…

Discussion

No presente estudo, fornecemos um protocolo para gerar um modelo maciço de rato de hemorragia pontina. Este modelo pode ser usado para a pesquisa sobre o mecanismo fisioterásio e prognóstico de hemorragia pontina maciça.

Ao longo do experimento, foram usados 25 ratos, dos quais apenas um morreu. A verificação da ressonância magnética, da anatomia bruta e da coloração do HE indicaram que este método tinha uma taxa de mortalidade muito baixa e uma alta taxa de sucesso. Para estabelece…

Materials

100ml Saline solution	Guangdong yixiang	191222201 C1	Preparing heparin diluent
100μl Microinjector	Shanghai Gaoge		Injection of autologous blood
1ml Syringe	Jiangsu Zhiyu	20191014	Withdraw autologous blood from the tail vein
75% Alcohol	Shandong Lierkang		Disinfection of rat tail
Adhesive tape	Shanghai Jinzhong		Surgicl instruments
Animal anesthesia system	RWD	R510-31S-6	Inducing and maintaining anesthesia
Balance beam	Jiangsu Saiangsi		For neurological deficit scores
Blades	Shanghai Feiying	74-C	For gross anatomy
Bone cement	Shanghai Xinshiji	20180306	Surgicl instruments
Brain tank	Shenzhen LEIYEA		For gross anatomy
Butorphanol tartrate	Jiangsu Hengrui		For pain management
Electric cranial drill	Nanjing  Darwin biotechnology	20180090018	Making a burr hole on the skull
EP tube	Nantong Surui		Transfer autologous blood
Erythromycin eye cream	Yunnan pharmacy		Eyes protection
HE dye liquor	Solarbio	G1120	For HE staining
Heating pad	Dangerous Jungle	JR01	Keeping warm
Heparin sodium injection	Chengdu Haitong Pharmacal Company	190701	Preparing heparin diluent
IndoPhors	Guoyao of China		Sterilization
Isoflurane	RWD	20080701	Inducing and maintaining anesthesia
Light dark box	Jiangsu Saiangsi		For neurological deficit scores
Micro-injection pump	Baoding Leifu	TFD03-01-C	Injection of autologous blood
MRI system	Philips		Confirmation of infarction in vivo
Needle holder	Shanghai Jinzhong	J32020	Surgicl instruments
Penicilin	Guoyao of China		Infection Prevention
Q-tips	Jiangxi Songhe		Surgicl instruments
Scalp heedle	Jiangxi Hongda	20200313	Withdraw autologous blood from the tail vein
Scalpel	Shanghai Kaiyuan	170902	Surgicl instruments
Shearing scissors	Shanghai Jinzhong	Y00040	Surgicl instruments
Stereotaxic apparatus	RWD	900-00001-00	for surgical positioning
Surgical towel	Xinxiang Huakangweicai	20070601	Surgicl instruments
Suture needle	Shanghai Jinzhong		Surgicl instruments
Suture scissors	Shanghai Jinzhong	J25041	Surgicl instruments
Tissue holding forcepts	Shanghai Jinzhong	J31080	Surgicl instruments