Hemorragia pontina masiva por inyección dual de sangre autóloga

Summary

Presentamos un protocolo para establecer un modelo masivo de la hemorragia del pontine en una rata vía la inyección dual de la sangre autóloga.

Abstract

Proporcionamos un protocolo para establecer un modelo masivo de la hemorragia del pontine en una rata. Las ratas que pesaban cerca de 250 gramos fueron utilizadas en este estudio. Cien microlitros de sangre autóloga fueron tomados de la vena de la cola y estereotáxicamente inyectados en el puente de Varolio. El proceso de inyección se dividió en 2 pasos: En primer lugar, se inyectaron 10 μL de sangre en una ubicación específica, posición anteroposterior (AP) -9,0 mm; lateral (Lat) 0 mm; vertical (Vert) -9,2 mm, seguida de una segunda inyección de la sangre residual localizada en AP -9,0 mm; Lat 0 mm; Vert -9.0 mm con un intervalo de 20 minutos. La prueba del haz de equilibrio, la prueba de colocación del miembro, y el neuroscore modificado de Voestch fueron utilizados para evaluar la función neurológica. La proyección de imagen de resonancia magnética (MRI) fue utilizada para determinar el volumen de hemorragia in vivo. Los síntomas de este modelo estaban en línea con pacientes con hemorragia masiva del pontine.

Introduction

La hemorragia intracerebral explica una quinto de pacientes del movimiento. El pronóstico de la hemorragia intracerebral depende de la velocidad, el volumen y la ubicación del sangrado^1,2. En comparación con la hemorragia del cerebro anterior, la hemorragia del tronco encefálico tiene mayor mortalidad y morbilidad^3. El cerca de 40% de hemorragia del médula oblonga ocurre en el puente de^{Varolio 4.} La etiología y fisiopatología de la hemorragia pontina son bastante diferentes y menos estudiadas que la hemorragia del cerebro anterior⁵.

Hay dos tipos de modelos animales de hemorragia pontina. Uno es el modelo de hemorragia espontánea inducida por infusión de colagenasa bacteriana en el puente de^{Varolio 6,7,8.} La mayor ventaja de este modelo es que el sangrado es espontáneo. Sin embargo, la colagenasa puede inducir solamente un pequeño volumen de hemorragia del pontine. Además, la colagenasa podría causar otras lesiones en el cerebro. El otro modelo es inducido por la inyección estereotáctica de sangre autóloga en el puente de^{Varolio 9}. La ventaja de este modelo es que es fácil de dominar con una alta tasa de éxito. Teóricamente, los investigadores podrían inyectar cualquier volumen de sangre en cualquier ubicación de puente de Varolio. Sin embargo, debido a la fuga posterior a través de la ruta de la aguja, el volumen inyectado es limitado. Recientemente, el método de doble inyección se ha promovido para reducir la fuga trasera⁹. Este método inyecta sangre autóloga dos veces con un intervalo de 20 minutos entre las inyecciones. El método de doble inyección se aplica para inducir hemorragia pontina leve (30 μL) y moderada (60 μL), pero no hemorragia pontina masiva. En la clínica, la mayoría de los pacientes con hemorragia pontina con mal pronóstico tienen hemorragia masiva (más de 10 mL).

En el estudio anterior, proporcionamos un protocolo para establecer un modelo isquémico del movimiento del pontine en la rata^10. En este estudio, modificamos el método dual existente de la inyección, y proporcionamos un protocolo detallado para inducir hemorragia masiva del pontine en una rata por la inyección dual de la sangre autóloga del 100 μL en dos diversas localizaciones en el puente de Varolio.

Protocol

El protocolo fue revisado y aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales del Segundo Hospital Afiliado de la Universidad Médica de Guangzhou. Las ratas fueron proporcionadas por el Centro de Animales de la Universidad Médica del Sur. El diseño experimental se muestra en la Figura 1. 1. Animal e instrumentos Use ratas Sprague-Dawley machos de 8 semanas de edad que pesen 250 ± 10 g. Alojar a las ratas durante al menos 7 …

Representative Results

Se utilizaron un total de 25 animales, 3 para el control, 6 para 30 μL, 6 para 60 μL y 10 para las inyecciones de sangre de 100 μL. Una rata que recibió una inyección de 100 μL de sangre autóloga (1/10) murió dentro de las 24 horas posteriores a la cirugía. Las pruebas del comportamiento fueron conducidas el día 1, el día 3, el día 7 y el día 14 después de cirugía. Las puntuaciones para el grupo control y los grup…

Discussion

En el actual estudio, proporcionamos un protocolo para generar un modelo masivo de la rata de la hemorragia del pontine. Este modelo se puede utilizar para la investigación sobre el mecanismo fisiopatológico y el pronóstico de la hemorragia masiva del pontine.

A lo largo del experimento, se utilizaron 25 ratas, de las cuales solo una murió. La verificación de MRI, de la anatomía gruesa, y él que manchaba indicó que este método tenía una tarifa de mortalidad muy baja y una alta tasa d…

Materials

100ml Saline solution	Guangdong yixiang	191222201 C1	Preparing heparin diluent
100μl Microinjector	Shanghai Gaoge		Injection of autologous blood
1ml Syringe	Jiangsu Zhiyu	20191014	Withdraw autologous blood from the tail vein
75% Alcohol	Shandong Lierkang		Disinfection of rat tail
Adhesive tape	Shanghai Jinzhong		Surgicl instruments
Animal anesthesia system	RWD	R510-31S-6	Inducing and maintaining anesthesia
Balance beam	Jiangsu Saiangsi		For neurological deficit scores
Blades	Shanghai Feiying	74-C	For gross anatomy
Bone cement	Shanghai Xinshiji	20180306	Surgicl instruments
Brain tank	Shenzhen LEIYEA		For gross anatomy
Butorphanol tartrate	Jiangsu Hengrui		For pain management
Electric cranial drill	Nanjing  Darwin biotechnology	20180090018	Making a burr hole on the skull
EP tube	Nantong Surui		Transfer autologous blood
Erythromycin eye cream	Yunnan pharmacy		Eyes protection
HE dye liquor	Solarbio	G1120	For HE staining
Heating pad	Dangerous Jungle	JR01	Keeping warm
Heparin sodium injection	Chengdu Haitong Pharmacal Company	190701	Preparing heparin diluent
IndoPhors	Guoyao of China		Sterilization
Isoflurane	RWD	20080701	Inducing and maintaining anesthesia
Light dark box	Jiangsu Saiangsi		For neurological deficit scores
Micro-injection pump	Baoding Leifu	TFD03-01-C	Injection of autologous blood
MRI system	Philips		Confirmation of infarction in vivo
Needle holder	Shanghai Jinzhong	J32020	Surgicl instruments
Penicilin	Guoyao of China		Infection Prevention
Q-tips	Jiangxi Songhe		Surgicl instruments
Scalp heedle	Jiangxi Hongda	20200313	Withdraw autologous blood from the tail vein
Scalpel	Shanghai Kaiyuan	170902	Surgicl instruments
Shearing scissors	Shanghai Jinzhong	Y00040	Surgicl instruments
Stereotaxic apparatus	RWD	900-00001-00	for surgical positioning
Surgical towel	Xinxiang Huakangweicai	20070601	Surgicl instruments
Suture needle	Shanghai Jinzhong		Surgicl instruments
Suture scissors	Shanghai Jinzhong	J25041	Surgicl instruments
Tissue holding forcepts	Shanghai Jinzhong	J31080	Surgicl instruments