Summary

Massieve Pontine bloeding door dubbele injectie van autologe bloed

Published: May 29, 2021
doi:

Summary

We presenteren een protocol om een enorm pontine bloedingsmodel in een rat vast te stellen via dubbele injectie van autoloog bloed.

Abstract

We bieden een protocol om een enorm pontine bloedingsmodel in een rat vast te stellen. Ratten met een gewicht van ongeveer 250 gram werden in deze studie gebruikt. Honderd microliters autologe bloed werd uit de staartader gehaald en stereotaxisch in de pons geïnjecteerd. Het injectieproces was verdeeld in 2 stappen: Eerst werd 10 μL bloed geïnjecteerd op een specifieke locatie, anteroposterior positie (AP) -9,0 mm; zijdelings (Lat) 0 mm; verticaal (Vert) -9,2 mm, gevolgd door een tweede injectie van het resterende bloed bij AP -9,0 mm; Lat 0 mm; Vert -9,0 mm met een interval van 20 minuten. De balansstraaltest, ledemaatplaatsingstest en de gemodificeerde Voestch-neuroscore werden gebruikt om de neurologische functie te evalueren. Magnetic Resonance Imaging (MRI) werd gebruikt om het volume van de bloeding in vivo te beoordelen. De symptomen van dit model waren in lijn met patiënten met een enorme pontinebloeding.

Introduction

Intracerebrale bloeding is goed voor een vijfde van de beroertepatiënten. De prognose van de intracerebrale bloeding hangt af van de snelheid, het volume en de locatie van de bloeding1,2. In vergelijking met de forebrain bloeding, de hersenstam bloeding heeft een hogere mortaliteit en morbiditeit3. Ongeveer 40% van de hersenstambloeding komt voor bij de pons4. De etiologie en pathofysiologie van pontinebloeding zijn heel anders en minder bestudeerd dan voorhersenenbloeding5.

Er zijn twee soorten pontine bloeding dierlijke modellen. Een daarvan is spontane bloeding model geïnduceerd door infusie van bacteriële collagenase in de pons6,7,8. Het grootste voordeel van dit model is dat het bloeden spontaan is. Collagenase kan echter slechts een klein volume pontinebloeding veroorzaken. Trouwens, collagenase kan andere verwondingen aan de hersenen veroorzaken. Het andere model wordt geïnduceerd door stereotactische injectie van autologe bloed in de pons9. Het voordeel van dit model is dat het gemakkelijk te beheersen is met een hoog slagingspercentage. Theoretisch kunnen onderzoekers elk volume bloed injecteren in elke locatie van pons. Vanwege de teruglekkage door de naaldroute is het geïnjecteerde volume echter beperkt. Onlangs is de methode met dubbele injectie bevorderd om de ruglekkage te verminderen9. Deze methode injecteert autologe bloed twee keer met een interval van 20 minuten tussen de injecties. De methode met dubbele injectie wordt toegepast om een milde (30 μL) en matige (60 μL) pontinebloeding te veroorzaken, maar geen massale pontinebloeding. In de kliniek hebben de meeste pontinebloedingpatiënten met een slechte prognose een enorme bloeding (meer dan 10 ml).

In de vorige studie hebben we een protocol verstrekt om een pontine ischemisch beroertemodel vast te stellen bij rat10. In deze studie wijzigen we de bestaande dubbele injectiemethode en bieden we een gedetailleerd protocol om een massale pontinebloeding bij een rat te veroorzaken door dubbele injectie van 100 μL autologe bloed op twee verschillende locaties in de pons.

Protocol

Het protocol werd herzien en goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committee van het Tweede Aangesloten Ziekenhuis van guangzhou Medical University. Ratten werden geleverd door het Animal Center van de Southern Medical University. Het experimentele ontwerp is weergegeven in figuur 1. 1. Dier en instrumenten Gebruik 8 weken oude mannelijke Sprague-Dawley ratten met een gewicht van 250 ± 10 g. Huisvest de ratten ten minste 7 dage…

Representative Results

In totaal werden 25 dieren gebruikt, 3 voor controle, 6 voor 30 μL, 6 voor 60 μL en 10 voor 100 μL bloedinjecties. Een rat die een injectie van 100 μL autologe bloed (1/10) kreeg, stierf binnen 24 uur na de operatie. Gedragstests werden uitgevoerd op dag 1, dag 3, dag 7 en dag 14 na de operatie. De scores voor de controlegroep en bloedinjectiegroepen op verschillende tijdspunten na de operatie zijn weergegeven in tab…

Discussion

In deze studie hebben we een protocol verstrekt om een enorm pontinebloedingsratmodel te genereren. Dit model kan worden gebruikt voor het onderzoek naar het pathofysiologische mechanisme en de prognose van een massale pontinebloeding.

Tijdens het experiment werden 25 ratten gebruikt, waarvan er slechts één stierf. De verificatie van MRI, grove anatomie en de HE-kleuring gaven aan dat deze methode een zeer laag sterftecijfer en een hoog slagingspercentage had. Om een enorm pontinebloedingsmo…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Deze studie werd financieel ondersteund door de National Science Foundation of China (81471181 en 81870933) en het Opening Lab Program van Guangzhou Medical University (0506308) aan Y Jiang, en door de National Science Foundation of China (81701471) en het Scientific Program of Guangzhou Municipal Health Commission (20191A011083) aan Z Qiu, en door de National Science Foundation of China (81501009) aan L Wu.

Materials

100ml Saline solution Guangdong yixiang 191222201 C1 Preparing heparin diluent
100μl Microinjector Shanghai Gaoge Injection of autologous blood
1ml Syringe Jiangsu Zhiyu 20191014 Withdraw autologous blood from the tail vein
75% Alcohol Shandong Lierkang Disinfection of rat tail
Adhesive tape Shanghai Jinzhong Surgicl instruments
Animal anesthesia system RWD R510-31S-6 Inducing and maintaining anesthesia
Balance beam Jiangsu Saiangsi For neurological deficit scores
Blades Shanghai Feiying 74-C For gross anatomy
Bone cement Shanghai Xinshiji 20180306 Surgicl instruments
Brain tank Shenzhen LEIYEA For gross anatomy
Butorphanol tartrate Jiangsu Hengrui For pain management
Electric cranial drill Nanjing  Darwin biotechnology 20180090018 Making a burr hole on the skull
EP tube Nantong Surui Transfer autologous blood
Erythromycin eye cream Yunnan pharmacy Eyes protection
HE dye liquor Solarbio G1120 For HE staining
Heating pad Dangerous Jungle JR01 Keeping warm
Heparin sodium injection Chengdu Haitong Pharmacal Company 190701 Preparing heparin diluent
IndoPhors Guoyao of China Sterilization
Isoflurane RWD 20080701 Inducing and maintaining anesthesia
Light dark box Jiangsu Saiangsi For neurological deficit scores
Micro-injection pump Baoding Leifu TFD03-01-C Injection of autologous blood
MRI system Philips Confirmation of infarction in vivo
Needle holder Shanghai Jinzhong J32020 Surgicl instruments
Penicilin Guoyao of China Infection Prevention
Q-tips Jiangxi Songhe Surgicl instruments
Scalp heedle Jiangxi Hongda 20200313 Withdraw autologous blood from the tail vein
Scalpel Shanghai Kaiyuan 170902 Surgicl instruments
Shearing scissors Shanghai Jinzhong Y00040 Surgicl instruments
Stereotaxic apparatus RWD 900-00001-00 for surgical positioning
Surgical towel Xinxiang Huakangweicai 20070601 Surgicl instruments
Suture needle Shanghai Jinzhong Surgicl instruments
Suture scissors Shanghai Jinzhong J25041 Surgicl instruments
Tissue holding forcepts Shanghai Jinzhong J31080 Surgicl instruments

References

  1. Charidimou, A., et al. Brain hemorrhage recurrence, small vessel disease type, and cerebral microbleeds: A meta-analysis. Neurology. 89 (8), 820-829 (2017).
  2. Tao, C., et al. A novel brainstem hemorrhage model by autologous blood infusion in Rat: White Matter Injury, Magnetic Resonance Imaging, and Neurobehavioral features. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 25 (5), 1102-1109 (2016).
  3. Ichimura, S., et al. Surgical treatment for primary brainstem hemorrhage to improve postoperative functional outcomes. World Neurosurgery. 120, 1289-1294 (2018).
  4. Behrouz, R. Prognostic factors in pontine haemorrhage: A systematic review. European Stroke Journal. 3 (2), 101-109 (2018).
  5. Guo, X., et al. Brainstem iron overload and injury in a rat model of brainstem hemorrhage. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 29 (8), 104956 (2020).
  6. Chung, Y., Haines, S. J. Experimental brain stem surgery. Neurosurgery Clinics of North America. 4 (3), 405-414 (1993).
  7. Lekic, T., Tang, J., Zhang, J. H. A rat model of pontine hemorrhage. Acta Neurochirurgica Supplement. 105, 135-137 (2008).
  8. Lekic, T., et al. Evaluation of the hematoma consequences, neurobehavioral profiles, and histopathology in a rat model of pontine hemorrhage. Journal of Neurosurgery. 118 (2), 465-477 (2013).
  9. Shrestha, B. K., et al. Rat brainstem hemorrhage model: Key points to success in modeling. World Neurosurgery. 117, 106-116 (2018).
  10. Luo, M., Tang, X., Zhu, J., Qiu, Z., Jiang, Y. Establishment of acute pontine infarction in rats by electrical stimulation. Journal of Visualized Experiments. (162), (2020).
  11. Wu, L., et al. Keep warm and get success: The role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model. Brain Research Bulletin. 101, 12-17 (2014).

Play Video

Cite This Article
Tang, X., Wu, L., Luo, M., Qiu, Z., Jiang, Y. Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood. J. Vis. Exp. (171), e62089, doi:10.3791/62089 (2021).

View Video