Summary

자동 혈액의 이중 주입에 의한 대규모 폰틴 출혈

Published: May 29, 2021
doi:

Summary

우리는 자가 혈액의 이중 주입을 통해 쥐에 거대한 pontine 출혈 모델을 설정하는 프로토콜을 제시한다.

Abstract

우리는 쥐에 거대한 pontine 출혈 모델을 설정하는 프로토콜을 제공합니다. 약 250 그램의 무게 쥐는이 연구에서 사용 되었다. 백 마이크로리터의 자가 혈액은 꼬리 정맥에서 가져와 입체적으로 폰에 주입되었습니다. 주사 과정은 2단계로 나뉘었다: 첫째, 10 μL의 혈액은 특정 위치, anteroposterior 위치 (AP) -9.0 mm로 주입되었다; 측면(Lat) 0mm; 수직(Vert) -9.2 mm, AP-9.0 mm에 위치한 잔류 혈액의 제2 주입; 위도 0mm; 20분 간격으로 -9.0mm를 정점하십시오. 밸런스 빔 테스트, 사지 배치 테스트 및 수정된 Voestch 신경 점수는 신경 기능을 평가하는 데 사용되었습니다. 자기 공명 화상 진찰 (MRI)는 생체 내출혈의 부피를 평가하기 위하여 이용되었습니다. 이 모형의 현상은 거대한 pontine 출혈을 가진 환자와 일치했습니다.

Introduction

인트레이스레브랄 출혈은 뇌졸중 환자의 1/5을 차지합니다. 무추적 출혈의 예후는 출혈1,2의속도, 볼륨 및 위치에 따라 달라집니다. 뇌출혈과 비교하여 뇌간 출혈은 사망률이 높고이환율3이더 높습니다. 뇌간 출혈의 약 40%는 폰4에서발생합니다. pontine 출혈의 병인학 및 병리학은 뇌 출혈5보다매우 다르고 덜 연구된다.

퐁틴 출혈 동물 모델의 두 종류가 있습니다. 하나는6,7,8에서세균 콜라게나아제의 주입에 의해 유도된 자발적인 출혈 모델이다. 이 모델의 가장 큰 장점은 출혈이 자발적이라는 것입니다. 그러나 콜라게나아제는 소량의 폰틴 출혈만 유발할 수 있습니다. 게다가, 콜라게나아제는 두뇌에 그밖 상해를 일으키는 원인이 될 수 있습니다. 다른 모델은 폰9에자가 혈액의 스테레오테 삽입에 의해 유도된다. 이 모델의 장점은 높은 성공률로 마스터하기 쉽다는 것입니다. 이론적으로, 연구원은 폰의 어떤 위치에 혈액의 어떤 볼륨을 주입할 수 있습니다. 그러나, 바늘 경로를 통한 백 누설로 인해 주입된 부피가 제한됩니다. 최근에는 이중 주입 방법이배분방지9를감소시키는 방법을 추진하고 있다. 이 방법은 주사 사이의 20 분 간격으로 두 번 자가 혈액을 주입합니다. 이중 분사 방법은 온화한(30 μL) 및 중간(60 μL) 폰틴 출혈을 유도하기 위해 적용되지만 대규모 폰틴 출혈은 유발되지 않습니다. 클리닉에서, 가난한 예후를 가진 pontine 출혈 환자의 대다수는 거대한 출혈이 있습니다 (10 mL 이상).

이전 연구에서는, 우리는 쥐10에서pontine 허혈성 뇌졸중 모델을 설정하는 프로토콜을 제공했다. 본 연구에서는, 기존의 이중 주입 방법을 수정하고, 폰의 두 개의 다른 위치에서 100 μL 자가 혈액의 이중 주입에 의해 쥐에서 대규모 pontine 출혈을 유도하는 상세한 프로토콜을 제공한다.

Protocol

이 프로토콜은 광저우 의과 대학 제 2 부속 병원의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 검토되고 승인되었습니다. 쥐는 남부 의과 대학의 동물 센터에 의해 제공되었다. 실험 설계는 도 1에도시되어 있다. 1. 동물 및 계측기 250 ± 10g의 8주된 남성 스프라그-Dawley 쥐를 사용하십시오. 쥐를 25°C의 주변 온도, 65%, 12/12-h 의 밝은-암흑 주기로 통?…

Representative Results

총 25마리의 동물이 사용되었고, 3마리는 대조를 위해, 30 μL에 6마리, 60 μL, 100μL 혈액 주사에 10마리가 사용되었다. 자가 혈액 (1/10)의 100 μL 주입을 받은 한 쥐는 수술 후 24 시간 이내에 사망했습니다. 행동 검사는 수술 후 1 일, 3 일, 7 일 및 14 일째에 실시되었습니다. 수술 후 다른 시점에서 대조군 및 혈액 주사 그룹에 대한 점?…

Discussion

본 연구에서는, 우리는 거대한 pontine 출혈 쥐 모형을 생성하는 프로토콜을 제공했습니다. 이 모형은 거대한 pontine 출혈의 병리학 적인 기계장치 그리고 예후에 대한 연구에 사용될 수 있습니다.

실험 내내 25마리의 쥐가 사용되었고, 그 중 한 마리만 죽었습니다. MRI의 확인, 총 해부학, 그리고 HE 염색이 방법은 매우 낮은 사망률과 높은 성공률을 가지고 있음을 나타냈다. 거대한…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 연구는 중국 국립 과학 재단 (81471181 및 81870933)과 광저우 의과 대학 (0506308)의 오프닝 랩 프로그램 (0506308)과 중국 국립 과학 재단 (81701471)과 광저우 시 보건위원회 (20191A011083)의 과학 프로그램 및 중국 국립 과학 재단 (81501009)에 의해 재정적으로 지원되었습니다.

Materials

100ml Saline solution Guangdong yixiang 191222201 C1 Preparing heparin diluent
100μl Microinjector Shanghai Gaoge Injection of autologous blood
1ml Syringe Jiangsu Zhiyu 20191014 Withdraw autologous blood from the tail vein
75% Alcohol Shandong Lierkang Disinfection of rat tail
Adhesive tape Shanghai Jinzhong Surgicl instruments
Animal anesthesia system RWD R510-31S-6 Inducing and maintaining anesthesia
Balance beam Jiangsu Saiangsi For neurological deficit scores
Blades Shanghai Feiying 74-C For gross anatomy
Bone cement Shanghai Xinshiji 20180306 Surgicl instruments
Brain tank Shenzhen LEIYEA For gross anatomy
Butorphanol tartrate Jiangsu Hengrui For pain management
Electric cranial drill Nanjing  Darwin biotechnology 20180090018 Making a burr hole on the skull
EP tube Nantong Surui Transfer autologous blood
Erythromycin eye cream Yunnan pharmacy Eyes protection
HE dye liquor Solarbio G1120 For HE staining
Heating pad Dangerous Jungle JR01 Keeping warm
Heparin sodium injection Chengdu Haitong Pharmacal Company 190701 Preparing heparin diluent
IndoPhors Guoyao of China Sterilization
Isoflurane RWD 20080701 Inducing and maintaining anesthesia
Light dark box Jiangsu Saiangsi For neurological deficit scores
Micro-injection pump Baoding Leifu TFD03-01-C Injection of autologous blood
MRI system Philips Confirmation of infarction in vivo
Needle holder Shanghai Jinzhong J32020 Surgicl instruments
Penicilin Guoyao of China Infection Prevention
Q-tips Jiangxi Songhe Surgicl instruments
Scalp heedle Jiangxi Hongda 20200313 Withdraw autologous blood from the tail vein
Scalpel Shanghai Kaiyuan 170902 Surgicl instruments
Shearing scissors Shanghai Jinzhong Y00040 Surgicl instruments
Stereotaxic apparatus RWD 900-00001-00 for surgical positioning
Surgical towel Xinxiang Huakangweicai 20070601 Surgicl instruments
Suture needle Shanghai Jinzhong Surgicl instruments
Suture scissors Shanghai Jinzhong J25041 Surgicl instruments
Tissue holding forcepts Shanghai Jinzhong J31080 Surgicl instruments

References

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Cite This Article
Tang, X., Wu, L., Luo, M., Qiu, Z., Jiang, Y. Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood. J. Vis. Exp. (171), e62089, doi:10.3791/62089 (2021).

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